Профилирование напряжения закрытого калия Выражение мРНК канала в Nigral Нейроны использованием Одноклеточный-ПЦР методов
Summary
Нейроны первого характеризуется электрофизиологически. Затем из цитоплазмы записаны нейрона всасывается и подвергается обратной транскрипции-ПЦР-анализ для выявления экспрессии мРНК для синтеза нейромедиаторов ферменты, ионные каналы, и рецепторы.
Abstract
В млекопитающих центральной нервной системы, различных типов нейронов с различными молекулярными и функциональными характеристиками перемешаны друг с другом, трудно разделить, а также не так легко определить по их морфологии. Таким образом, часто бывает трудно проанализировать экспрессию генов в определенный тип нейронов. Здесь мы документе процедура, которая сочетает в себе целых клеток патч методы зажима записи с одноклеточных обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ПЦР-scRT) на профиль экспрессии мРНК в различных типах нейронов в существенной черная. Электрофизиологические методы впервые использована для записи нейрофизиологические и функциональные свойства отдельных нейронов. Затем, цитоплазме одной электрофизиологически характеризуется nigral нейронов всасывается и подвергается scRT-ПЦР-анализ для получения профилей экспрессии мРНК для синтеза нейромедиаторов ферментов, рецепторов и ионных каналов. Высокая селективность и чувствительность делают этот метод особенно полезен при иммуногистохимии не может быть использована из-за отсутствия подходящих антител или низкий уровень экспрессии белка. Этот метод также применим для нейронов в других областях мозга.
Protocol
Discussion
Сочетание патч зажим записи в мозг с ломтиком scRT-PCR мы продемонстрировали здесь обеспечивают превосходный метод для исследования профилей экспрессии мРНК для ионные каналы, рецепторы, и ключевые ферменты для синтеза нейротрансмиттеров в индивидуальном характеризуется нейронов. Это ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами NIH R01DA021194 и R01NS058850.
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
References
- J, . Tuning pacemaker frequency of individual dopaminergic neurons by Kv4.3L and Kchip3.1 transcription. EMBO J. 20, 5715-5724 (2001).
- Surmeier, D. J., Song, W. J., Yan, Z. Coordinated expression of dopamine receptors in neostriatal medium spiny neurons. J. Neurosci. 16, 6579-6591 (1996).
- Zhou, F. W., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Constitutively active TRPC3 channels regulate basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 28, 473-482 (2008).
- Zhou, F. W., Jin, Y., Matta, S. G., Xu, M., Zhou, F. -. M. An ultra-short dopamine pathway regulates basal ganglia output neurons. J. Neurosci. 29, 10424-10435 (2009).
- Ding, S., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. Kv3-like potassium channels are required for sustained high-frequency firing in Basal Ganglia output neurons. J. Neurophysiol. 105, 554-570 (2011).
- Zhou, F. W., Xu, J. J., Zhao, Y., Ledoux, M. S., Zhou, F. -. M. Opposite functions of histamine H1 and H2 receptors and H3 receptors in substantia nigra pars reticulata. J. Neurophysiol. 96, 1581-1591 (2006).
