Kv канала дисфункции связаны с нарушениями ритма сердца. С целью изучения молекулярных механизмов, которые приводят к таким аритмии мы используем систематическое протокол для изоляции предсердий и желудочков кардиомиоциты от Kv канала мышей вспомогательные подразделения нокаутом. Изолированные кардиомиоциты могут быть немедленно использованы для сотовых электрофизиологических исследований, биохимических или иммунофлюоресценции (ИФ) анализы.
KCNE гены кодируют для небольшой семьи из Kv канала вспомогательные подразделения, которые образуют комплексы с гетеромерных Kv канала альфа-субъединицы для изменения их функциональных свойств. Мутации в генах KCNE были обнаружены у пациентов с сердечной аритмии, такие как синдром удлиненного QT и / или фибрилляции предсердий. Тем не менее, точные молекулярные патофизиологии, что приводит к таким заболеваниям остается неуловимым. В предыдущих исследованиях электрофизиологических свойств болезнетворные мутации в этих генах в основном были изучены в гетерологичных системы экспрессии и мы не можем быть уверены, что если сообщила эффекты могут быть непосредственно переведены на родной кардиомиоцитов. В нашей лаборатории, мы используем другой подход. Мы непосредственно изучить влияние делеции гена KCNE в изолированных кардиомиоцитов из нокаутных мышей сотовой электрофизиологии – уникальный метод, который мы опишем в этом номере журнала Визуализированные эксперименты. Сердца от генетикаLLY инженерии мышей KCNE быстро вырезали и установлен на аппарате Лангендорфа путем катетеризации аорты. Бесплатные Ca 2 + в миокарде связана EGTA, и диссоциации кардиомиоцитов затем достигается ретроградной перфузии коронарных артерий со специализированным низким Ca 2 + буфер, содержащий коллагеназы. Atria, бесплатно стенки правого желудочка и левого желудочка могут быть отделены друг от микрохирургической техники. Кальций затем медленно добавляют обратно в изолированном кардиомиоцитов в нескольких шаг содержащие процедуры промывки. Предсердий и желудочков кардиомиоцитов здоровый вид, не спонтанное схватки сразу же подвергается анализу электрофизиологических патчем техника зажима или других биохимических анализов в течение первых 6 часов после изоляции.
С ростом развития генно-инженерных мышей штаммов для изучения функции сердца и сердечной патологии, связанные с удалением гена есть также возрастающий интерес в специализированных методов для изучения последствий конкретных делеции гена в лабораторных условиях. В нашей лаборат…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась за счет грантов от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), Фриц Тиссен-и-Stiftung Charité / MDC.
Name of the Reagent | Company |
Tetrodotoxin | Alomone |
4-aminopyridine | ICN Biomedicals |
Heteropodatoxin 2 | Alomone |
Tetraethylammonium | Sigma Chemicals |
Collagenase Type 2 | Worthington |