Aislamiento y grabaciones Kv Canal murinos en miocitos auriculares y ventriculares
Summary
Kv canal disfunción se asocia con arritmias cardíacas. Con el fin de estudiar los mecanismos moleculares que conducen a tales arritmias que utilizan un protocolo sistemático para el aislamiento de cardiomiocitos auriculares y ventriculares de Kv de canal ratones knockout auxiliares de subunidades. Cardiomiocitos aislados a continuación, puede ser utilizado inmediatamente para estudios electrofisiológicos celulares, bioquímicos o inmunofluorescencia (IF) ensayos.
Abstract
KCNE genes codifican para una pequeña familia de canales Kv subunidades auxiliares que forman complejos con heteroméricos Kv canal subunidades alfa para modificar sus propiedades funcionales. Las mutaciones en los genes de KCNE se han encontrado en pacientes con arritmias cardiacas tales como el síndrome de QT largo y / o la fibrilación auricular. Sin embargo, la fisiopatología precisa molecular que conduce a estas enfermedades sigue siendo difícil de alcanzar. En estudios previos de las propiedades electrofisiológicas de la enfermedad que causa mutaciones en estos genes han sido estudiados principalmente en sistemas de expresión heterólogos y no podemos estar seguros de si los efectos reportados directamente se puede traducir en cardiomiocitos nativos. En nuestro laboratorio, por lo tanto, utilizar un enfoque diferente. Nuestros estudiar los efectos de la supresión de genes KCNE en cardiomiocitos aislados de los ratones knockout de electrofisiología celular – una técnica única que se describe en este número de la Revista de experimentos visualizados. Los corazones de la geneticaLLY diseñaron ratones KCNE se extirparon rápidamente y se montaron en un aparato Langendorff por canulación aórtica. Gratis Ca 2 + en el miocardio está obligado por EGTA, y la disociación de los miocitos cardíacos se consigue después de una perfusión retrógrada de las arterias coronarias con un especializado bajo Ca 2 + que contiene tampón de colagenasa. Atria, la pared libre del ventrículo derecho y el ventrículo izquierdo se puede separar por técnicas de microcirugía. El calcio se añade entonces lentamente de nuevo a cardiomiocitos aislados en un paso múltiple que comprende procedimiento de lavado. Cardiomiocitos auriculares y ventriculares de apariencia sana sin contracciones espontáneas son entonces inmediatamente se sometió a análisis electrofisiológicos mediante la técnica de patch clamp o otros análisis bioquímicos dentro de las primeras 6 horas después del aislamiento.
Protocol
Representative Results
Discussion
Con el desarrollo creciente de cepas de ratón genéticamente modificados para el estudio de la función cardiaca y la patología cardíaca relacionada con una deleción del gen también hay un creciente interés en métodos especializados para estudiar los efectos de la deleción del gen específico in vitro. En nuestro laboratorio se estudia el papel de una familia de canales Kv subunidades accesorias sobre la repolarización cardiaca. Los genes KCNE comprenden una familia de 5 genes (KCNE1-5)</e…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por becas de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), Fritz Thyssen-Stiftung y Charité / MDC.
Materials
| Name of the Reagent | Company |
| Tetrodotoxin | Alomone |
| 4-aminopyridine | ICN Biomedicals |
| Heteropodatoxin 2 | Alomone |
| Tetraethylammonium | Sigma Chemicals |
| Collagenase Type 2 | Worthington |
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