Microfabricated פוסט מערך גלאים (mPADs): גישה לבודד כוחות מכניים
Summary
בסרטון זה אנו מדגימים כיצד לפברק ולנצל microfabricated גלאי מערך פוסט (mPADs) כדי להעריך מודולציות של contractility הסלולר.
Abstract
בסרטון הזה, אנו מציגים את הגישה שלנו למדוד כוחות המתיחה הסלולר באמצעות מערך microfabricated של ההודעות. כוחות גרירה נוצרות באמצעות שרירן-אקטין אינטראקציות לשחק תפקיד חשוב בפיזיולוגיה שלנו. במהלך הפיתוח, הם מאפשרים לתאי לנוע ממקום אחד למשנהו כדי ליצור את המבנים הראשונים של רקמות. כוחות גרירה לעזור בתהליכי הריפוי. הם נחוצים סגר תקין של הפצעים או הגירה זוחלת של לויקוציטים דרך הגוף שלנו. אלה אותם כוחות יכול להיות מזיק לבריאות שלנו במקרה של גרורות סרטן או צמיחה של כלי הדם אל הגידול. השיטה הנפוצה ביותר שבאמצעותה ללמוד תאים במבחנה כבר להשתמש בכוס או בצלחת קלקר. עם זאת, נוקשות של מצעים עושה את זה בלתי אפשרי מבחינה פיזית למדוד כוחות המתיחה התא, ויש שיטות מעטים יחסית ללמוד כוחות המתיחה. המעבדה שלנו פיתחה טכניקה כדי להתגבר על המגבלות האלה. השיטה מבוססת על מערך אנכי של cantilevers גמישה, את הנוקשות ואת קנה המידה של גודל אשר כזה תאים בודדים המפוזרים על פני cantilevers רבים להטות אותם בתהליך. העמודים אנו משתמשים הן 3 מיקרומטר בקוטר 10 מיקרומטר גבוה, והם מוגדרים במערך רגיל עם ריווח 9 מרכז אל מרכז מיקרומטר. אבל המימדים הללו פיזית יכולים להיות מגוונים בקלות כדי להתאים מגוון של מחקרים. אנחנו מתחילים עם מאסטר סיליקון, אבל את ההודעות הסופי עשויים גומי סיליקון שנקרא פולי (דימתיל siloxane), או PDMS. אנחנו יכולים למדוד את deflections תחת מיקרוסקופ ו לחשב את הגודל ואת הכיוון של כוחות המתיחה הנדרש כדי להפיק את deflections ציין. אנו קוראים מצעים אלה microfabricated שלאחר מערך גלאים, או mPADs. כאן, אנו יראה לכם כיצד אנו לפברק ולהשתמש mPADs להעריך מודולציות של contractility הסלולר.
Protocol
Referências
- Tan, J. L., Tien, J., Pirone, D., Gray, D. S., Chen, C. S. Cells lying on a bed of microneedles: An approach to isolate mechanical force. Proc Nat Acad Sci USA. 100, 1484-1489 (2003).
- Sniadecki, N. J., Chen, C. S., Wang, Y. L., Discher, D. E. Microfabricated Silicone Elastomeric Post Arrays for Measuring Traction Forces of Adherent Cells. Methods in Cell Biology – Cell Mechanics. 83, 313-328 (2007).
- Lemmon, C. A., Sniadecki, N. J., Ruiz, S. A., Tan, J. T., Romer, L. H., Chen, C. S. Shear Force at the Cell-Matrix Interface: Enhanced Analysis For Microfabricated Post Array Detectors. Mechanics & Chemistry of Biosystems. 2, 1-16 (2005).
