三次元異<em> in vitroで</em卵巣がんの発生と進行中に間質相互作用の上皮>モデリング
Summary
我々は、確立するための方法論を記述する<em> in vitroで</em>卵巣線維芽細胞と正常卵巣表面または卵巣癌上皮細胞を含む異型3次元モデル。我々は、卵巣癌の開発中に発生する間質上皮の相互作用を研究するために、これらのモデルの使用について説明します。
Abstract
上皮性卵巣癌（EOCs）は、西洋社会における婦人科悪性腫瘍による死亡の主要な原因となっています。外科的治療と改善プラチナベースの化学療法の進歩にもかかわらず、40年以上1,2のEOC生存率にほとんど改善がみられた。私の腫瘍は5年生存率> 85％を持って上演しながら、ステージIII / IV疾患の生存率は<40％である。腫瘍は以前より治療可能な、3から5までの段階で検出された場合、このようにして、EOCの死亡率の高さを大幅に低減することができた。現時点では、早期の疾患発達の分子遺伝学的および生物学的根拠はあまり理解されています。具体的には、少しは、腫瘍の開始時の微小環境の役割についてはほとんど知られていない、しかしEOCs（ 例えば年齢、パリティ）の既知の危険因子には、微小環境がEOCsの初期発生に重要な役割を果たしていることを示唆している。そこで我々は、3次元異機種を開発正常な卵巣の両方と早期卵巣癌の。文化の中で、これらの細胞の寿命を延ばすために、ヒトテロメラーゼホロ酵素の触媒サブユニット酵素（hTERT）のretrovrial形質導入により不死化正常な卵巣のために、我々は、共培養した正常な卵巣表面の上皮（IOSE）と通常の間質線維芽細胞（INOF）細胞。卵巣上皮細胞形質転換、細胞内IOSE CMYC癌遺伝子の過剰発現は、再びINOF細胞と共培養の初期段階をモデル化する。これらの異型のモデルは、上皮細胞の形質転換および浸潤に対する加齢と老化の効果を調査するために使用された。ここでは、これらの3次元モデルの開発に方法論的な手順を説明し、これらの方法論は、正常な卵巣や卵巣癌組織の発達に固有のものではなく、間質と上皮細胞の相互作用が基本である場合、他の組織型を研究するために使用することができる組織の保守及びジの側面sease開発。
Protocol
Discussion
早期上皮性卵巣癌の生物学（EOC）は、あまり理解されていない。おそらく、長年にわたってこの分野の主要な障害の1つは、組織特異的疾患の起源とEOC開発における微小環境の役割の重要性の理解の欠如であった。過去数年間、EOCがおそらく異なるサブタイプの異なる細胞起源を持つ複数の異なるhistophathologicalサブタイプを持つ異質な疾患であることが明らかになってきています。たとえば、…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、医学のケック学校、米国カリフォルニア大学、ロンドン大学、英国で行われました。 KLは健康助成5 U19 CA148112-02の国立研究所によって資金を供給される。 BGはイヴアピール婦人科腫瘍学のチャリティー（英国）からのプロジェクトの助成金によって賄われていた。 UCLH / UCLで引き受け、この作品の一部は、部分的に健康のNIHR生物医学研究センターの資金調達スキームの部門から資金提供された。
Materials
| Reagent | Supplier | Catalogue Number |
| PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
| Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
| Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
| MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
| Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
| Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
| Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
| pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
| PBS | VWR | 12001-766 |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
| Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
| Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
| Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
| Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
| TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
| TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.
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