G 단백질 결합 수용체에 작용제 활동 Quantifying
Summary
활성 상태 작용제의 친화력이 상수 계산하는 방법 (<em> K<sub> B</sub</em>) G 단백질 결합 수용체의이 설명되어 있습니다. 분석의 절대 또는 상대 조치를 제공합니다<em> K<sub> B</sub</em> 제정 수용체 활성화는 측정 여부에 따라 다릅니다. 우리의 방법은 수용체 활성화 다양한 응답 스트림에 적용됩니다.
Abstract
작용제는 G 단백질 결합 수용체 (GPCRs)의 인구를 활성화하면 세포 또는 조직의 반응에 culminates 신호 경로를 elicits. 이 과정은 하나의 수용체, 수용체의 인구, 또는 스트림 응답의 수준에서 분석할 수 있습니다. 여기 하나의 수용체의 활성 상태에 대한 지속적인 작용제 선호도의 추정치를 얻을 수있는 스트림 응답을 분석하는 방법을 설명합니다.
수용체는 quantal 스위치로 동작되는 활성 및 비활성 상태 (그림 1) 사이의 대체. 활성 상태가 특정 G 단백질 신호 또는 기타 파트너와 상호 작용합니다. 리간드의 부재에서 비활성 상태 predominates. 작용제의 바인딩은 활성 상태 (K B)에 대한 상수의 친화력은 비활성 상태 (K)에 대한보다 훨씬 더 때문에 수용체가 활성 상태로 전환됩니다 그 확률을 증가시킵니다. 의 요약인구에있는 수용체의 모든 임의의 출력 시간 수용체 활성화의 일정 수준을 산출. 절반 최대한 수용체 활성을 도출 작용제의 농도의 상호는 관찰 친화 상수 (K obs)에 해당되며, 활성 상태로 작용제 – 수용체 단지의 분율은 효능 (ε) (그림 2)로 정의됩니다.
GPCRs의 스트림 응답을 분석하는 방법은 K obs 및 작용제의 1,2의 상대적 효능의 견적을 설정하는 것이 개발되었습니다. 이 보고서에서는, 우리는 다른 작용제의 상대 작용제 K B 값을 추정이 분석을 수정하는 방법을 보여줍니다. 제정 활동을 전시 assays 위해, 우리는 M -1 절대 단위로 K B를 추정하는 방법을 보여줍니다.
작용제 농도 – 반응 곡선 3,4을 분석 우리의 방법으로 구성되어 있습니다운영 모델 5를 사용하고 글로벌 비선형 회귀니다. 우리는 소프트웨어 응용 프로그램, 프리즘 (GraphPad 소프트웨어, 주식, 샌디에고, CA)을 사용하여 프로 시저를 설명합니다. 분석 K의 제품 obs과 효능 (τ)에 비례 매개 변수 견적을 산출. 다른의에 의해 조각나 작용제의 τK obs,의 추정치는 K B의 상대 측정 (RA I) 6입니다. 제정 활동을 전시하는 수용체에 대한, 그것은 무료 수용체 복합의 효능 (τ 치세요)에 비례 매개 변수를 추정하는 것이 가능합니다. 이 경우, 작용제의 K B 값은 τK obs / τ 치세요 3 동일합니다.
우리의 방법은 수용체 subtypes에 대한 작용제의 선택도를 결정하고 다른 G 단백질을 통해 작용제 – 수용체의 신호를 quantifying하는 데 유용합니다.
Protocol
Discussion
RA I (상대 K B 값)을 계산하는 우리의 방법은 작용제 농도 – 반응 곡선의 측정을 필요로하기 때문에이 곡선이 측정 언제든지, 우리의 분석을 할 수 있습니다.
실험 준비 (예 : 세포 또는 조직)의 응답에 매일 변동이 큰 경우, 각각의 농도 – 반응 곡선의 응답 성능은의 표준 작용제의 "상위"추정 상대적 정상화 수있는 매일 매일의 실험. 상?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 건강 그랜트 GM 69,829의 국립 연구소에 의해 지원되었다.
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