Die Verwendung von Zystometrie in kleine Nagetiere: A Study of Bladder Chemosensorik
Summary
Zystometrie ist eine hocheffiziente Technik zur Funktion der Blase von kleinen Tieren zu messen<em> In vivo</em>. Die Blase wird kontinuierlich mit Raten durch eine intravesikale Katheters kontrolliert, während die Harnröhre bleibt frei für Miktion infundiert. Dies ermöglicht eine wiederholte Füllen und Entleeren der Blase, während intravesikale Druck und Volumen ungültig erfasst werden.
Abstract
<p class="jove_content"> Die unteren Harntraktes (LUT) Funktionen als dynamisches Reservoir, das in der Lage, den Urin zu speichern und effizient zu vertreiben es zu einem geeigneten Zeitpunkt ist. Während des Speicherns Urin, jedoch wird die Blase über einen längeren Zeitraum, um Abfallprodukte ausgesetzt. Indem sie als dichte Barriere, vermeidet der epithelialen Auskleidung der LUT, das Urothel, Re-Absorption von Schadstoffen. Darüber hinaus stimulieren schädlichen Chemikalien der Blase nozizeptive Innervation und initiieren Miktion Kontraktionen der Blase Inhalte zu vertreiben. Interessanterweise hat der Blase Empfindlichkeit gegenüber schädlichen Chemikalien erfolgreich in der klinischen Praxis eingesetzt, durch intravesikal Infusion der TRPV1-Agonisten Capsaicin neurogenen Blasenüberaktivität behandeln<sup> 1</sup>. Dies unterstreicht den Vorteil, sich die Blase als chemosensorischen Orgel und fordert für die weitere klinische Forschung. Allerdings, ethische Fragen schränken die Möglichkeiten durchzuführen, bei Menschen, die invasive Messungen, die erforderlich sind, um die molekularen Grundlagen der LUT klinische Pharmakologie zu entwirren sind. Eine Möglichkeit, diese Einschränkung zu überwinden, ist die Verwendung von mehreren Tiermodellen<sup> 2</sup>. Hier beschreiben wir die Umsetzung der Zystometrie bei Mäusen und Ratten, eine Technik, die die Messung der intravesikale Druck unter den Bedingungen der kontrollierten Blase Perfusion ermöglicht.</p><p class="jove_content"> Nach Laparotomie wird ein Katheter in der Blase implantiert Kuppel und subkutan zur interskapularen Region getunnelt. Dann wird die Blase kann mit einer kontrollierten Geschwindigkeit befüllt werden, während die Harnröhre frei bleibt für Miktion. Während der sich wiederholenden Zyklen der Befüllung und Entleerung können intravesikale Druck über die implantierten Katheter gemessen werden. Als solche kann die Druckänderungen quantifiziert und analysiert werden. Darüber hinaus ermöglicht die gleichzeitige Messung des Volumens ungültig Unterscheidungsmerkmal Miktion Kontraktionen aus nicht Miktion Kontraktionen<sup> 3</sup>.</p><p class="jove_content"> Wichtig ist, aufgrund der Unterschiede in Harnen Steuerung zwischen Nagern und Menschen weisen zystometrischen Messungen in diesen Tieren nur begrenzte translatorische Wert<sup> 4</sup>. Dennoch sind sie ganz maßgeblich an der Studie von Blasenkrebs Pathophysiologie und Pharmakologie in der experimentellen präklinischen Einstellungen. Neuere Forschungen mit dieser Technik hat die Schlüsselrolle der neuartigen molekularen Akteure in den mechano-und Chemo-sensorischen Eigenschaften der Blase enthüllt.</p>
Protocol
Ein. Laboratory Animals Tiere (Mäuse, Ratten) in einem spezialisierten Tier-Anlage mit einer 12-Stunden-Hell-Dunkel-Zyklus und ad libitum Zugang zu Wasser und Standard Futterpellets untergebracht. Sowohl Alter und Geschlecht der Tiere sind wichtige Parameter, die standardisiert sein sollte entsprechend den Bedürfnissen. Wir führen typischerweise Zystometrie in 10 – 12 Wochen alten weiblichen Tieren 5,6. Alle Tierexperimente wurden in Übereinstimmung mit den europäischen Unio…
Discussion
Die Zystometrie hier vorgestellte Technik ermöglicht die Durchführung in vivo Messungen der Blasenfunktion in Tiermodellen. Ratten sind wahrscheinlich die am häufigsten verwendete Tiermodell. Mäuse sind schwieriger zu handhaben, bieten aber den Vorteil der Verwendung genmanipulierter Tiere. Wegen der technischen Schwierigkeiten bei der Verwendung bewusste Mäuse, die sehr aktiv zu sein, was zu Lockerung der implantierten Katheter und Veränderungen in den intra-abdominalen Druck, die intravesikale Druck bee…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse von der belgischen Bundesregierung (IUAP P6/28), der Research Foundation-Flandern (FWO) (G.0565.07 und G.0686.09), der Astellas European Foundation Award 2009 und dem Research Council der KU Leuven unterstützt (GOA 2009/07, EF/95/010 und PFV/10/006). PU und wir sind Doktoranden der Research Foundation-Flanders (FWO). MB ist ein Marie-Curie-Stipendiat. DDR eine grundlegende-klinischen Stipendiat der FWO.
Materials
| Name of the reagent | Commercial name, company, | Catalogue number | Comments |
| urethane | Urethane, Sigma-Aldrich | 315419 | group 2B carcinogen |
| isoflurane | Isoba, Schering-Plough Animal Health | ||
| polyethylene catheter | Intramedic Polyethylene tubing PE50, Becton Dickinson | 427411 | |
| surgical microscope | Op-Mi 6, Carl Zeiss | Op-Mi 6 | |
| purse-string suture | Prolene 6/0, Ethicon | 8610H | |
| fascia and skin suture | Ethilon 4/0 or 5/0, Ethicon | 662G or 661G | |
| postoperative analgesics | Temgesic, Schering-Plough Animal Health | dosage for rats: 0.05 mg/kg | |
| amplifier | 78534c monitor, Hewlett Packard | ||
| analytical balances and balance data acquisition software | FZ 300i, A&D | FZ-300i | |
| infusion pumps | pump 33, Harvard apparatus | HA33 | |
| cystometry recording system | Dataq instruments, DI-730 series and Windaq/Lite | DI-730-USB Windaq/Lite | |
| temperature registration | Fluke 52 KJ thermometer | 52 KJ | |
| pressure transducers | Edwards Lifesciences, pressure monitoring set | T322247A |
Referências
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Citar este artigo
Uvin, P., Everaerts, W., Pinto, S., Alpízar, Y. A., Boudes, M., Gevaert, T., Voets, T., Nilius, B., Talavera, K., De Ridder, D. The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation. J. Vis. Exp. (66), e3869, doi:10.3791/3869 (2012).