사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em> 초파리</em> 배아
Summary
여기에서 우리는 사멸 세포 간극의 역학을 공부하는 효과적인 방법을 설명<em> 생체 내</em>. 이 방법은 살고 채용<em> 초파리</em> 사멸 세포와 대 식세포의 특정 레이블을 사용하여 세포 사멸 세포의 감시 식균 작용을위한 강력한 모델로 배아.
Abstract
세포 사멸 및 후속 식균 작용을 통해 원치 않는 또는 비정상적인 세포의 적절한 제거는 (사멸 세포 간극) 모든 후생 생물의 정상적인 발달을 위해 중요합니다. 사멸 세포 간극은 밀접하게 세포의 죽음과 관련된 매우 역동적 인 과정이다 unengulfed 사멸 세포는 거의 정상적인 조건 하에서 생체 내에서 볼 수 있습니다. 사멸 세포 간극의 여러 단계를 이해하고 '전문'식세포와 비교하기 위해 -에 대 식세포와 수지상 세포를 '비 전문'- 조직 상주 이웃 세포 프로세스의 생체 라이브 이미징은 매우 중요합니다. 여기에서 우리는 라이브 Drosophila의 배아에서 세포 사멸 세포 간극 공부를위한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 사멸 세포와 대 식세포에 대한 특정 마커를 사용 식균 작용에서 여러 단계의 역학을 따르십시오. 또한, 우리는 병렬로 두 개의 식세포 시스템을 모니터링 할 수 있습니다 : '전문'대 식세포와 '반 profe개발 중추 신경계 ssional '아교 (CNS). 여기에 설명 된 방법은 사멸 세포 간극의 실시간 연구를위한 훌륭한 모델로 Drosophila의 배아를 사용합니다.
Introduction
세포 사멸 및 후속 식균 작용을 통해 원치 않는 또는 비정상적인 세포의 적절한 제거는 배아 발달뿐만 아니라 성인에서 조직의 항상성을 위해 중요합니다. 사멸 세포 또는 사멸 세포 간극의 식균 작용은 네 단계로 진행 매우 역동적 인 과정이다 : 사멸 세포에 대한 식세포 (1) 모집 ( '찾기 – 나'), 식균 작용의 대상으로 셀 (2) 인식 ( '- 저를 먹고')와 (3) engulfment, 세포 사멸 입자 1-5 (4) phagosome에 성숙과 분해에 의해 따랐다. '전문'대식 세포와 미성숙 수지상 세포, 그리고 '비 직업적인'조직 상주 이웃 세포 후생 개발 6,7시 사멸 세포 통관을 위해 매우 중요하다 할 : 식세포의 두 가지 유형이 있습니다.
초파리 개발, 세포 사멸을 통해 불필요한 세포의 제거는 삼m에서 발생늦게 배아 중반 처음으로, 그 중간 번데기, 그리고 다시 성인 초기의 아인 단계. 배아 동안 세포 사멸 입자는 '전문'식세포, 대 식세포, 그리고 '비 직업적인'외배엽과 glia의 8,9에 의해 제거된다.
우리의 이전 연구에서 우리는 배아 동안 포식 세포에서 독점적으로 표현되는 식세포 수용체의 6 미크론 언더을 (SIMU) 발견했습니다. 모사 프로모터를 사용하여 우리는 우리가 살아있는 배아 8에서 동시에 대 식세포, 외배엽과 아교를 모니터링 할 수 탐식 세포 집단 (시뮬레이션 할 cytGFP)에 대한 특정 마커를 생성합니다. 또한, 세포 사멸의 여러 단계에서 사멸 세포에 대한 특정 마커를 사용하여, 우리는 생체 내에서 사멸 세포 간극의 역학을 따라 할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
사멸 세포 간극은 매우 동적이며 세포 사멸의 중요한 마지막 단계입니다. 따라서 프로세스의 실시간 연구는 매우 중요합니다. 여기에 우리가 개발 Drosophila의 배아 집에서 사멸 세포 간극의 모니터링을 가능하게하는 프로토콜을 설명합니다. 사멸 세포 탐식이 절차에서는 세포의 두 집단은 특정 마커를 사용하여 표시해야합니다. 시뮬 cytGFP 기자가 같은 배아에서 동시에 식세포 대 식?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 마리 퀴리 재 통합 그랜트 (IRG249084)에 의해 지원되었다. 우리는 Kurant 실험실의 모든 구성원을 감사드립니다.
Materials
| Reagent | |||
| Annexin V | Molecular Probes | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Molecular Probes | L-7528 | |
| Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
| Material | |||
| Capillary tubing | FHC | 30-30-0 | |
| Cell Strainer | SPL | 93100 | |
| Paintbrush |
Referências
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