Böcek hemocytes böcek tüm gelişim aşamalarında immün ve non-immün hem de pek çok önemli fonksiyonları, yürütmek. Hemocyte türleri ve işlev Bizim bugünkü bilgi böcek genetik modeller üzerinde çalışmalar geliyor. Burada, biz, ayıklanması ve niceleme yabani tırtıllar gelen hemocytes görselleştirmek için bir yöntem mevcut.
Böcek hemocytes (memeli beyaz kan hücreleri eşdeğer) bir böceğin yaşam döngüsü 1 boyunca birçok fizyolojik olayda önemli bir rol oynamaktadır. Lepidoptera (güveler ve kelebekler) ve Diptera (gerçek sinekler) emrine ait böceklerin larva evrelerinde hemocytes lenf bezi (özel hematopoetik organı) veya embriyonik hücrelerden oluşur ve erişkin aşamasına kadar yapılabilir. Embriyonik hemocytes inflamasyon sırasında gelişen ve kemotaksis düzenlenmesi sırasında hücre göçü katılmaktadırlar. Onlar da hücre apoptozu katılabilir ve embriyogenesis 2 için gereklidir. Hemocytes, hücre yayılması, hücre agregasyonu, nodül oluşumu, fagositoz ve yabancı işgalciler 3 kapsülleme gibi çeşitli fonksiyonları içeren böcek doğal immün yanıtın hücresel kolu arabuluculuk. Bunlar pr gibi, aynı zamanda enfeksiyon sırasında belirli böcek humoral savunma düzenlemekten sorumludur, antimikrobiyal peptitler ve diğer efektör moleküller 4, 5 oduction. Hemocyte yapısının ve fonksiyonunun başlıca meyve sineği, Drosophila melanogaster 6, 7, sivrisinekler Aedes aegypti ve Anopheles gambiae 8, 9 ve tütün hornworm, Manduca Sexta 10, 11 de dahil olmak üzere, genetik ya da fizyolojik böcek modellerinde çalışıldığı edilmiştir. Ancak, çok az bilgi şu anda çeşitliliği, sınıflandırılması, morfolojisi ve özellikle non-model böcek türleri, yaban 12 toplanan olanlarda hemocytes işlevi hakkında var.
Burada yabani tırtıllar gelen hemocytes ayıklamak için basit ve etkili bir protokol açıklar. Biz sondan instar Lithacodes Fasciola (sarı-omuzlu slug güvesi) (Şekil 1) ve Euclea delphinii (dikenli meşe slug) tırtılların (Lepidoptera: Limacodidae) kullanın ve gösteriyor ki hemolimf, yeterli miktarda (böcek kan)izole edilmiş ve hemocyte sayıda bireysel larva sayılabilir. Bu yöntem, verimli bir şekilde bu tür hem de tarla hasat ilgili diğer lepidopteran tırtılların içinde hemocyte türleri çalışmak için kullanılabilir, ya da kolayca mikrobiyal veya parazit organizmalar ile enfeksiyonu takiben 13 hemocyte araştırmak üzere tasarlanmış imünolojik deneylerlerde ile kombine edilebilir.
Tıbben önemli böcekler ve lepidopteran modeli böceklerden hemocytes ayıklamak için Yöntemler önce 9, 14 rapor edilmiştir. Hemocyte ekstraksiyon yöntemleri böcek türlerine göre uyarlanmış, böcek ve morfolojik özellikleri gelişim aşamasında. Örneğin, Manduca larva hemolimf izolasyonu kolayca karın 15 sonuna yakın kırpma kavisli boynuz ile gerçekleştirilebilir. Sümüklüböcek tırtıllar (Limacodidae) bu karın yapıdan yoksundur Çünkü, biz küçük ölçekli s…
The authors have nothing to disclose.
TMS Bu çalışma sırasında Harlan Trust Bursu (GWU) tarafından desteklenmiştir. Alan koleksiyon için fon ve L. damızlık Fasciola ve E. delphinii JTL NSF hibe DEB 0642438 tarafından sağlanmıştır.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Micropipette puller | Sutter Instruments | P-1000 | |
Borosilicate glass tubes | Sutter Instruments | B100-50-10 | OD: 1.0, ID: 0.50 mm |
Grace’s Medium | Sigma | G8142 | |
Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | SH3007102 | Heat inactivated |
Dumont #5 Forceps | Fine science tools | 11252-40 | |
Neubauer hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
Plastic tubing | Tri-Tech | TT-3-32OD | OD: 3/32”, ID: 1/32′ |
Glass medical syringe | Fortuna Optima | D-97877 | 50 ml volume |
Blunt end needle | Small Parts | NE-162PL-25 | 16 Gauge x 1″ length |