Détermination des acides gras tolérables et concentrations de toxine du choléra en utilisant des cellules épithéliales intestinales humaines et BALB / c macrophages de souris
Summary
Nous avons cherché à déterminer les concentrations tolérables de trois acides gras (acides oléique, linoléique et linolénique) et la toxine du choléra qui n'a pas incidence défavorable importante sur la survie des cellules de solubiliser les acides gras et les toxines et leur utilisation dans des essais de survie cellulaire.
Abstract
Le rôle positif des acides gras dans la prévention et la lutte contre les maladies non humains et humains ont été et continuent d'être largement documentés. Ces rôles incluent influences sur les maladies infectieuses et non infectieuses, y compris la prévention de l'inflammation, ainsi que l'immunité des muqueuses aux maladies infectieuses. Le choléra est une maladie intestinale aiguë causée par la bactérie Vibrio cholerae. Il se produit dans les pays en développement et si elle n'est pas traitée, peut entraîner la mort. Bien qu'il existe des vaccins contre le choléra, ils ne sont pas toujours efficaces et d'autres méthodes de prévention sont nécessaires. Nous avons cherché à déterminer les concentrations tolérables de trois acides gras (acides oléique, linoléique et linolénique) et la toxine du choléra en utilisant respectivement souris BALB / C macrophages et les cellules épithéliales intestinales humaines. Nous SOLUBILISE les acides gras ci-dessus et des essais de prolifération des cellules utilisées pour déterminer les gammes de concentration et les concentrations spécifiques des acides gras qui ne sontt préjudiciables à la viabilité des cellules épithéliales intestinales humaines. Nous SOLUBILISE toxine cholérique et utilisé dans un essai pour déterminer les gammes de concentration et les concentrations spécifiques de la toxine cholérique qui ne sont pas statistiquement diminue la viabilité des cellules dans des souris BALB / C macrophages.
Nous avons trouvé les concentrations d'acides gras optimale à entre 1-5 ng / ul, et que pour la toxine cholérique être <30 ng par traitement. Ces données peuvent aider les futures études visant à trouver un rôle muqueuse protectrice pour les acides gras dans la prévention ou l'atténuation des infections de choléra.
Introduction
Les avantages pour la santé des acides gras comme l'acide oléique, linoléique et linolénique ont été et continuent d'être documentés. Par exemple, l'acide oléique permet de faciliter la pénétration des médicaments lipophiles dans l'1,2 corporel, réduit de maladie coronarienne de 24% lorsqu'ils sont substitués pour les acides gras saturés 3, et est utilisé pour traiter les maladies métaboliques telles que l'adrénoleucodystrophie 4 qui est un lié à l'X trouble génétique du métabolisme des acides gras. . Même si un précurseur nécessaire pour l'acide arachidonique chez les mammifères, l'acide linoléique (contrairement à l'acide oléique) n'est pas synthétisée par l'organisme et doit être obtenue par des sources extérieures telles que la consommation de graines de lin 5 études montrent plusieurs effets bénéfiques sur la santé de l'acide linoléique telles que: propriétés anti-âge pour la peau; 6 propriétés anti-inflammatoires; 7 prolifération réduite des cellules carcinome colorectal et de la prostate; 8 et la capacité de lutter contre l'obésité et la promotion o9 acide linolénique f de la santé cardiovasculaire. joue un rôle dans la réduction de l'inflammation du parodonte, thromboxane 10 et la modulation et la biosynthèse de la prostacycline. 11
Arpita 12 a étudié l'influence des acides gras biliaires et du cholestérol sur V. expression des facteurs de virulence et la motilité de l 'cholerae. Yamasaki 13 a indiqué que l'extrait de méthanol à partir de piments rouges et d'autres composés naturellement extraites, peut potentiellement diminuer la production de la toxine du choléra. Il est concevable d'envisager l'utilisation de produits alimentaires qui sont riches en acides gras ci-dessus (comme les graines de lin) dans la prévention et la lutte contre des maladies infectieuses telles que le choléra en offrant une immunité mucosale. Nous avons mené des enquêtes pour solubiliser les acides gras et de déterminer, en utilisant des tests de prolifération cellulaire, la concentration maximale d'acides gras que les cellules épithéliales intestinales humaines peuvent tolérer sans effets néfastes sur la CEll viabilité. Nous avons supposé que les acides oléique, linoléique et linolénique ont un effet bénéfique sur la viabilité cellulaire à des concentrations plus faibles, mais que des concentrations plus élevées ils vont être toxiques pour les cellules. Nous avons également SOLUBILISE la toxine cholérique et déterminé la concentration maximale de la toxine cholérique qui BALB / C macrophages de souris peuvent tolérer sans une diminution significative de la viabilité cellulaire. Nous émettons l'hypothèse d'un effet toxique de la toxine cholérique sur la viabilité des cellules, même à très faible niveau. La méthode de solubiliser une toxine cholérique et l'utiliser pour déterminer le montant maximum de la toxine que les cellules peuvent tolérer sans une diminution significative de la survie constitue un avantage pour les études futures. Par exemple, une combinaison des méthodes ci-dessus peut être utilisé pour déterminer si les acides gras fournissent des cellules de l'immunité des muqueuses contre les infections de choléra. Au meilleur de notre connaissance, cette méthodologie rationnelle et n'a pas été explorée.
Nous discuss comment nos données préliminaires peuvent être utilisés dans de futures investigations afin de déterminer si les acides oléique, linoléique et linolénique fournir des cellules de l'immunité muqueuse contre l'infection par le choléra.
Protocol
Representative Results
Discussion
Suggestion de concentration des acides gras et la toxine du choléra
Bien que le mécanisme exact de la façon dont les acides gras améliorent l'immunité muqueuse est inconnue, plusieurs études ont tenté d'étudier leurs effets bénéfiques. Notre étude vise à fournir une méthodologie pour déterminer la concentration maximale d'acides gras que les cellules peuvent tolérer ainsi que la concentration maximale de la toxine cholérique que les cellules peuvent tolérer sans une…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions Paula Cobos et le Dr Evros Vassiliou à l'aide de laboratoire et de fournir les macrophages de souris, respectivement. Nous remercions également notre laboratoire directeur Richard Criasia de conseils et d'aide avec les matériaux. Enfin, les auteurs remercient Ramanpreet Kaur de l'aide à la production vidéo.
Materials
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 |
Referências
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
