प्रतिदीप्ति पैटर्न की जांच करने के लिए खमीर समुदाय Cryosectioning
Summary
हम ठंड और cryosectioning खमीर फ्लोरोसेंट कोशिकाओं के आंतरिक पैटर्न का पालन समुदायों के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित. मेथनॉल फिक्सिंग विधि पर निर्भर करता है और एक समुदाय के भीतर फ्लोरोसेंट प्रोटीन निष्क्रिय बिना कोशिकाओं के स्थानिक वितरण की रक्षा अक्टूबर – embedding.
Abstract
रोगाणुओं समुदायों में आम तौर पर रहते हैं. एक समुदाय के भीतर कोशिकाओं के स्थानिक संगठन और एक समुदाय के अस्तित्व समारोह को प्रभावित करने के लिए माना जाता है. Confocal और दो photon माइक्रोस्कोपी सहित ऑप्टिकल सेक्शनिंग तकनीक, बैक्टीरियल और archaeal 2,3 समुदायों के स्थानिक संगठन के अवलोकन के लिए उपयोगी साबित किया है. Confocal इमेजिंग और खमीर कालोनियों के शारीरिक सेक्शनिंग का एक संयोजन 4 कोशिकाओं के आंतरिक संगठन से पता चला है. हालांकि, प्रत्यक्ष ऑप्टिकल Sectioning confocal या दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग केवल कुछ सेल खमीर कालोनियों में गहरी परतों तक पहुँचने में सक्षम किया गया है. यह सीमा 4 खमीर कोशिकाओं से प्रकाश की मजबूत बिखरने की वजह से होने की संभावना है.
यहाँ, हम एक फिक्सिंग और Saccharomyces cerevisiae समुदायों के भीतर फ्लोरोसेंट कोशिकाओं के स्थानिक वितरण प्राप्त cryosectioning के आधार पर विधि प्रस्तुत करते हैं. हम लगानेवाला एजेंट के रूप में मेथनॉल का उपयोग करेंकोशिकाओं के स्थानिक वितरण की रक्षा के लिए. फिक्स्ड समुदायों अक्टूबर यौगिक, जमे हुए, और एक cryostat में cryosectioned के साथ घुसपैठ कर रहे हैं. अनुभागों प्रतिदीप्ति इमेजिंग समुदाय के भीतर फ्लोरोसेंट कोशिकाओं के आंतरिक संगठन का पता चलता है.
खमीर उपभेदों के लाल और हरे रंग का फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त मिलकर समुदायों के उदाहरण विधि cryosectioning फ्लोरोसेंट कोशिकाओं के स्थानिक वितरण के रूप में कि खमीर 2,3 कालोनियों के भीतर जीन की अभिव्यक्ति के रूप में अच्छी तरह से को उजागर करने की क्षमता को प्रदर्शित करता है. हालांकि हमारे Saccharomyces cerevisiae समुदायों पर ध्यान केंद्रित किया गया है, एक ही विधि का संभावित अन्य माइक्रोबियल समुदायों की जांच करने के लिए लागू किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ प्रस्तुत की प्रक्रिया खमीर समुदायों की आंतरिक संरचना का निरीक्षण करने के लिए एक रास्ता प्रदान करता है. मेथनॉल फिक्सिंग खमीर कॉलोनी 8 कठोर कदम बनाता है और कॉलोनी की अखंडता को बरकरार रखता है, ले?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उनके cryostat का उपयोग करने की अनुमति के लिए फ्रेड हचिंसन कैंसर रिसर्च सेंटर में जोनाथन कूपर लैब का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं. यह काम NIH और WM उबकना फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया. बी.एम. लाइफ साइंस रिसर्च फाउंडेशन के एक गॉर्डन और बेट्टी मूर साथी है. हम हमारे साथ अपने फिक्सिंग प्रोटोकॉल साझा के लिए डैनियल Gottschling आभारी हैं.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| 100% Methanol | J.T. Baker | 9070-01 | |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | Andwin Scientific | 4583 | |
| Whatman Grade No. 541 Quantitative Filter Paper | Whatman | 1541-047 | |
| Millipore-MF Membrane Filter | Millipore | HAWP04700 | |
| Cryostat | Leica | CM 1510 S |
Referências
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