In ovo Elettroporazione di embrioni di pollo

L’elettroporazione è una tecnica utilizzata nella ricerca biomedica che consente la manipolazione dell’espressione genica attraverso la consegna di materiale genetico estraneo nelle cellule. Più specificamente, in ovo l’elettroporazione viene eseguita su pulcini in via di sviluppo precoce (Gallus gallus domesticus) contenuti all’interno dei loro gusci d’uovo. In questa procedura, il DNA o i costrutti di knockdown vengono prima iniettati in un tessuto bersaglio. Tuttavia, il materiale genetico non è in grado di penetrare nella membrana plasmatica per svolgere la sua funzione all’interno della cellula. Per risolvere questo problema, viene applicato un campo elettrico, causando interruzioni temporanee della stabilità della membrana. Questo campo elettrico fa anche sì che gli acidi nucleici caricati negativamente migrino verso l’elettrodo caricato positivamente attraverso i fori nella membrana plasmatica, guidando così efficacemente il DNA o il costrutto di knockdown nella cellula. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la consegna di materiale genetico può essere localizzata in tipi di cellule isolate in specifici punti temporali dello sviluppo. Di conseguenza, i meccanismi genetici che governano gli eventi di sviluppo individuali possono essere esaminati.

Questo video fornisce una panoramica dei principi alla base dell’elettroporazione ovo e introduce gli strumenti necessari per la tecnica, inclusi aghi capillari, elettrodi e un elettroporatore. Un protocollo passo-passo per l’esecuzione della procedura viene anche presentato prima della discussione di alcuni esempi affascinanti di come la tecnica viene utilizzata per eseguire una varietà di manipolazioni genetiche negli embrioni di pollo.