Basis-<em> Caenorhabditis elegans</em> Methoden: Synchronisatie-en-
Summary
Het gemak van het behoud en het uitdragen van de nematode<em> C. elegans</em> Maken het een leuk model organisme om mee te werken. De mogelijkheid synchronisatie wormen kan het werken met een aanzienlijke hoeveelheid onderwerpen aan dezelfde ontwikkelingsfase, wat maakt de studie van een bepaald proces veel dieren.
Abstract
Onderzoek naar de Ontwikkelings-en Moleculaire biologie van de nematode Caenorhabditis elegans is begonnen in de vroege jaren zeventig door Sydney Brenner en het is sindsdien veelvuldig gebruikt als modelorganisme 1. C. elegans bezit essentiële eigenschappen als eenvoud, transparantie en korte levenscyclus hebben gemaakt dat het een geschikte experimentele systeem voor fundamenteel biologisch onderzoek voor vele jaren 2. Ontdekkingen in deze nematode heeft grote gevolgen, omdat vele cellulaire en moleculaire processen die de dieren ontwikkeling zijn evolutionair geconserveerd 3.
C. elegans levenscyclus gaat door middel van een embryonale fase en vier larvale stadia voordat de dieren volwassen zijn. Ontwikkeling kan 2 tot 4 dagen te afhankelijk van de temperatuur. In elk van de fasen een aantal kenmerkende eigenschappen waar te nemen. De kennis van de complete cellijn 4,5 samen met de diepe annotation van zijn genoom maken van dit aaltje in een groot model in uiteenlopende gebieden als de neurobiologie 6, de vergrijzing 7,8, stamcelbiologie 9 en kiembaan biologie 10.
Een extra functie dat C. maakt elegans aantrekkelijk model te werken met de mogelijkheid om populaties wormen gesynchroniseerd in een bepaald stadium met een relatief eenvoudige protocol. Het gemak van onderhoud en propageren van deze nematode toegevoegd om de mogelijkheid van synchronisatie een krachtig middel grote hoeveelheden wormen, die kunnen worden gebruikt voor een groot aantal kleine of high-throughput experimenten zoals RNAi schermen, microarrays, massieve sequencing verkrijgen, immunoblot of in situ hybridisatie, onder anderen.
Door de transparantie C. elegans structuren kunnen worden onderscheiden onder de microscoop met differentieel interferentie contrast microscopie, ook bekend als micro Nomarskikopiëren. Het gebruik van een fluorescerende DNA bindmiddel DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenylindool) bijvoorbeeld kan leiden tot de specifieke identificatie en lokalisatie van individuele cellen alsmede subcellulaire structuren / defecten worden herkend.
Protocol
Discussion
Nematode Synchronisatie
Verschillende oplossingen bleken zijn beschreven. We hebben geprobeerd vijf verschillende recepten (Tabel I) en, in onze handen, ze toonde geen significante verschillen in de synchronisatie van worm populaties (afb. 1). Maar onze experimenten toonden aan dat zoals temperatuur (Fig. 2), de verhouding bleekoplossing: volume van wormen (fig. 3) en het volume van M9 met de embryo's geïncubeerd broedeier…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Auteurs willen MICINN (PTA programma ter ondersteuning van Montserrat Porta de la Riva), AGAUR (PhD Fellowship aan Laura Fontrodona), Instituto de Salud Carlos III (Miguel Servet programma ter ondersteuning van Julián Cerón), en Marie Curie-IRG, ISCIII en IDIBELL te erkennen voor de financiering van het lab.
Referências
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genética. 77, 71-94 (1974).
- Wood, W. B. . The nematode Caenorhabditis elegans. , (1988).
- Potts, M. B., Cameron, S. Cell lineage and cell death: Caenorhabditis elegans and cancer research. Nat. Rev. Cancer. 11, 50-58 (2011).
- Kimble, J., Hirsh, D. The postembryonic cell lineages of the hermaphrodite and male gonads in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 70, 396-417 (1979).
- Sulston, J. E., Horvitz, H. R. Post-embryonic cell lineages of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).
- Hobert, O. Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans. WormBook. , 1-24 (2010).
- Depuydt, G., Vanfleteren, J. R., Braeckman, B. P. Protein metabolism and lifespan in Caenorhabditis elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 81-107 (2010).
- Jia, K., Levine, B. Autophagy and longevity: lessons from C. elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 47-60 (2010).
- Joshi, P. M., Riddle, M. R., Djabrayan, N. J., Rothman, J. H. Caenorhabditis elegans as a model for stem cell biology. Dev. Dyn. 239, 1539-1554 (2010).
- Waters, K. A., Reinke, V. Extrinsic and intrinsic control of germ cell proliferation in Caenorhabditis elegans. Mol. Reprod. Dev. 78, 151-160 (2011).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. , (2006).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev. Biol. 8, 49 (2008).
- Olahova, M. A redox-sensitive peroxiredoxin that is important for longevity has tissue- and stress-specific roles in stress resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19839-19344 (2008).
- Voisine, C. Identification of potential therapeutic drugs for huntington’s disease using Caenorhabditis elegans. PLoS One. 2, e504 (2007).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genética. 161, 1101-1112 (2002).
- Aceves, J., Erlij, D., Martinez-Maranon, R. The mechanism of the paralysing action of tetramisole on Ascaris somatic muscle. Br. J. Pharmacol. 38, 602-607 (1970).
- Shaham, S. Methods in cell biology. Wormbook. , (2006).
- Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbardm, E. J. Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition. Genética. 163 (1), 115-132 (2003).
- Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).
