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Biologia

マウスでXenografting胚細胞移植と精巣組織

Published: February 06, 2012
doi:
10.3791/3545
, ,
1Department of Comparative Biology and Experimental Medicine,University of Calgary

Summary

xenografting生殖細胞移植と精巣組織のためのプロトコルが記述されています。生殖細胞移植レシピエント精巣におけるドナー由来の精子形成の結果、精原幹細胞（SSCS）を同定するための機能の再構成アッセイを表しています。 xenografting精巣組織は、レシピエントマウスの様々なドナー種の精巣発達と精子形成を再現します。

Abstract

生殖細胞移植は、1994年1,2ペンシルベニア大学で博士ラルフBrinsterらによって開発されました。これらの画期的な研究では、レシピエント動物2でドナー由来の精子形成と精子の生産に不妊のレシピエントマウスの結果の精細管に肥沃なドナーマウスから生殖細胞のマイクロインジェクションを示した。レシピエント動物を1つ子孫にドナーハプロタイプのドナー由来の精子形成とトランスミッションの同定を可能に細菌性β-ガラクトシダーゼ遺伝子を有するドナーの男性の使用。驚くべきことに、精細管の内腔に移植後、移植した生殖細胞は精原細胞が3に位置している基底膜に内腔の区画から移動することができました。それは一般のみのSSCは、受信者の精巣におけるニッチと再確立する精子形成コロニーを形成することができることを受け入れられている。したがって、生殖細胞移植は、精巣の幹細胞ニッチを勉強すると推定される精原幹細胞を特徴づけるために機能的なアプローチを提供しています。現在までに、生殖細胞の移植は、基本的な幹細胞生物学を解明するために移植前4,5に生殖細胞の遺伝子操作を介してトランスジェニック動物を生成するために、セルトリ細胞の生殖細胞の相互作用6,7、SSCホーミングと植民地3を勉強するために使用されます8と同様に、SSCの自己複製と分化9,10。

生殖細胞の移植は大種11にも可能である。これらは、メインアプリケーションでは、妊孕性の保全、動物の個体数のエリート遺伝学の普及と、この手法で精子形成およびSSC生物学の研究で​​は、ロジスティックげっ歯類ではより困難かつ高価であるとしてトランスジェニック動物の世代です。 colonizatのマウスの結果の精細管に大きな種から生殖細胞の移植ドナー細胞と精子の拡大ではなく、系統的に遠い種12からの生殖細胞とレシピエントの体細胞コンパートメントの非互換性によるものであろう彼らの完全に分化におけるイオン。代替的アプローチは、その周囲の体細胞コンパートメントと一緒に大規模な種から生殖細胞の移植である。まず、免疫不全マウスの背部皮膚の下に移植した未熟な雄の精巣組織の小さな断片が受精有能な精子13の生産に完全に開発を生き残るためには、受けることができていることを、2002年に報告した。それ以来xenografting精巣組織は、多くの種で成功するために示されており、マウス14の大型動物の精巣発達と精子形成を研究する貴重な代替手段として浮上した。

Protocol

マウスではPART Aの生殖細胞移植 1。レシピエントマウスの準備受信者はドナー精巣細胞に（いずれかの遺伝的にドナーにマッチした、または免疫不全）、免疫学的に寛容でなければなりません。 受信者のいずれか自然に精子を欠いている（例えば、W / W Vマウス）または内因性の生殖細胞が枯渇しなければなりません。生殖細胞の枯渇は、照射?…

Discussion

1。生殖細胞移植

生殖細胞移植は、細胞集団中の精子幹細胞の存在（SSCS）の明確な確認のための唯一の機能的アッセイを提供しています。唯一のSSCはに家庭や基底膜でのSSCのニッチを植民地化とドナー由来の精子形成を開始することができます。生殖細胞移植は、前例のない形でSSCを勉強して操作することが可能になりました。技術は、SSCの4の遺伝子操作を介し?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

著者の研究室からの作業はUSDA / CSREES / NRICGP（2007-35203-18213）によってサポートされている。NIH / NCRR（2 R01 RR17359-06）、NIH / NIEHS（1 R21 ES014856-01A2）とアルバータ州革新 – 健康ソリューション。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Collagenase (type IV) Sigma C5138
Trypsin-EDTA Invitrogen 25200-056
DNaseI Sigma DN25
DMEM Invitrogen 31053-028
Trypan blue stain Invitrogen 15250-061
Nylon mesh cell strainer BD biosciences 352340 (40μm)
352350 (70μm)
Busulfan Sigma B2635
Thin-Wall Glass Capillaries World Precision Instrument TW 100-3
BD intramedic plyethylene tubing (PE100) BD CA-63018-725
Ethicon 6-0 Silk Suture Ethicon 706G
Wound clips BD 427631
Sigmacote Sigma SL2
X-gal Sigma B4252
Potassium Ferrocyanide Sigma P9387
Potassium Ferricyanide Sigma P3667
magnesium chloride Sigma 208337
sodium deoxycholate Sigma D6750
N,N-Dimethylformamide Sigma D4551
Igepal CA-630 Sigma 18896
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Referências

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Germ Cell TransplantationMiceDr. Ralph BrinsterUniversity Of PennsylvaniaMicroinjectionSeminiferous TubulesSpermatogenesisSperm ProductionDonor-derivedBacterial β-galactosidase GeneOffspringLumen Of The Seminiferous TubulesBasement MembraneSpermatogoniaSSCsStem Cell NichePutative Spermatogonial Stem CellsTransgenic AnimalsGenetic ManipulationSertoli Cell-germ Cell InteractionSSC Homing And ColonizationSelf-renewal And Differentiation
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Citar este artigo
Tang, L., Rodriguez-Sosa, J. R., Dobrinski, I. Germ Cell Transplantation and Testis Tissue Xenografting in Mice. J. Vis. Exp. (60), e3545, doi:10.3791/3545 (2012).
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