Modeller for Bone Metastase

Summary

Dyremodeller er ofte brukt til å studere kreft metastasering til beinet. I denne protokollen vil vi beskrive to vanligste metodene for svulst inokulering for bein metastasering studier og kort beskrive noen av analysene benyttes for å overvåke og kvantifisere disse modellene.

Abstract

Skjelettmetastaser er en vanlig forekomst i flere maligniteter, inkludert bryst, prostata og lunger. Gang etablert i bein, svulster er ansvarlig for betydelig sykelighet og dødelighet ^en. Således, er det et betydelig behov for å forstå de molekylære mekanismer som kontrollerer etablering, vekst og aktivitet av svulster i bein. Flere in vivo-modeller er etablert for å studere disse hendelsene og alle har spesifikke fordeler og begrensninger. Den mest brukte modellen benytter intrakardiale inokulering av kreftceller direkte inn i arteriell blodtilførsel av atymiske (naken) BalbC mus. Denne prosedyren kan brukes til mange forskjellige tumortyper (inkludert PC-3 prostatakreft, lungekreft og mus mammary fett pad svulster), men i dette manuskriptet skal vi fokusere på brystkreft modell, MDA-MB-231. I denne modellen benytter vi et svært bein-selektiv klone, opprinnelig hentet i Dr. Mundy gruppe i San Antonio ^2, som hsom siden blitt transfektert for GFP uttrykk og re-klonet av vår gruppe ^3. Dette klone er et bein metastatisk variant med en høy grad av osteotropism og svært lite metastaser til lunge, lever eller binyrene. Mens intrakardiale injeksjoner er mest brukt for studier av bein ² metastaser i enkelte tilfeller intratibial ⁴ eller mammary fett pad injeksjoner er mer hensiktsmessig. Intrakardiale injeksjoner er vanligvis utføres ved bruk humane tumorceller med mål om å overvåke senere stadier av metastaser, spesielt evnen til kreftceller til å arrestere i bein, overleve, spre seg, og etablere svulster som utvikler seg til kreft-indusert bein sykdom. Intratibial injeksjoner utføres dersom fokusere på forholdet mellom kreftceller og bein etter en svulst har spredning til bein, som korrelerer omtrent til etablert skjelettmetastaser. Ingen av disse modellene rekapitulerer tidlig trinn i metastatisk prosessen før emboli og oppføringtumorceller til sirkulasjonen. Om overvåkingen primærtumor vekst eller metastasering fra det primære området til beinet, så mammary fett pad vaksinasjoner er vanligvis foretrukket, men vil svært få tumorcellelinjer konsekvent metastaserer til bein fra den primære nettstedet, med 4T1 bein-fortrinnsrett kloner, en mus mammary karsinom, er unntaket ^5,6.

Dette manuskriptet detaljer inokulering prosedyrer og høydepunkter viktige skritt i Post inokulering analyser. Konkret omfatter det cellekultur, kreftcellelinjer inokulering prosedyrer for intrakardiale og intratibial vaksinasjoner, samt kort informasjon om ukentlig oppfølging av x-ray, fluorescens og histomorphometric analyser.

Protocol

1. Cell Vedlikehold Mange bein metastatisk subkloner av MDA-MB-231 finnes som har variabel tilbøyelighet for bein kolonisering og vekst. For våre eksperimenter bruker vi en klone avledet fra GFP-merket MDA-MB-231 er utviklet ved UTHSCA 2. Denne spesielle sub-klone vil danne synlige osteolytiske lesjoner på ca 3 uker etter vaksinasjon, med offer i 4 uker. Oppretthold celler i DMEM inneholdende 10% FBS og 0,1 mg / ml penicillin-streptomycin ved 37 ° C i 5-8% CO 2 7.</sup…

Discussion

Studier av tumorindusert bein sykdom stole på flere dyremodeller som de to mest brukte er intrakardiale og intratibial vaksinasjoner. I mange tilfeller intrakardiell er det beste alternativet for å studere metastaser til beinet, men det gjør ikke representerer hele metastatisk prosess, og derfor mammary fett pad eller andre orthotopic injeksjoner bør ideelt brukes mot at slutten. Kreftceller ikke metastaserer lett fra det primære stedet i de fleste studier med humane celler, og hvis så, de primært metastaserer ti…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
MDA-MB-231 human breast cancer cells	Originally ATCC-Internally cloned and selected
DMEM	GIBCO	11885
PBS	Mediatech Inc	21-040-CV
FBS	Atlas Biological	F-0050a
Trypsin	GIBCO	15400
Faxitron	Faxitron
Maestro	CRi
μCT scanner	Scanco
Athymic Nude Mice	Harlan	Fox nu -/-
Insulin Syringes (300 μl, 28.5 g)	Becton Dickinson	309300
IVIS	Caliper
Irradiated Rodent Diet	Teklad	2920x