तीन आयामी heterotypic<em> इन विट्रो में</em> Stromal उपकला सहभागिता के डिम्बग्रंथि कैंसर दीक्षा और प्रगति के दौरान मॉडलिंग
Summary
हम स्थापित करने के लिए तरीके का वर्णन<em> इन विट्रो में</em> Heterotypic तीन आयामी डिम्बग्रंथि fibroblasts और सामान्य डिम्बग्रंथि सतह या डिम्बग्रंथि के कैंसर उपकला कोशिकाओं शामिल मॉडल. हम इन मॉडलों का उपयोग करने के stromal उपकला बातचीत है कि डिम्बग्रंथि के कैंसर के विकास के दौरान होने का अध्ययन करने पर चर्चा की.
Abstract
उपकला डिम्बग्रंथि के कैंसर (EOCs) पश्चिमी समाजों में स्त्रीरोगों दुष्टता से मौत का प्रमुख कारण हैं. शल्य चिकित्सा उपचार और बेहतर प्लेटिनम आधारित chemotherapies में प्रगति के बावजूद, वहाँ EOC जीवित रहने की दरों में थोड़ा सुधार चार से अधिक दशकों 1,2 के लिए किया गया है. मंच Whilst मैं ट्यूमर 5 वर्ष जीवित रहने की दर है> 85%, चरण III / चतुर्थ रोग के लिए जीवित रहने की दर 40% है. इस प्रकार, EOC के लिए मृत्यु की उच्च दर काफी अगर ट्यूमर पहले, अधिक treatable, 3-5 चरणों में पाया गया की कमी हुई सकता है. वर्तमान में, प्रारंभिक चरण रोग के विकास के आणविक आनुवंशिक और जैविक आधार खराब समझा जाता है. विशेष रूप से, छोटे ट्यूमर दीक्षा के दौरान microenvironment की भूमिका के बारे में जाना जाता है, लेकिन EOCs (जैसे उम्र और समता) के लिए जोखिम कारकों ज्ञात सुझाव है कि microenvironment EOCs के प्रारंभिक उत्पत्ति में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. इसलिए हम तीन आयामी heterotypic मॉडल विकसितदोनों सामान्य और प्रारंभिक चरण डिम्बग्रंथि के कैंसर के अंडाशय के. अंडाशय के लिए सामान्य, हम सह सुसंस्कृत सामान्य डिम्बग्रंथि सतह उपकला (IOSE) और सामान्य stromal (INOF) fibroblast कोशिकाओं, मानव टेलोमिरेज (hTERT) holoenzyme संस्कृति में इन कोशिकाओं की उम्र बढ़ाने के उत्प्रेरक सबयूनिट के retrovrial पारगमन द्वारा अमर. डिम्बग्रंथि उपकला कोशिका परिवर्तन, IOSE कोशिकाओं में CMYC ओंकोजीन की overexpression फिर, INOF कोशिकाओं के साथ सह सुसंस्कृत के प्रारंभिक चरणों मॉडल. इन heterotypic मॉडल परिवर्तन और उपकला कोशिकाओं के आक्रमण पर उम्र बढ़ने और senescence के प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया. यहाँ हम इन तीन आयामी मॉडल के विकास में methodological कदम का वर्णन है, इन तरीकों सामान्य अंडाशय और डिम्बग्रंथि के कैंसर के ऊतकों के विकास के लिए विशिष्ट नहीं हैं, और अन्य प्रकार के ऊतक का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जहां stromal और उपकला सेल बातचीत एक मौलिक हैं ऊतक रखरखाव और di पहलूsease विकास.
Protocol
Discussion
प्रारंभिक अवस्था उपकला डिम्बग्रंथि के कैंसर (EOC) के जीव विज्ञान खराब समझा जाता है. शायद कई वर्षों के लिए इस क्षेत्र में मुख्य बाधाओं में से एक रोग के ऊतक विशिष्ट मूल और EOC विकास में microenvironment की भूमिका के महत्?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध चिकित्सा के उबकना स्कूल, कैलिफोर्निया, संयुक्त राज्य अमेरिका के विश्वविद्यालय, और यूनिवर्सिटी कॉलेज लंदन, ब्रिटेन में प्रदर्शन किया था. के.एल. स्वास्थ्य अनुदान 5 CA148112 U19-02 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा वित्त पोषित है. बीजी ईव अपील स्त्रीरोगों ऑन्कोलॉजी दान (यूके) से एक परियोजना अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था. इस UCLH / UCL पर किए गए काम से कुछ आंशिक रूप से स्वास्थ्य NIHR बायोमेडिकल रिसर्च सेंटर धन योजना विभाग से धन था.
Materials
| Reagent | Supplier | Catalogue Number |
| PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
| Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
| Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
| MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
| Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
| Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
| Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
| pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
| PBS | VWR | 12001-766 |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
| Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
| Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
| Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
| Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
| TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
| TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.
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