غيروي ثلاثي الأبعاد<em> في المختبر</em> نمذجة التفاعلات اللحمية-طلائي سرطان المبيض خلال بدء والتقدم
Summary
وصفنا لإنشاء منهجيات<em> في المختبر</em> غيروي نماذج ثلاثية الأبعاد تتألف من الخلايا الليفية المبيض والمبيض الطبيعي سطح خلايا سرطان المبيض أو الظهارية. نناقش استخدام هذه النماذج لدراسة التفاعلات اللحمية-الظهارية التي تحدث أثناء تطور سرطان المبيض.
Abstract
سرطان المبيض الظهاري (EOCs) هي السبب الرئيسي للوفاة من أمراض النساء الأورام الخبيثة في المجتمعات الغربية. على الرغم من التقدم في العلاجات الجراحية وتحسين الكيميائي البلاتيني، كان هناك تحسن طفيف في معدلات البقاء على قيد الحياة لEOC 1،2 أكثر من أربعة عقود. في حين المرحلة الأولى الأورام لديها معدلات البقاء لمدة 5 سنوات> 85٪، ومعدلات البقاء على قيد الحياة لمرحلة III / IV المرض هي <40٪. وبالتالي، يمكن أن ارتفاع معدلات وفيات EOC انخفضت بشكل ملحوظ إذا تم الكشف عن الأورام في وقت سابق، مراحل، أكثر قابلية للعلاج 3-5. في الوقت الحاضر، ما زال يجهل الأساس الجزيئي الوراثية والبيولوجية في وقت مبكر من مرحلة تطور المرض. وبشكل أكثر تحديدا، لا يعرف إلا القليل عن دور المكروية خلال بدء الورم، ولكن عوامل الخطر المعروفة لEOCs (مثل العمر والتكافؤ) تشير إلى أن المكروية يلعب دورا رئيسيا في نشأة الأولى من EOCs. لذلك قمنا بتطوير نماذج ثلاثية الأبعاد غيرويمن المبيض كل من الطبيعي في وقت مبكر وسرطان المبيض المرحلة. لالمبيض الطبيعي، شاركنا في سطح المبيض الطبيعي مثقف الظهارية (IOSE) والخلايا الليفية اللحمية العادي (INOF) الخلايا، الذي خلده تنبيغ retrovrial من الوحيدات الحفاز لعميم الإنزيم تيلوميراز الإنسان (hTERT) لتمديد عمر هذه الخلايا في الثقافة. في تصميم نموذج المراحل الأولى من التحول المبيض الخلايا الظهارية، overexpression من الجين الورمي CMYC في الخلايا IOSE، ومرة أخرى شارك في تربيتها مع خلايا INOF. واستخدمت هذه النماذج غيروي للتحقيق في آثار الشيخوخة والشيخوخة على التحول وغزو الخلايا الظهارية. نحن هنا وصف الخطوات المنهجية في تطوير هذه نموذج ثلاثي الأبعاد، وهذه المنهجيات ليست محددة لتنمية المبيض الطبيعي والأنسجة سرطان المبيض، ويمكن استخدامها لدراسة أنواع الأنسجة الأخرى حيث التفاعلات الخلية اللحمية والظهارية هي الأساسية جانب من جوانب صيانة الأنسجة وديsease التنمية.
Protocol
Discussion
ما زال يجهل الكثير عن بيولوجيا في مرحلة مبكرة سرطان المبيض الظهاري (EOC). ربما كان واحدا من العقبات الرئيسية في هذا المجال لسنوات عديدة وعدم فهم أصول الأنسجة محددة لهذا المرض، وأهمية دور المكروية في التنمية EOC. على مدى السنوات القليلة الماضية، وأصبح من الواضح أن EOC هو مر…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم إجراء هذا البحث في كلية كيك للطب في جامعة كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية، وجامعة كوليدج في لندن، المملكة المتحدة. ويتم تمويل KL من المعهد الوطني للمنحة الصحة 5 U19 CA148112-02. وقد تم تمويل BG المشروع من خلال منحة من المؤسسة الخيرية الاستئناف عشية الأورام النسائية (UK). وبعض هذه الأعمال التي اضطلعت في UCLH / UCL تمويل جزئي من وزارة الصحة بحوث الطبية الحيوية NIHR نظام التمويل المركز.
Materials
| Reagent | Supplier | Catalogue Number |
| PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
| Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
| Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
| MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
| Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
| Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
| Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
| pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
| PBS | VWR | 12001-766 |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
| Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
| Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
| Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
| Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
| TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
| TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.
Referências
- Jelovac, D., Armstrong, D. K. Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer. CA Cancer J. Clin. , (2011).
- Office for National Statistics. . Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).
- Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications. Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).
- Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies. PLoS Med. 5, e232 (2008).
- Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier. Cancer. 104, 1398-1407 (2005).
- Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR. Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).
- Kim, N. W., Wu, F. Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP. Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).
- Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer. Neoplasia. 12, 317-325 (2010).
- Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells. Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).
- Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers. Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).
- Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer. Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).
- Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC. Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).
- Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology. Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).
- Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers. Neoplasia. 12, 579-589 (2010).
- Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact. J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).
- Kurman, R. J., Shih, I. e. M. Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer–shifting the paradigm. Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).
