Nigral न्यूरॉन्स में एकल सेल RT-पीसीआर तकनीक का उपयोग वोल्ट gated पोटेशियम चैनल mRNA अभिव्यक्ति रूपरेखा
Summary
न्यूरॉन्स को पहली बार electrophysiologically विशेषता है. फिर दर्ज न्यूरॉन से cytoplasm से aspirated है और प्रतिलेखन – पीसीआर विश्लेषण रिवर्स neurotransmitter संश्लेषण एंजाइमों, आयन चैनल, और रिसेप्टर्स के लिए mRNAs की अभिव्यक्ति का पता लगाने के अधीन है.
Abstract
स्तनधारी केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में, विविध आणविक और कार्यात्मक विशेषताओं के साथ न्यूरॉन्स के विभिन्न प्रकार के साथ एक दूसरे को अलग करने के लिए मुश्किल और भी उनके आकारिकी द्वारा आसानी से पहचान नहीं intermingled रहे हैं. इस प्रकार, यह अक्सर मुश्किल होता है एक विशिष्ट न्यूरॉन प्रकार में जीन की अभिव्यक्ति का विश्लेषण है. यहाँ हम एक प्रक्रिया है कि एकल कोशिका रिवर्स प्रतिलेखन पोलीमरेज़ चेन प्रोफ़ाइल mRNA अभिव्यक्ति के लिए पर्याप्त nigra में न्यूरॉन्स के विभिन्न प्रकार में रिएक्शन (scRT पीसीआर) के साथ पूरे सेल पैच दबाना रिकॉर्डिंग तकनीकों को जोड़ती है दस्तावेज़. Electrophysiological तकनीकों के लिए पहली बार व्यक्तिगत न्यूरॉन्स के neurophysiological और कार्यात्मक गुणों रिकॉर्ड के लिए उपयोग किया जाता है. फिर, एक electrophysiologically विशेषता nigral न्यूरॉन्स के cytoplasm से aspirated और scRT-पीसीआर विश्लेषण के अधीन neurotransmitter संश्लेषण एंजाइमों, रिसेप्टर्स, और आयन चैनल के लिए mRNA अभिव्यक्ति प्रोफाइल प्राप्त है. उच्च चयनात्मकता और संवेदनशीलता के लिए इस पद्धति का विशेष रूप से उपयोगी है जब immunohistochemistry उपयुक्त एंटीबॉडी या कम प्रोटीन की अभिव्यक्ति के स्तर की कमी के कारण नहीं किया जा सकता है. इस विधि को भी अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों में न्यूरॉन्स के लिए लागू है.
Protocol
Discussion
scRT-पीसीआर के साथ पैच मस्तिष्क टुकड़ा में क्लैंप रिकॉर्डिंग के संयोजन हम यहाँ आयन चैनल, रिसेप्टर्स, और व्यक्तिगत विशेषता न्यूरॉन्स में neurotransmitter संश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण एंजाइमों के लिए mRNA अभिव्यक्ति प?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम एनआईएच R01DA021194 और R01NS058850 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
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