Imagem Molecular para atingir as células progenitoras transplantadas musculares
Summary
Um meio não-invasivo para avaliar o sucesso do transplante de mioblastos é descrito. O método leva vantagem de um gene de fusão unificada repórter composto de genes cuja expressão pode ser trabalhada com diferentes modalidades de imagem. Aqui, fazemos uso de um<em> Flutuações</em> Seqüência do gene repórter para atingir as células através de imagem de bioluminescência.
Abstract
Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doença genética grave neuromuscular que afeta 1 em cada 3.500 meninos, e é caracterizada por degeneração muscular progressiva 1, 2. Em pacientes, a capacidade das células satélites do músculo residentes (SCs) para regenerar miofibras danificadas torna-se cada vez menos eficaz 4. Assim, o transplante de células progenitoras musculares (PPM) / mioblastos de indivíduos saudáveis é uma abordagem terapêutica promissora para DMD. Um grande limitação para a utilização da terapia de células-tronco, contudo, é uma falta de tecnologias de imagem fiáveis para acompanhamento a longo prazo das células implantadas, e para avaliar a sua eficácia. Aqui, nós descrevemos um método não invasivo, a abordagem em tempo real, para avaliar o sucesso do transplante de mioblastos. Este método tira vantagem de um gene repórter unificado de fusão composta de genes (a luciferase do pirilampo [flutuações], proteína fluorescente vermelha monomérica [MRFP] e SR39 timidina-quinase [sr39tk]) Expre cujossion pode ser trabalhada com diferentes modalidades de imagem 9, 10. Uma variedade de métodos de imagem, incluindo tomografia por emissão de pósitrons (PET), emissão de fóton único tomografia computadorizada (SPECT), ressonância magnética (MRI), de imagem óptica, e alta freqüência 3D ultra-som já estão disponíveis, cada um com suas vantagens e limitações 11. Bioluminescência de imagem (BLI) estudos, por exemplo, têm a vantagem de ser de custo relativamente baixo e de alto rendimento. É por este motivo que, no presente estudo, que fazem uso da luciferase do pirilampo sequência do gene (flutuações) repórter contido dentro do gene de fusão e de imagem de bioluminescência (BLI) para a localização de curto prazo de mioblastos C2C12 viáveis após a implantação num ratinho modelo de DMD (distrofia muscular no cromossomo X [mdx] mouse) 12-14. Importante, BLI nos fornece um meio para analisar a cinética de PPM rotulados pós-implantação, e vai ser útil para rastrear células repetidamente sobre tIME e migração seguinte. Nossa abordagem de gene repórter ainda nos permite mesclar várias modalidades de imagem em um único sujeito vivo, dada a natureza tomográficos, resolução espacial fina e capacidade de escalar até animais maiores e os seres humanos 10,11, PET irá formar a base do trabalho futuro que sugerem podem facilitar a tradução rápida dos métodos desenvolvidos nas células a modelos pré-clínicos e para aplicações clínicas.
Protocol
Representative Results
Discussion
Neste estudo, descrevemos uma rápida e fiável molecular imaging, a abordagem de gene repórter de mioblastos não invasiva alvo / PPM após o transplante. Embora este estudo demonstra a localização de curto prazo de PPM transplantados via bioluminescense imaging (BLI), o modo pelo qual as células são alvejados podem, de facto, ser facilmente aplicado a uma avaliação longitudinal do enxerto de células, através da implantação de células que expressam estavelmente o gene repórter. P…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer a Sanjiv Gambhir pelo dom do gene repórter fluc/mrfp/sr39tk. Este trabalho foi financiado pela Rede de Células-Tronco (SCN) do Canadá, e Fundação de Jesse Journey.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| C2C12 myoblasts | ATCC | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | Life Technologies | 12800-017 | |
| fetal bovine serum | Life Technologies | 12483020 | |
| 0.25% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25200-72 | |
| Hanks Balanced Salt Solution | Sigma Aldrich | H6648 | |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668-019 | |
| Nikon Eclipse TE2000-5 | Nikon Instruments Inc. | ||
| Xenolight D-luciferin | PerkinElmer | 122796 | 40 mg/ml in PBS |
Referências
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