Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Duftmoleküle binden an die Zielrezeptoren in einer präzisen und koordiniert. Jeder Rezeptor erkennt ein spezifisches Signal und leitet diese Informationen an das Gehirn. Als solche Bestimmung, wie Geruchsinformation an das Gehirn übertragen, Modifizieren sowohl der Wahrnehmung und des Verhaltens, Vorzüge Untersuchung. Interessanterweise gibt es Anzeichen dafür, dass Zellübertragung und Transkriptionsfaktoren sind in der Diversifizierung der Geruchsrezeptor Neuron beteiligt. Hier bieten wir eine robuste ganze montieren immunologischen Markierungsverfahren, in vivo Geruchsrezeptor Neuron Organisation zu untersuchen. Mit dieser Methode haben wir alle olfaktorischen Rezeptorneuronen identifiziert mit Anti-ELAV Antikörper, einer bekannten pan-neuronalen Marker und Or49a-mCD8 :: GFP, einem Geruchsrezeptor Neuron speziell in NBA Neuron mit Anti-GFP-Antikörper exprimiert.
Das olfaktorische System wird verwendet, um zwischen einer ungeheuren Vielfalt von Geruchsmolekülen zu unterscheiden und anschließend die sich ergebende Information zu den höheren Zentren des Gehirns zu senden. Dieser Eingang wird verwendet, um präzise zu steuern fundamentale Tierverhalten, wie Fütterung und Gegen 1-6. Da jedes Neuron Geruchstyp wird mit einem bestimmten Satz von Gerüchen, die Diversifizierung der olfaktorischen Rezeptorneuronen verbunden (ORN) s ist für die richtige Funktion olfaktorische System 7.
Drosophila-Genetik können wir Einzelzellebene Untersuchung, die molekularen Mechanismen, mit ORN Entwicklung und physiologische Funktion 8-16 zugeordnet sind. Whole Mount-Immunfärbung von Drosophila Antennen hat uns ermöglicht, im Detail zu verstehen, die molekularen Mechanismen bei der Diversifizierung der olfaktorischen Rezeptorneuronen beteiligt (ORN) s 7. Wir bieten hier eine umfassende Beschreibung einer einfachen Methode, um achieve diese.
Die Präparation des Drosophila Antennen wir beschreiben, ist einfach und leicht in einer Laborumgebung durchzuführen. Um eine erfolgreiche Präparation zu gewährleisten, ist es unerlässlich, feinkantigen Schere zu nutzen. Während der Immunfärbung seziert Antenne, ist es wichtig, sie in einer feuchtigkeitsgefüllten Behälter, um Verdunstung der Antikörperlösung zu vermeiden inkubieren. Die sezierten Antenne hat eine Tendenz, in der Lösung schweben. Verwendung von 0,1% Triton in PBS während der Fixieru…
The authors have nothing to disclose.
Diese Studie wurde von MEXT-unterstützte Programm für die strategische Forschungs Stiftung an Privatuniversitäten und JSPS Young Scientist B Zuschuss für HT Wir möchten Ohtake Norihito danken, die Videoclips zu bearbeiten unterstützt.
Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |