Uno dei molti vantaggi dell’utilizzo del lievito come sistema modello è che grandi quantità di biomacromolecole, compresi gli acidi nucleici (DNA e RNA), possono essere purificate dalle cellule coltivate.
Questo video affronterà i passaggi necessari per eseguire l’estrazione dell’acido nucleico. Inizieremo delineando brevemente la crescita e la raccolta e la lisi delle cellule di lievito, che sono i primi passi comuni all’isolamento di tutte le biomacromolecole. Successivamente, discuteremo due metodi di purificazione unici per la separazione degli acidi nucleici: legame della colonna e separazione di fase. Inoltre, dimostreremo diversi modi in cui questi metodi vengono applicati in laboratorio, tra cui la preparazione di acidi nucleici per tecniche di biologia molecolare come PCR e southern blotting, quantificazione dell’espressione genica in risposta a stimoli ambientali e purificazione di grandi quantità di proteine ricombinanti.
Procedimento
Oggi ti mostreremo come purificare gli acidi nucleici da Saccharomyces cerevisiae, noto anche come lievito di birra. Gli acidi nucleici possono includere DNA o RNA. Questo video discuterà l’isolamento di queste molecole dalle cellule di lievito mediante separazione di fase e cromatografia. Sebbene esistano molti metodi diversi per purificare gli acidi nucleici dal lievito, la maggior parte di essi condivide gli stessi passaggi iniziali. Le cellule di lievito vengono prima propaga…