凋亡细胞清除过程中实时成像<em>果蝇</em>胚胎发育
Summary
在这里，我们描述了一个有效的方法，研究凋亡细胞间隙的动态<em>在体内</em>。这种方法采用生活<em>果蝇</em>作为一个强大的监控模型，使用特定的标记凋亡细胞和巨噬细胞吞噬的凋亡细胞胚胎。
Abstract
适当的消除不必要的或异常细胞通过细胞凋亡和随后吞噬（凋亡细胞间隙）在所有后生生物的正常发育是至关重要的。凋亡细胞的清除是一个高度动态的过程密切相关的细胞死亡;勉强看到unengulfed凋亡细胞在体内正常情况下。为了了解凋亡细胞清除的不同步骤和比较“专业”的巨噬细胞-巨噬细胞和树突状细胞的'非专业' -组织居民相邻的细胞在体内的实时成像的过程，是极其宝贵的。在这里，我们描述了一个协议，在现场的果蝇胚胎研究凋亡细胞清除。要遵循不同的步骤，在我们使用特定的标记凋亡细胞和巨噬细胞的吞噬功能的动态。此外，我们可以监视两个巨噬细胞系统并行：“专业”的巨噬细胞和半专业图片ssional在发展中的中枢神经系统（CNS）的神经胶质细胞。这里介绍的方法采用了果蝇胚胎作为一个很好的模型实时研究凋亡细胞清除。
Introduction
适当的消除不需要的或异常的细胞通过细胞凋亡及随后的吞噬作用，胚胎发育，以及在成年组织的平衡是至关重要的。细胞吞噬凋亡细胞或凋亡细胞的清除是一个高度动态的过程，这四个步骤进行：（1） 招聘吞噬细胞的细胞凋亡（'发现'），（2） 承认的细胞吞噬的目标（ '吃'）和（3）的吞噬 ，随后由（4） 吞噬体的成熟和退化的细胞凋亡粒子1-5。吞噬细胞有两种类型：“专业的”巨噬细胞和未成熟树突状细胞，和“非专业组织驻地相邻的细胞，这是至关重要的凋亡细胞的清除过程中后生动物发展6,7。
在果蝇发育，消除多余的细胞通过细胞凋亡发生在3米的主要阶段，首先在中期到晚期胚胎，然后在蛹中旬，并再次在成年早期。胚胎发育过程中细胞凋亡的颗粒被去除由专业的吞噬细胞，巨噬细胞，由“非专业外胚层和神经胶质8,9。
在我们以前的工作中，我们已经确定了，六微米下吞噬受体（捷联惯组），这是吞噬细胞在胚胎发育过程中表达。我们使用模拟子产生吞噬细胞的人群（ 模拟cytGFP的 ）使我们能够监视巨噬细胞，外胚层和神经胶质细胞，同时在现场发育中的胚胎8的特异性指标。此外，通过使用在不同阶段的细胞凋亡中细胞凋亡的特异性标志物，我们能够遵循的凋亡细胞的清除在体内的动态。
Protocol
Representative Results
Discussion
凋亡细胞的间隙是一个关键的细胞凋亡，这是高度动态的最后阶段。因此，实时研究的过程中是非常重要的。在这里，我们描述了一个协议，使凋亡细胞清除在监视居住开发果蝇胚胎。在此过程中，必须使用特定标记的凋亡细胞和吞噬细胞的标记两个细胞群体。该模拟cytGFP记者是适合于监测吞噬细胞的巨噬细胞，神经胶质细胞和外胚层，同时在相同的胚胎， 瓦特 HICH使得它可?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
支持这项工作是由居里夫人重返格兰特（IRG249084）。感谢所有成员的Kurant实验室。
Materials
| Reagent | |||
| Annexin V | Molecular Probes | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Molecular Probes | L-7528 | |
| Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
| Material | |||
| Capillary tubing | FHC | 30-30-0 | |
| Cell Strainer | SPL | 93100 | |
| Paintbrush |
Referências
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