Tutta Monte immunomarcatura di recettore olfattivo neuroni nel<em> Drosophila</em> Antenna
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Molecole odoranti legano ai loro recettori bersaglio in modo preciso e coordinato. Ogni recettore riconosce un segnale specifico e trasmette queste informazioni al cervello. Come tale, determinando come informazioni olfattive viene trasferito al cervello, modificando sia percezione e comportamento, meriti indagine. È interessante notare, ci sono prove emergenti che i fattori di trasduzione e trascrizionali cellulari sono coinvolti nella diversificazione del neurone recettore olfattivo. Qui forniamo tutta una robusta montare metodo di etichettatura immunologico per eseguire il test in vivo olfattiva organizzazione neurone recettore. Utilizzando questo metodo, abbiamo identificato tutti i neuroni recettori olfattivi con l'anticorpo anti-ELAV, un noto marcatore pan-neurale e Or49a-mCD8 :: GFP, un neurone recettore olfattivo specificamente indicato nella Nba neurone utilizzando un anticorpo anti-GFP.
Introduction
Il sistema olfattivo viene utilizzato per distinguere tra una immensa varietà di molecole di odore e successivamente inviare le informazioni risultanti ai centri cerebrali superiori. Questo ingresso permette di controllare con precisione i comportamenti animali fondamentali, come l'alimentazione e l'accoppiamento 1-6. Poichè ogni neurone olfattivo è associato a un insieme specifico di odori, la diversificazione dei neuroni recettori olfattivi (ORN) s è essenziale per il corretto funzionamento del sistema olfattivo 7.
La genetica Drosophila ci permette di eseguire un'unica indagine a livello cellulare coinvolgendo meccanismi molecolari associati con lo sviluppo ORN e funzione fisiologica 8-16. Tutta monte immunoistochimica di Drosophila antenne ci ha permesso di capire più in dettaglio i meccanismi molecolari coinvolti nella diversificazione dei neuroni recettori olfattivi (ORN) s 7. Qui forniamo una descrizione completa di un metodo semplice per achieve questo.
Protocol
Representative Results
Discussion
La dissezione dell'antenna Drosophila descriviamo è semplice e facile da eseguire in un ambiente di laboratorio. Per garantire una dissezione successo, è indispensabile utilizzare forbici multa taglio. Mentre immunoistochimica l'antenna sezionato, è importante incubare in un contenitore pieno di umidità per evitare l'evaporazione della soluzione di anticorpi. L'antenna sezionato ha la tendenza a galleggiare nella soluzione. Uso 0.1% Triton in PBS durante la fissazione e blocco delle fasi fac…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato supportato da MEXT supportata Programma per la Fondazione per la ricerca strategica presso Università private e JSPS Young Scientist B sovvenzione per HT Vorremmo ringraziare Ohtake Norihito per modificare i video clip.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
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