Isolierung und Primärkultur von Ratten Leberzellen
Summary
Primäre Hepatozyten ein wertvolles Instrument, um biochemische, molekulare und metabolische Funktionen in einem physiologisch relevanten experimentellen Systems zu evaluieren. Wir beschreiben ein zuverlässiges Protokoll für Ratte in situ Leberperfusion, die konsequent erzeugt lebensfähigen Hepatozyten bis bis 1,0 × 10<sup> 8</sup> Zellen pro Präparat mit der Lebensfähigkeit der Zellen zwischen 88 ~ 96%.
Abstract
Primäre Hepatozyten-Kultur ist ein wertvolles Werkzeug, die ausgiebig in der Grundlagenforschung der Leberfunktion, Krankheiten, Pathophysiologie, Pharmakologie und anderer verwandter Fächer eingesetzt. Das Verfahren auf Zwei-Schritt-Kollagenase-Perfusion für die Isolation von intakten Hepatozyten Basis wurde erstmals von Berry und Freund in 1969 1 eingeführt und seit damals hat viele Veränderungen durchgemacht. Das am häufigsten verwendete Technik wurde von Seglenin 1976 2 beschrieben. Im Wesentlichen sind Hepatozyten getrennt von erwachsenen Ratten betäubt durch eine nicht rezirkulierenden Kollagenase Perfusion durch die Pfortader. Die isolierten Zellen werden dann durch ein 100 um Porengröße Mesh Nylonfilter filtriert und auf Platten kultiviert. Nach 4-Stunden-Kultur wird das Medium mit serumhaltigem oder serumfreiem Medium, z. B. HepatoZYME-SFM, für eine längere Kultur ersetzt. Diese Verfahren erfordern chirurgische und sterile Kultur Schritte, die besser von Video werden als durch Text kann unter Beweis gestellt. Here, dokumentieren wir die detaillierten Schritte für diese Verfahren sowohl von Video-und schriftlichen Protokoll, das konsequent erlauben bei der Erzeugung von lebensfähigen Hepatozyten in großen Stückzahlen.
Protocol
Discussion
Primärkultur von Hepatozyten ist ein in vitro Modell in großem Maße verwendet, um verschiedene Aspekte der Leber Physiologie und Pathologie zu studieren. Zum Beispiel wird Primärkultur verwendet, um die Expression und Funktion der Wirkstoff-Enzyme einschließlich Cytochrom P450, Arzneimittel-Metabolismus, Wechselwirkungen zwischen Medikamenten, und die Mechanismen der Zytotoxizität und Genotoxizität 3-7 zu bewerten. Das Protokoll beschreibt die Isolierung und Kultur von Ratten-Leberzellen ausge…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren danken Herrn Dr. Josh Basford und Xiao-Min Li, um technische Unterstützung zu danken. Diese Arbeit wurde zum Teil durch Zuschüsse NIH (DK70992 DK92779 und zu ML) unterstützt.
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