Мы описываем методологии для установления<em> В пробирке</em> Гетеротипические трехмерных моделей содержащие яичников фибробластов и нормальной поверхности яичников или раком яичников эпителиальных клеток. Мы обсудим использование этих моделей для изучения стромальных-эпителиальных взаимодействий, которые происходят во время развития рака яичников.
Эпителиального рака яичников (EOCs) являются ведущей причиной смерти от злокачественных гинекологических в западных обществах. Несмотря на успехи хирургического лечения и улучшения на основе платины химиотерапии, наблюдается небольшое улучшение в EOC выживаемость в течение более четырех десятилетий 1,2. В то время как I этап опухоли имеют 5-летнюю выживаемость> 85%, выживаемость этап III / IV заболевания <40%. Таким образом, высокий уровень смертности для EOC может быть существенно уменьшена, если опухоль была обнаружена на ранней, более поддающихся лечению, стадиях 3-5. В настоящее время молекулярно-генетические и биологические основы раннего развития стадии заболевания изучена плохо. В частности, мало известно о роли микроокружения опухоли во время посвящения; но известные факторы риска для EOCs (например, возраст и четности) предполагают, что микроокружение играет ключевую роль в начале генезиса EOCs. Поэтому мы разработали трехмерную гетеротипические моделейкак нормальный яичник и ранней стадии рака яичников. Для нормального яичника, мы совместно культивируемых нормальных поверхности яичников эпителиального (IOSE) и нормальных стромальных фибробластов (INOF) клетки, увековеченный retrovrial трансдукции каталитической субъединицы теломеразы человека холофермента (hTERT), чтобы продлить срок службы этих клеток в культуре. Для моделирования ранних стадиях яичников эпителиального трансформации клеток, избыточная экспрессия онкогена CMYC в IOSE клетки, опять совместно культивировали с INOF клеток. Эти гетеротипические модели были использованы для изучения влияния старения и старения на трансформации и вторжение в эпителиальных клетках. Здесь мы опишем методологические шаги в развитии этих трехмерных моделей; эти методики не являются специфическими для развития нормальной ткани яичников и рака яичников, и может быть использована для изучения других типов тканей, где стромальные и эпителиальные клетки взаимодействия являются фундаментальными аспектом поддержания тканей и ди-Сиз развития.
Биология ранней стадии эпителиального рака яичников (EOC) еще плохо изучены. Возможно, одним из основных препятствий в этой области на протяжении многих лет было отсутствие понимания ткани конкретные истоки болезни, и о значимости роли микроокружения в EOC развития. За последние нескольк…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было выполнено в Кек Школы медицины Университета Калифорнии, США, и Университетского колледжа в Лондоне, Великобритания. KL финансируется Национальным институтом здравоохранения гранта 5 до 19 лет CA148112-02. BG был профинансирован проект грант от Апелляционного Ева гинекологической онкологии благотворительность (Великобритания). Часть этой работы, проделанной на UCLH / UCL был частично финансируется Департаментом здравоохранения NIHR биомедицинских исследований схему финансирования центра.
Reagent | Supplier | Catalogue Number |
PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
PBS | VWR | 12001-766 |
0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.