Isolamento e cultura primária de células hepáticas de ratos
Summary
Hepatócitos primários proporcionar uma ferramenta valiosa para avaliar as funções bioquímicas, moleculares, e metabólicas em um sistema fisiologicamente relevante experimental. Nós descrevemos um protocolo confiável para rato em perfusão de fígado in situ, que sempre gera hepatócitos viáveis até to1.0 × 10<sup> 8</sup> Células por preparação com viabilidade celular entre 88 ~ 96%.
Abstract
Cultura primária de hepatócitos é uma ferramenta valiosa que tem sido amplamente utilizada na pesquisa básica da função hepática, doença de fisiopatologia, farmacologia e outros assuntos relacionados. O método baseado em duas etapas perfusão colagenase para o isolamento de hepatócitos intactas foi introduzido pela primeira vez por Berry e amigo em 1969 1 e, desde então, passou por muitas modificações. A técnica mais vulgarmente utilizado foi descrito por Seglenin 1976 2. Essencialmente, os hepatócitos são dissociados ratos adultos anestesiados por uma perfusão de colagenase não-recirculação através da veia portal. As células isoladas são então filtrada através de um filtro de tamanho de poro 100 uM de nylon de malha, e cultivadas em placas de. Após 4 horas de cultura, o meio é substituído com meio contendo soro ou isento de soro, por exemplo, HepatoZYME-SFM, por um tempo adicional para a cultura. Esses procedimentos exigem passos cirúrgicos e de cultura estéril, que pode ser melhor demonstrada por vídeo do que pelo texto. Here, nós documentamos os passos detalhados para estes procedimentos por vídeo e protocolo escrito, que permitem de forma consistente na geração de hepatócitos viáveis em grandes números.
Protocol
Discussion
Cultura primária de hepatócitos é um modelo de vitro amplamente utilizado para estudar vários aspectos da fisiologia do fígado e da patologia. Por exemplo, a cultura principal é usado para avaliar a expressão e função de enzimas metabolizadoras de drogas de citocromos P450, incluindo metabolismo de drogas, droga-droga e interações, os mecanismos de citotoxicidade e genotoxicidade 3-7. O protocolo descrevendo isolamento e cultura de células hepáticas de ratos é adaptado a partir…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer ao Sr. Josh Basford e Dr. Xiao Li-min para assistência técnica. Este trabalho foi financiado em parte pelo NIH subvenções (DK70992 e DK92779 ao ML).
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