에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em> 초파리</em> 안테나
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
악취 물질 분자는 정확하고 조정 된 방법으로 자신의 목표 수용체에 결합한다. 각 수용체는 특정 신호를 인식하고 뇌에 정보를 중계한다. 이와 같이, 후각 정보 인식과 행동, 장점 조사를 모두 수정, 뇌에 전달하는 방법을 결정하는 단계를 포함한다. 흥미롭게도, 세포 전달 및 전사 인자는 후각 수용체 신경 세포의 다양 화에 관여하는 것을 새로운 증거가있다. 여기에서 우리는 강력한 전체가 생체 내 후각 수용체 신경 세포 조직을 분석 실험하는 면역 표시 방법을 마운트 제공합니다. 이 방법을 사용하여, 우리는 안티 ELAV 항체 알려져 팬 신경 마커 Or49a-mCD8 :: GFP, 특히 안티 GFP 항체를 사용하여 NBA의 신경 세포에서 발현 후각 수용체 신경 세포의 모든 후각 수용체 뉴런을 확인했다.
Introduction
후각 시스템은 악취 분자의 거대한 다양한 구분할이어서 높은 뇌 센터에 생성 된 정보를 전송하기 위해 사용된다. 이 입력은 정확히 같은 먹이와 짝짓기 1-6로 기본적인 동물의 동작을 제어하는 데 사용됩니다. 각각의 후각 신경 세포의 종류가 냄새의 특정 세트, 후각 수용체 뉴런의 다양 화와 연관 될 때 (ORN)의 적절한 후각 시스템 기능 7 필수적이다.
초파리 유전학 ORN 개발 및 생리 기능 8-16과 관련된 분자 메커니즘을 포함하는 단일 세포 수준의 연구를 수행하는 가능하게한다. 초파리 안테나의 전체 마운트 면역 염색은 더 자세히 후각 수용체 뉴런의 다양 화에 관련된 분자 메커니즘 (ORN)의 7을 이해할 수있게되었습니다. 여기에서 우리는 교류에 간단한 방법의 포괄적 인 설명을 제공이 hieve.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리가 설명하는 초파리 안테나의 해부는 단순하고 실험실 환경에서 수행하기 쉽습니다. 성공적인 절개를 보장하기 위해, 그것을 잘 양날 가위를 사용하는 것이 필수적입니다. 해부 안테나를 면역 염색 동안, 항체 용액의 증발을 방지하기 위해 습기가 채워진 용기들을 배양하는 것이 중요하다. 해부 안테나 솔루션에 떠있는 경향이있다. 고정 동안 PBS에서 0.1 % 트리톤을 사용하고 단계를 차…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
본 연구는 사립 대학의 전략적 연구 재단과 우리는 비디오 클립을 편집 할 수 오타케 Norihito에게 감사의 말씀을 전합니다 HT에 대한 JSPS 젊은 과학자 B 보조금에 대한 문부 과학성 – 지원 프로그램에 의해 지원되었다.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
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