La perfusión intravascular de Carbono Negro Tinta fiable permite la visualización de los vasos cerebrales

Summary

Análisis de la anatomía cerebrovascular roedor juega un papel importante en la investigación de accidente cerebrovascular experimental. En este contexto, la perfusión intravascular con látex de color ha sido considerado como una herramienta estándar para varios años. Sin embargo, esta técnica implica distintas limitaciones técnicas, que socavan su reproducibilidad. Aquí se describe un método simple para visualizar los vasos cerebrales de una manera reproducible. La inyección de una mezcla de dos tintas negras de carbono comercialmente disponibles a través de los resultados de miocardio en el ventrículo izquierdo llenado adecuado de los vasos cerebrales, con visualización de alto contraste. Hemos aplicado con éxito esta técnica para identificar los puntos de anastomosis entre territorios vasculares cerebrales de ratones con diferentes antecedentes genéticos. Finalmente dan evidencia de que este método novedoso y sencillo para la tinción recipiente se pueden combinar con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) Tinción – una herramienta ampliamente utilizada para observar y analizar los volúmenes de infarto en ratones.

Abstract

La estructura anatómica de los vasos cerebrales es un factor determinante para la hemodinámica cerebral, así como la gravedad de la lesión después de lesiones isquémicas. La vasculatura cerebral dinámicamente responde a varios estados fisiopatológicos y presenta considerables diferencias entre cepas y bajo condiciones de manipulaciones genéticas. Esencialmente, una técnica fiable para la tinción de vasos intracraneales es esencial con el fin de estudiar la patogénesis de la apoplejía isquémica. Hasta hace poco, un conjunto de diferentes técnicas se ha empleado para visualizar la vasculatura cerebral incluyendo la inyección de resina de baja viscosidad, araldite F, gelatina mezclada con diversos colorantes ¹ (es decir, rojo carmín, India tinta) o látex con ² o ³ sin negro de carbón. La perfusión de blanco compuesto de látex a través de la aorta ascendente se ha reportado por primera Coyle y Jokelainen ^3. Maeda et al. ² han modificado el protocolo mediante la adición de carbon negro de tinta para el compuesto de látex para la visualización mejorada de contraste de los vasos después de la perfusión de solución salina del cerebro. Sin embargo, la perfusión ineficiente y llenado inadecuado de los recipientes se experimentan con frecuencia debido a la alta viscosidad del compuesto de látex ^4. Por lo tanto, se ha descrito una técnica simple y rentable utilizando una mezcla de dos tintas de carbono comercialmente disponibles negros (CB1 y CB2) para visualizar la vasculatura cerebral de una manera reproducible ^5. Hemos mostrado que la perfusión con CB1 CB2 + en ratones resulta en la tinción de los vasos cerebrales significativamente más pequeños en una densidad más alta en comparación con la perfusión de látex ^5. A continuación, describimos nuestro protocolo para identificar los puntos de anastomosis entre la parte anterior (ACA) y las arterias cerebrales medias (MCA) para el estudio de las variaciones de los vasos en ratones con diferentes antecedentes genéticos. Por último, demostrar la viabilidad de nuestra técnica en un modelo transitorio de isquemia cerebral focal en ratones mediante la combinación de CB1 +CB2 mediada recipiente de tinción con tinción con TTC en diversos grados de lesiones isquémicas.

Protocol

1. Animales Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices del NIH para el cuidado y uso de animales de laboratorio y aprobados por las autoridades locales. Para todos los experimentos, C57BL6 / J ratones de tipo salvaje, ApolipoproteinE – / – (ApoE KO) y ratones SV129 (12-16 semanas de edad, 26-30 g de peso corporal, 5-6 animales por grupo experimental) fueron utilizados. 2. La tinción de los vasos cerebrales con látex de color Pr…

Representative Results

El protocolo descrito aquí supera las limitaciones técnicas de visualización convencional a base de látex de la vasculatura cerebral de roedor. Figura 1A muestra que la perfusión de la siguiente látex coloreado, sólo los vasos grandes en la superficie ventral están manchadas, dejando la superficie dorsal sin teñir. El resultado es también muy variable. Sólo un animal de cada seis muestra la tinción parcial de la ACA y MCA el visible en la superficie dorsal del cerebro (datos no mostrados). P…

Discussion

La perfusión de CB1 + CB2 por inyección manual puede llevarse a cabo con éxito por sin entrenamiento intensivo, ya que no implica ningún dispositivo específico para implicar cierta presión ^2,3. La heterogeneidad de los resultados de perfusión en nuestro protocolo es también insignificante. Sólo 1 de cada 16 animales no isquémicas animales y 3 de cada 20 animales isquémicos han mostrado perfusión incompleta. En estos casos, la incorporación de burbujas durante la perfusión de solución salina que…

Materials

Name of reagent	Company Name	Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2)	Pelican, Germany	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, Germany	10417202
Gedeo Latex	Pebeo, France	13042B