En metod att expandera γδ T-celler från perifera mononukleära blodceller (PBMC) beskrivs. PBMC-derived γδ T-celler stimuleras och byggas ut med zoledronate och interleukin-2 (IL-2). Storskalig utbyggnad av γδ T-celler kan användas för autolog cellulär immunterapi av cancer.
Mänskliga γδ T-celler kan känna igen och reagera på ett brett utbud av stress-inducerade antigener, och därmed utveckla medfödda bred anti-tumör och anti-infektiösa aktivitet. 1 Majoriteten av γδ T-celler i perifert blod har Vγ9Vδ2 T cell receptorn. Dessa celler känner igen antigen i ett större histocompatibility komplex-oberoende sätt och utveckla starka cytolytisk och Th1-liknande effektorfunktioner. 1 Därför γδ T-cellerna är attraktiv kandidat effektorceller celler för immunterapi. Vγ9Vδ2 T-celler svarar på phosphoantigens t.ex. (E)-4-hydroxi-3-metyl-men-2-enyl pyrofosfat (HMBPP), som bildas i bakterier via isoprenoid biosyntes, 2 och isopentenyl pyrofosfat (IPP), som produceras i eukaryota celler genom mevalonat vägen. 3 i fysiologiska tillstånd är generering av IPP i nontransformed cellen inte tillräckligt för aktivering av γδ T-celler. Dysreglering av mevalonat vägen i tumörceller leder till ansamling av IPP och γδ T celler aktiveras. 3 Eftersom aminobisphosphonates (såsom pamidronat eller zoledronate) hämmar farnesylpyrofosfatsyntas (FPP), det enzym som agerar nedströms IPP i mevalonat väg, intracellulära nivåer av IPP och sensitibity att γδ T-celler erkännande kan vara terapeutiskt ökas med aminobisphosphonates. IPP ackumulering är mindre effektiv i nontransfomred celler än tumörceller med en farmakologiskt relevant koncentration av aminobisphosphonates, som tillåter oss immunterapi för cancer genom att aktivera γδ T-celler med aminobisphosphonates. 4 Intressant ackumuleras IPP i monocyter när PBMC behandlas med aminobisphosphonates, på grund av effektiva drog upptag av dessa celler. 5 Monocyter att IPP ackumuleras blir antigen-presenterande celler och stimulera Vγ9Vδ2 T-celler i perifert blod. 6 Baserat på dessa mekanismer, utvecklade vi en teknik för storskalig expansion av γδ T cellkulturer med zoledronate och interleukin -2 (IL-2). 7 Andra metoder för expansion av γδ T-celler utnyttja syntetiska phosphoantigens bromohydrin pyrofosfat (BrHPP) 8 eller 2-metyl-3-butenyl-1-pyrofosfat (2M3B1PP). 9 Alla dessa metoder gör ex vivo expansion, vilket resulterar i ett stort antal γδ T-celler för användning i adoptiv immunterapi. Det är dock endast zoledronate ett FDA-godkända kommersiellt tillgängliga reagens. Zoledronate-expanderade γδ T-celler visa CD27 – CD45RA – effektor minne fenotyp och dess funktion kan utvärderas av IFN-γ produktion analys 7.
Den metod som presenteras här möjliggör en effektiv expansion av γδ T-celler från PBMC. γδ T-celler aktiveras och utökas med zoledronate och IL-2 utveckla kompletta effektorfunktioner, reflekteras av cytokin produktion och cytotoxicitet. Det har rapporterats att den syntetiska phosphoantigens bromohydrin pyrofosfat (BrHPP) och 2-metyl-3-butenyl-1-pyrofosfat (2M3B1PP) också utöka γδ T-celler, men de är inte kommersiellt tillgängliga. Däremot är zoledronate redan licensierad för kliniska tillämpningar s…
The authors have nothing to disclose.
Reagent name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
ZOMETA | Novartis Pharma K. K | zoledronate | |
PROLEUKIN | Novartis Pharmaceuticals | human recombinant IL-2 | |
BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with Sodium Heparin | BD | 362753 | |
RPMI1640 | Invitrogen | 21870-076 | |
ALyS203- medium | Cell Science & Technology Institute | 0301-7 | |
OpTmizer | Invitrogen | 0080022SA | |
brefeldin A | Sigma | B5936-200UL | |
phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma | P1585-1MG | |
ionomycin | Sigma | 13909-1ML | |
IntraPrep | BECKMAN COULTER | A07803 | |
anti-human CD3-FITC or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07746 FITC A07749 PE/Cy5 |
|
anti-human CD4-ECD | BECKMAN COULTER | 6604727 | |
anti-human CD8-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607011 | |
anti-human CD14-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07765 | |
anti-human CD19-PE | BECKMAN COULTER | A07769 | |
anti-human CD45-ECD | BECKMAN COULTER | A07784 | |
anti-human CD56-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07789 | |
anti-human TCRαβ-PE | BECKMAN COULTER | A39499 | |
anti-human TCR Vγ9-FITC | BECKMAN COULTER | IM1463 | |
anti-human CD27-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607107 | |
anti-human CD45RA-ECD | BECKMAN COULTER | IM2711 | |
anti-human CD69-PE | BD | 555531 | |
anti-human NKG2D-PE | BECKMAN COULTER | A08934 | |
Anti-humal IFNγ-PE | BECKMAN COULTER | IM2717U | |
Mouse IgG1 isotype control-PE | BECKMAN COULTER | A07796 | |
Mouse IgG1 isotype control-ECD or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07797 A07798 |