Summary

カーボンブラックインクの血管内灌流は脳血管の信頼性の高い可視化を可能に

Published: January 04, 2013
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Summary

げっ歯類の脳の解剖学的構造の分析は、実験的な脳卒中の研究に重要な役割を果たしている。この文脈において、着色ラテックスと血管内血流は数年のための標準ツールとして考えられてきた。しかし、この技術は、その再現性を弱体化させる明確な技術的な限界を意味しています。ここでは、再現可能な方法で脳の血管を可視化するための簡単​​な方法を説明します。高コントラストの可視化と脳血管の適切な充填における左心室の心筋の結果を介して2つの市販のカーボンブラックインクの混合物の注入。我々は、正常に異なる遺伝的背景をもつマウスの脳血管地域間吻合のポイントを識別するためにこの手法を適用している。マウスでの梗塞体積を観察し、分析するための広く使用されているツール – 我々は最終的に血管染色にこの小説と単純な方法は、塩化トリフェニルテトラゾリウム(TTC)染色と組み合わせることができるという証拠を与える。

Abstract

脳血管の解剖学的構造は、脳の血行動態を決定する主要因だけでなく、虚血性侮辱後に損傷の重症度である。脳血管系は、動的にさまざまな病態生理学的な状態に応答し、それが系統間および遺伝子操作の条件下でかなりの相違を示す。本質的には、頭蓋内血管染色のための信頼性の高い技術は、虚血性脳卒中の病因を研究するために不可欠です。最近まで、さまざまなテクニックの集合は低粘度の樹脂の射出を含む脳血管系を可視化するために用いられてきた、アラルダイト、F、ゼラチン2または黒3個の炭素ことなく、様々な染料1( すなわちカーミン赤、墨)やラテックスと混合。上行大動脈を通して白いラテックス化合物の灌流は、まずコイルとJokelainen 3によって報告されている。前田 2炭を追加することにより、プロトコルを変更した脳の生理食塩水を灌流後の血管の改善されたコントラストの可視化のためのラテックス化合物からn黒インク。しかしながら、非効率的な血流と血管の不十分な充填が頻繁にラテックス化合物4の高粘度のために経験している。そこで我々は、再現可能な方法で5脳血管系を可視化するために2つの市販のカーボンブラックインク(CB1およびCB2)の混合物を用いて、シンプルで費用対効果の高い手法を説明してきました。我々は、ラテックス灌流5と比較して高い密度で有意に小さい脳血管を染色したマウスの結果におけるCB1 + CB2でその血を示している。ここでは、前方(ACA)および異なる遺伝的背景を有するマウスの血管の変化を研究するために、中大脳動脈(MCA)の間に吻合ポイントを識別するために、我々のプロトコルについて説明します。最後に、我々は、CB1を組み合わせることにより、マウスにおける一過性局所脳虚血モデルにおいて、本手法の実現可能性を実証+虚血性損傷の様々な程度のTTC染色によるCB2媒介血管染色。

Protocol

1。動物実験は、実験動物の管理と使用のためのNIHのガイドラインに従って実施され、地元当局によって承認された。すべての実験は、C57BL6 / J野生型マウスでは、ApolipoproteinE – / – (アポKO)とSV129マウス(12-16週齢、26〜30グラムの体重、実験群当たり5から6匹)を使用した。 2。着色ラテックスと脳血管の染色 EP管で1:20の割合でラテックス化合…

Representative Results

ここで説明されたプロトコルは齧歯類脳血管系の従来のラテックスベースの視覚化の技術的な限界を克服しています。 図1Aは、着色ラテックスのそれ以下の灌流を示し、腹面にのみ大型船は全体背側表面は汚れのないままに、染色されている。結果はまた、非常に可変です。 6番組のうちの1頭のみACAおよび脳の背側表面(データは示していない)上に表示され、MCAの部分的な染?…

Discussion

それは一定の圧力2,3を暗示する具体的な装置を必要としないよう手動注入によるCB1 + CB2の灌流は集中的な訓練なしで正常に行うことができる。我々のプロトコルにおける灌流成果の異質性もごくわずかです。 20虚血動物のうち、1つだけ16非虚血動物のうち、動物と3は不完全な灌流を示しています。これらのケースでは、血管の閉塞につながる生理食塩水灌流時の気泡の混入はほとん?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、ビデオ撮影の準備を整理するために彼女の優秀な技術支援とマヘシュクマーテリーためブリッタKaltwasserに感謝したいと思います。

Materials

Name of reagent Company Name Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2) Pelican, Germany 221 135
Stempelfarbe (CB1) Herlitz PBS AG, Germany 10417202
Gedeo Latex Pebeo, France 13042B

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Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular Perfusion of Carbon Black Ink Allows Reliable Visualization of Cerebral Vessels. J. Vis. Exp. (71), e4374, doi:10.3791/4374 (2013).

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