Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli
Summary
Biz kurmak nasıl göstermek<em> In vitro</em> Iskemi / reperfüzyon modeli ve nasıl postiskemik kalp hücreleri kök hücre tedavisinin etkisini değerlendirmek.
Abstract
Kök hücre naklinin klinik pratikte 1,2,3 kendi yolunu buluyor. , Daha iyi sonuçlar elde protokolleri daha güçlü hale getirmek ve implante edilebilir piller için yeni kaynaklar bulma 4,5 son araştırma odağı . Hücre tedavileri etkinliğinin incelenmesi kolay bir iş değildir ve yeni araçlar, tedavi sürecinin 6 katılan mekanizmalarının araştırılması için ihtiyaç vardır . Iskemi / reperfüzyon deneysel bir protokol, ve kök hücre nakli sonrası iskemi / reperfüzyon sırasında hücresel bağlantıları ve hatta hücre içi mekanizmaları gözlem izin ve hücre tedavisinin etkinliğini değerlendirmek amacıyla tasarlanmıştır. H9c2 cardiomyoblast hücreleri, hücre kültürü plakaları 7,8 üzerine yerleştirilir . İskemi glikoz serbest bir ortamda% 0.5 altında oksijen seviyesi ile 150 dakika ile simüle edildi. Sonra, normal medya ve oksijen seviyesi reperfüzyon simüle etmek için tekrar edilmiştir. Oksijen glikoz yoksunluk sonra,hasarlı hücreleri kültürüne ekleyerek elde edilen mezenkimal kök hücreler işaretli insan kemik iliği nakli ile tedavi edildi. Mezenkimal kök hücreleri, minimal invaziv cerrahi ile kolayca erişilebilir, kolayca genişletilebilir ve otolog, çünkü klinik çalışmalarda tercih edilir. Eş-yetiştiriciliği 24 saat sonra, hücreler canlı ve ölü hücrelerden ayırt etmek Calcein ve ethidium-homodimer ile boyandı. Bu kurulum bize konfokal floresan mikroskobu kullanarak hücrelerarası bağlantıları araştırmak ve postiskemik hücreler flow sitometri ile hayatta kalma oranını ölçmek için izin verdi. Mikroskopisi gibi hücre füzyon ve hücrelerarası nanotüpler oluşumu gibi iki hücre popülasyonlarının etkileşimleri gösterdi. Flow sitometri analizi hasarlı hücrelerinin bir grafik üzerinde çizilen ve istatistiksel analiz edilebilir 3 kümeleri ortaya çıkardı. Bu kesimler ayrı ayrı araştırılmalıdır ve sonuçlar simüle etkinliğini bu veriler üzerinde çizilebilirterapötik yaklaşım.
Protocol
Discussion
Göstermiştir protokol in vitro bir yaklaşım, böyle bir modelin tüm avantaj ve dezavantajları ile miyokard infarktüsü kök hücre tedavisi, çok daha karmaşık bir sorun. Açıkçası miyokard infarktüsü sırasında ve sonrasında meydana gelen karmaşık olayları (örneğin immünolojik) yansıtmamaktadır ancak eklendi hücreleri postiskemik hücreleri üzerinde doğrudan etkileri odaklanabilirsiniz. H9c2 cardiomyoblasts simüle iskemi etkileri çok kullanılan hücre geçiş sayısı ve O 2 kon…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma OTKA (Macarca Bilimsel Araştırma Fonu) D45933, T049621, TET (Macarca Bilim ve Teknoloji Vakfı) A4/04, Arg-17/2006 ve SIN, Bolyai, Öveges Burslar ve TÁMOP tarafından desteklenen 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 ve 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83.803. William Gesztes üzerinden ses sağlamak için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| calcein-AM | Molecular Probes | L3224, C3099 | http://www.invitrogen.com |
| ethidium homodimer-2 | Molecular Probes | L3224, E3599 | http://www.invitrogen.com |
| Vybrant DiD | Molecular Probes | V22887 | http://www.invitrogen.com |
Table 1. Reagents.
| Name of the equipment | Company | Comments (optional) |
| PeCon cell incubation system for Zeiss microscopes | PeCon GmbH | www.pecon.biz/ |
Table 2. Equipment.
Referências
- Dimmeler, S., Burchfield, J., Zeiher, A. M. Cell-Based Therapy of Myocardial Infarction. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (2008).
- Kim, S. U., de Vellis, J. Stem cell-based cell therapy in neurological diseases: A review. Journal of Neuroscience Research. 87, 2183-21 (2009).
- Lee, K., Chan, C. K., Patil, N., Goodman, S. B. Cell therapy for bone regeneration-Bench to bedside. Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 89, 252-25 (2009).
- Gaipa, G. GMP-based CD133+ cells isolation maintains progenitor angiogenic properties and enhances standardization in cardiovascular cell therapy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 14, 1619-1619 (2010).
- Trounson, A. New perspectives in human stem cell therapeutic research. BMC medicine. 7, 29-29 (2009).
- Mazhari, R., Hare, J. M. Mechanisms of action of mesenchymal stem cells in cardiac repair: potential influences on the cardiac stem cell niche. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 4, S21-S21 (2007).
- Kimes, B. W., Brandt, B. L. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Experimental Cell Research. 98, 367-367 (1976).
- Sardao, V. A. Vital imaging of H9c2 myoblasts exposed to tert-butylhydroperoxide–characterization of morphological features of cell death. BMC Cell Biol. 8, 11-11 (2007).
- Hescheler, J. Morphological, biochemical, and electrophysiological characterization of a clonal cell (H9c2) line from rat heart. Circulation research. 69, 1476-1476 (1991).
- Cselenyak, A. Mesenchymal stem cells rescue cardiomyoblasts from cell death in an in vitro ischemia model via direct cell-to-cell connections. BMC Cell Biol. 11, 29-29 (2010).
- Sauvant, C. Implementation of an in vitro model system for investigation of reperfusion damage after renal ischemia. Cell Physiol Biochem. 24, 567-567 (2009).
- Namas, R. A. Hypoxia-Induced Overexpression of BNIP3 is Not Dependent on Hypoxia-Inducible Factor 1alpha in Mouse Hepatocytes. Shock. 36, 196-196 (2011).
- Cao, L. Hypoxia/Reoxygenation Up-Regulated the Expression of Death Receptor 5 and Enhanced Apoptosis in Human Hepatocyte Line. Transplantation Proceedings. 38, 2207-2207 (2006).
- Meloni, B. P., Meade, A. J., Kitikomolsuk, D., Knuckey, N. W. Characterisation of neuronal cell death in acute and delayed in vitro ischemia (oxygen-glucose deprivation) models. Journal of Neuroscience Methods. 195, 67-67 (2011).
- Mimeault, M., Hauke, R., Batra, S. K. Stem cells: a revolution in therapeutics–recent advances in stem cell biology and their therapeutic applications in regenerative medicine and cancer therapies. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 82, 252-252 (2007).
- Angoulvant, D. Mesenchymal stem cell conditioned media attenuates in vitro and ex vivo myocardial reperfusion injury. J Heart Lung Transplant. 30, 95-95 (2010).
- Lim, Y. J., Zheng, S., Zuo, Z. Morphine Preconditions Purkinje Cells against Cell Death under In Vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Conditions. Anesthesiology. 100, 562-562 (2004).
- Guo, J. Estrogen-receptor-mediated protection of cerebral endothelial cell viability and mitochondrial function after ischemic insult in vitro. J Cereb Blood Flow Metab. 30, 545-545 (2010).
