Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Metoder för Jämföra Näringsämnen i Beebread Gjord av Africanized och europeiska honungsbin och Effekter på Hemolymph Protein Titrar

Published: March 17, 2015 doi: 10.3791/52448
Automatic Translation
1, 2, 3
1Carl Hayden Bee Research Center, USDA-ARS, 2Coupeville, WA, USA, 3Ecotoxicology Division, Eurofins Agroscience Services, Inc.

Abstract

Honungsbin få näring från pollen de samlar in och förvara i kupan som beebread. Vi utvecklade metoder för att kontrollera pollenkällan som bina samlar och konvertera till beebread genom att placera kolonier i en specialbyggd sluten flygområdet. Metoder har utvecklats för att analysera protein och aminosyrakompositionen för pollen och beebread. Vi beskriver också hur konsumtionen av beebread mättes och metoder som används för att bestämma vuxna arbetsbin bee hemolymph protein titrar efter utfodring på beebread för 4, 7 och 11 dagar efter uppkomst. Metoder tillämpades för att bestämma om genotyp påverkar omvandlingen av pollen att beebread och den ränta som bin konsumera och skaffa protein från den. Två underarter (europeiska och Africanized honungsbin, EHB och AHB respektive) försågs med samma pollenkällan. Baserat på de utvecklade metoder, beebread gjorts av båda underarterna hade lägre proteinkoncentrationer och pH-värden än pollen. I allmänhet aminosyra concentra i beebread fattas av EHB eller AHB var liknande och inträffade vid högre nivåer i beebread än i pollen. Både AHB och EHB konsumeras betydligt mer av beebread gjorts av AHB än genom EHB. Även EHB och AHB konsumeras liknande mängder av varje typ av beebread, hemolymfa proteinkoncentrationer i AHB var högre än i EHB. Skillnader i protein förvärvet mellan AHB och EHB kan återspegla miljö anpassningar som avser den geografiska region där varje underarter utvecklats. Dessa skillnader skulle kunna bidra till en framgångsrik etablering av AHB populationer i den nya världen på grund av effekterna på yngeluppfödning och kolonitillväxt.

Introduction

Näring spelar en grundläggande roll i hälsa och vigör honung bisamhällen och deras etablering som befolkningar. Näringsämnen från livsmedel ger energi och de biokemiska komponenter som behövs för kull uppfödning, värmereglering, födosök och immunsvar. För honung bisamhällen, de näringsämnen som behövs för att växa kolonipopulationer och bibehålla sin hälsa kommer från nektar och pollen. Nectar ger kolhydrater och pollen levererar återstående kostkrav såsom protein, lipider, vitaminer och mineraler en.

Arter av honungsbin kan variera i näringsmässigt baserade koloni nivå parametrar såsom arbetstagare livslängd, barnaskara uppfödning och mekanismer för social immunitet 2-6. Dessa skillnader kan vara kopplad till hur mat, i synnerhet pollen bearbetas av kolonin och digererades i individer. Pollen lagras i kam celler och genom mikrobiellt medierad mjölksyrajäsning är kemiskt ändras 11-14.

Här beskriver vi metoder som används för att jämföra sammansättningen och konsumtion av beebread tillverkade av olika underarter av honungsbin. Metoder för att mäta de resulterande hemolymph protein titrar i arbetstagare bin också beskrivs. Tidigare studier om näringssammansättning beebread gjordes med europeiska honungsbin (EHB) 10,15,16. Det kan dock finnas skillnader i beebread görs av bin av olika underarter även när de livnär sig på samma pollen. EHB och AHB jämfördes eftersom dessa subspecies har tydliga beteendemässiga och fysiologiska skillnader som kan ha samband med bearbetning av livsmedel och näringsämnen förvärvet 17. Några av de mest anmärkningsvärda skillnaderna är att AHB samla in och konsumerar mer pollen än EHB och verkar för att omvandla det lättare i kull 18. AHB kolonier har högre swarming hastigheter än EHB och avvika när livsmedelsresurser blir begränsade 19-23. Annars avviker är sällsynt i EHB. AHB har också högre ämnesomsättning än EHB 24. Närings grunden för skillnader i kolonin nivå mellan EHB och AHB kan vara relaterat till graden av pollen insamling och även till dess näringsinnehåll (t.ex., aminosyror och protein) efter det omvandlas till beebread. Beebread konsumtion och den resulterande protein förvärvet kan också spela en roll i skillnader i koloni nivå mellan EHB och AHB. Med hjälp av utvecklade metoder, EHB och AHB gjorde beebread från samma pollenkällan. Den beebread matades sedan tillbaka till bin av each underarter och kan avgöra om bin förvärva protein från beebread på ett sätt utmärkande för deras underarter eller till källan av beebread.

Protocol

1. Erhållande Beebread från AHB och Ehb Kolonier

  1. Placera pollenfällor på honung bisamhällen och samla pollen. Finfördela pollen till ett fint pulver (liknande pollen skjul från ståndarknappar) med användning av en kaffekvarn.
  2. Upprätta 5 kolonier vardera AHB och EHB i ett slutet flygning område (EFA), så att bina födosöker bara på pollen tillhandahålls. För att förhindra att arbetare från att bli mellan EHB och AHB kolonier, dela EFA i separata sektioner så att bina inte kan passera mellan dem. Placera enskilda EHB eller AHB kolonier med 3,500-4,000 arbetstagare bin, vax kam med nektar, honung, omogna grubbla och tom kam i varje avsnitt av EFA.
    OBS: Kolonierna inte har lagrat pollen när etablerade. Den ränta som pollen lagras kan ökas genom att inte inkludera en om drottning i kolonierna.
  3. Feed mark pollen till kolonier genom att placera en bricka med pollen i varje avsnitt av EFA. Spridning ca 60 g pollen på varje bricka så att foraging bina kan samla det som corbicular belastningar och lagra pollen i sina kolonier som beebread. Fortsätta att ge färsk pollen på varje bricka dagligen i 3 veckor.
  4. Se beebread från de europeiska kolonierna som europeisk beebread (EBB), och från Africanized kolonier som Africanized beebread (ABB).

2. Utfodring Bin i Cages

  1. Place ramar av förseglade arbetare yngel från AHB och Ehb kolonier i separata uppkomst burar i en miljö rum inställd på 32-34 ° C och 40% relativ fuktighet ..
  2. När arbetarna dyker och är ca 24 tim gammalt, etablera 12 plexiglas bioassay burar (mått = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm 3) och lägg antingen 100 nyligen dykt EHB eller 100 nyligen dykt AHB arbetstagare bin till varje bur. Placera en sektion av kam med ett känt antal antingen EBB eller ABB-sensorer (24-30 celler per bur) i varje bur för att generera följande behandlingskombinationer: AHB matad ABB, EHB matad ABB, AHB matad EBB och EHB matad EBB. (4 behandlingar; 6burar per behandling; 24 burar totalt).
  3. Lägg flaskor med vatten och en 50% honung och vatten lösning formulerats av volym till varje bur. Fyll honung och vattenflaskor dagligen för 11 dagar långa studieperioden.

3. Provtagning arbetstagare bin och Beebread och uppskattning av förbrukningen

  1. Prov 10 nyligen dykt EHB och AHB arbetare innan de placeras i burarna. Se dessa som Dag 0 bin och få dem att fungera som en utgångspunkt för hemolymph proteinkoncentrationer.
  2. Ta 10 bin från varje bur efter att de utfodrats med EBB eller ABB för 4, 7, och 11 dagar.
  3. Placera levande bin i enskilda mikrocentrifugrör och ligger på is förpackningar. Välj ett delprov av fyra bin för analys av hemolymph proteinkoncentration.
  4. Efter provtagning bin på dag-11, räkna antalet kam celler som fortfarande innehåller beebread. Detta är ett relativt mått på beebread konsumtion.
  5. Avlägsna återstående beebread från cellerna i varje bur och lagra i separåt mikrocentrifugrör enligt bur. Håll beebread proverna vid -80 ° C tills de analyserades för pH, lösligt proteinkoncentration, och aminosyrainnehåll.

4. Uppskatta pH i Pollen och Beebread

  1. Ta sex slump 0,3 g prover av pollen matas till bin i EFA och lös det i 300 il destillerat vatten. Mät pH med hjälp av en vattentät dubbel korsning pH spjut med en noggrannhet på 0,01.
  2. Ta 0,3 g prov av beebread som återstod efter 11-dagars utfodringsperioden i varje bur. Upplös beebread i 300 | il destillerat vatten och mät pH såsom beskrivits för pollen (4,1).

5. Proteinanalys

  1. Ta sex prover av pollen och ett prov av EBB och ABB från varje bur. Förvara proverna vid -20 ° C tills de analyserades för lösligt protein koncentration.
  2. Blanda 20 mg av antingen pollen eller beebread med 1000 | il 0,1 M fosfatbuffertlösning (PBS).
  3. Vortex blandningen för 10 sek och centrifugera vid 571,2 xg under 1 min.
  4. Avlägsna ett prov av den överstående lösningen och placera i brunnar i en 96 brunnars flatbotten EIA / RIA polystyrenplatta 10 pl. Replikera varje prov i tre brunnar.
  5. Rita hemolymfa från bin som samlats in från varje bur genom att föra in en 20 pl kapillärrör (som hade varit uppvärmd och drog till en nål-vass spets) i den högra sido delen av bröstkorgen nära fästpunkten av vingarna. Samla ytterligare hemolymfa, om det behövs, genom att sätta samma rör in i membranet mellan buken tergites.
  6. Tillsätt 1 pl hemolymfa till 9 pl 0,1 M PBS. Förvara hemolymfa lösningen vid -20 ° C fram till analys för lösligt protein.
  7. Bestämning av de totala lösliga proteinkoncentrationer i pollen, beebread och hemolymph prover med en kommersiell Bradford-proteinanalyssats. Följ tillverkarens instruktioner.
  8. Upprätta en standardkurva för att uppskatta lösligt protein concentration i proverna genom att mäta protein absorbans med kända proteinkoncentrationer i bovint serumalbumin (BSA). Mät protein absorbansen vid 595 nm med en spektrofotometer.

6. Aminosyraanalys

  1. Pool enskilda prover från kam celler av varje koloni för att skapa ett representativt urval av EBB och ABB för analys.
  2. Ta en 50 mg pollen eller beebread prov vägs in i småflaskor för provväxlare, och tillsätt 1 ml destillerat vatten till flaskan, tillsammans med 100 pl av en 50 ng / l intern standardlösning bestående av d 4-alanin, d 23 -lauric syra, 13 C 6-glukos och D 39 -arachidiac syra.
  3. Förslut provet och sonikeras under 5 min.
  4. Konditionera ett HLB patron genom tillsats 1 ml metanol, ekvilibrerad genom tillsats av 1 ml destillerat vatten följt av tillsats av 1 ml av beebread eller pollenprov. Tvätta patronen med 1 ml 5,0% MeOH / H2O och eluTE med 1 ml 80% MeOH / H2O
  5. Indunsta provet till torrhet under en ström av kväve. Rekonstituera provet med 50 | il pyridin och 100 | il av N, O-bis (trimetylsilyl) trifluoracetamid + Trimetylklorsilan (BSTFA + TMCS).
  6. Cap och inkubera provet vid 70 ° C under 30 minuter.
  7. Låt provet svalna och överför den till en ren autosampler flaska.
  8. Cap och placera provet i en masselektiv detektor kopplad med en gaskromatograf för att analysera prover både för flyktiga föreningar och organiska syror. Separera socker och organiska syror efter TMS derivatisering med BSTFA + TMCS användning av en kolonn (30 mx 0,25 mm id) med en 1,0 ìm filmtjocklek.
  9. Ställ in kolonnugnen vid 50 C under 2 minuter, därefter höja temperaturen linjärt till 290 ° C vid 5 C / minut. och håll i 7 min. Ställ GC injektorn och GC / MS-gränssnitt till 250 ° C och 290 ° C, respektive.
    1. Använd Helium som bärare vid en flow hastighet av 1,0 ml / min. Ställ MS källtemperaturen till 230 ° C.
  10. Tune och kalibrera masspektrometer dagligen med perfluortributylamin (PFTBA). Använd en 1 pl injektion av PFTBA i fullständig genomsökning (35-700 amu) positiv jon-läge för att få fram data om förekomsten och koncentrationer av aminosyror.

Representative Results

Beebread lagrades i -80 ° C under mindre än en månad innan de analyseras för pH och proteinkoncentration, och i ca 4 månader före aminosyraanalys. Beebread skilde sig från pollen i pH och proteinkoncentration (figur 1). PH hos beebread var lägre än pollen som var proteinkoncentrationen. Både EHB och AHB konsumerade mer ABB än EBB (Figur 2).

Nivåer av lösligt protein i hemolymfa av AHB var signifikant högre än EHB oavsett vilken typ av beebread de konsumeras (figur 3). Dessa skillnader i hemolymph proteinnivåer skedde trots EHB och AHB konsumeras liknande mängder av varje typ av beebread. Åldern på bina vid tidpunkten för provtagningen påverkas avsevärt lösliga proteinhalter i hemolymfa. Proteinhalterna var signifikant lägre i dag-4 bin jämfört med dag-7 eller 11 som inte skiljer sig åt.

_content "> Av de 10 aminosyror som är väsentliga för honungsbin, alla utom histidin upptäcktes i pollen. I de flesta fall, aminosyror koncentrationer som uppmätts i beebread var högre än i pollen (Figur 4). Till exempel koncentrationer av leucin och treonin var cirka 60% högre i beebread jämfört med pollen, och valin koncentrationerna var cirka 25% högre. alanin, var asparaginsyra, glutamin, och metionin nivåer också högre i beebread än i pollen. Aminosyror koncentrationer skiljde sig inte mycket mellan ABB och EBB med undantag av fenylalanin och cystein. fenylalanin nivåer var ungefär dubbelt så hög i ABB jämfört med antingen EBB eller pollen. cysteinkoncentrationerna var lägre i EBB jämfört med ABB eller pollen. Tryptofan var den enda aminosyran förekommer i högre koncentrationer i pollen än i EBB eller ABB. Halterna av prolin i pollen och ABB var högre än i EBB.


Figur 1: Jämförelser av pH (A) och lösliga proteinkoncentrationer (B) i pollen och beebread gjorts av europeiska (EHB) eller Africanized (AHB) honungsbin. PH hos pollen var betydligt högre än den beebread fastställt genom analys av varians (F 2,12 = 3725, p <0,0001), följt av en Tukeys W- multipla jämförelsetest. Proteinkoncentrationen i pollen var betydligt högre än i beebread gjorts av EHB (EBB) eller AHB (ABB) (F 2,27 = 16.49, p <0,0001). Medel följt av samma bokstav är inte signifikant på 0,05 nivån.

Figur 2
Figur 2: Den genomsnittliga andelen cells innehållande beebread som var helt konsumeras över en 11 dagars intervall med bur bin. Den beebread gjordes av antingen Europeiska (EHB) eller Africanized (AHB) bin använder samma pollenkällan. Medel uppskattades från fem burar i varje behandling; de med samma bokstav är inte signifikant på 0,05 nivå som bestäms av en variansanalys (F 3,16 = 7,3, p = 0,003) och Tukeys W test. Denna figur har ändrats från 25.

Figur 3
Figur 3: Den genomsnittliga koncentrationen av protein i hemolymfa från europeiska (EHB) eller Africanized (AHB) honungsbin matas beebread gjorts av europeiska (EBB) eller Africanized (ABB) bin för 4, 7, och 11 dagar En upprepade åtgärder analys av. varians indikerade signifikanta skillnader bland de 4 treatment grupper (F 3,20 = 19,7, p <0,001). Nivåer av lösligt protein i AHB matade ABB var signifikant högre än EHB matad ABB (p = 0,008) eller EBB (p = 0,018). Åldern på bina vid tidpunkten för provtagningen påverkas avsevärt lösliga proteinhalter i hemolymfa. Nivåerna var signifikant lägre i dag fyra bin jämfört med dag-7 (p <0,0001) eller 11 (p = 0,001). Dag 7 och day11 bin skiljde sig inte (p = 0,149). Denna siffra har ändrats från 25.

Figur 4
Figur 4:. Halterna av aminosyror (ig per gram pollen eller beebread) i pollen eller beebread göras från det EBB är beebread gjorts av europeiska bin och ABB gjordes av Africanized bin. Tryptofan, cystein, fenylalanin och prolin plottades separat för tydlighetens skull i presenterar sina belopp. Denna siffra har ändrats från 25.

Discussion

Med användning av metoder som beskrivits ovan, fann vi att beebread gjorts av AHB förbrukades i större mängder av både AHB och EHB. Även EHB och AHB konsumeras liknande mängder av varje typ av beebread, AHB hade högre hemolymph protein titrar. Iakttagelser baserade på våra metoder liknade tidigare rapporter där hemolymph proteinnivåer i AHB var högre än i EHB även om båda matades samma dieterna 26. Genom att mäta förbrukningen av EBB och ABB, som konsumerades i olika takt från både EHB och AHB, bestämdes det att hemolymph proteinkoncentrationen i varje underarter inte kunde höjas genom att öka livsmedelskonsumtion. Det verkar finnas en platå för hemolymph proteinkoncentration hos arbetare sjuksköterska bee ålder och att börvärdet för platån är högre i AHB än EHB.

Det finns flera viktiga förutsättningar för att etablera kolonier för beebread produktion som kommer att optimera graden av pollen lagring. Först, colonies behöver ramar med öppen grubbla. Utan öppen kull på foder, kommer arbetarna inte samla mycket pollen. För det andra måste kolonin vara queenless så ingen ytterligare yngel produceras. Brood uppfödning kräver stora mängder pollen, och endast överskotts pollen lagras. I de små kolonier etablerade i EFA, skulle det inte finnas lite pollen som ska lagras som beebread om avels områden expanderar så kolonier måste vara queenless. Slutligen, för beebread göras, pollen måste uppbäras corbicular belastningar och lagras i kam-celler. Om pollen samlas i pollenfällor måste det slipas till ett fint pulver innan anspråket framställs mot bina så att de kan hämta det som corbicular laster.

Metoderna för att mäta förbrukningen av beebread genererade kvalitativa snarare än absoluta beräkningarna. Den enda konsumtionen som räknades var när cellerna helt tömts på bibröd. En mer exakt uppskattning av den totala bibröd förbrukningen kan erhållas genom att ta bort biet bread från cellerna och göra det till en bulle som kunde vägas före och efter studieperioden. Men vi ville hålla bibröd i cellerna så att bina kan livnära sig på det som de skulle i en koloni och kanske fortsätta bearbeta det under studieperioden. Skillnaden i vikt av kam avsnitten före och efter studien användes inte som en uppskattning av förbrukningen eftersom vikten kan ha ökat på grund bin satte den utspädda honung ges till dem i vissa celler.

Arbetarna också kanske har lagt en del av den utspädda honung till bibröd. Av dessa skäl var celler innehållande ungefär lika mängder av bibröd före och efter utfodringsperioden räknas och genererade en kvalitativ mätning. Ändå var det en slående skillnad mellan de två typerna av beebread i antalet tomma ABB räknade celler jämfört med EBB efter 11 dagar.

Bestämma vid förvaring pollen blir beebread kan vara difficult eftersom bina lägga kontinuerligt pollen till celler. De samhällen som används för producerande beebread etablerades med ramar av öppen grubbla så bina skulle samla pollen. Emellertid kolonierna var queenless så fanns larver foder till endast cirka 9 dagar efter koloni bildades. För resten av 3 veckors period då kolonierna var i EFA, pollen som bina insamlade lagrades och omvandlas till beebread. Att hålla den lagrade pollen i kam cellerna i ytterligare 11 dagar när utfodring den till bin i burar också kan ha fortsatt bearbetning av pollen att beebread. Omvandlingen av pollen till bibröd tar ca 7 dagar 8. Den beebread matas till EHB och AHB hade lägre pH och minskade proteinkoncentrationer jämfört med pollen utfodras. Liknande fynd av förändringar i pollen efter konvertering beebread har rapporterats av andra 7,10,27. Våra resultat skiljde sig från tidigare rapporter på så sätt att det fanns skillnader i koncentrationer of vissa aminosyror mellan beebread och pollen. Förändringarna i både protein och aminosyrakoncentrationer kan bero på aktiviteten hos proteolytiska enzymer, kan vars källa vara bina själva eller de mikrobiella samhällen etablerade i beebread 7,8,28,29.

De metoder som används för att mäta proteinkoncentration liknade de tidigare beskrivna för att bestämma effekterna av protein på Africanized och europeiska bin 26. Som en förlängning av de metoder, kunde vi uppskatta lösligt protein i pollen och beebread. Dessa metoder genererade liknande resultat till tidigare rapporter 7,10,27. Våra resultat ger ytterligare belägg för att AHB mer effektivt tillgodogöra sig protein än EHB, och att detta skulle kunna vara en nyckelfaktor i den ekologiska dominans AHB i de flesta regioner där det har invandrat och blivit etablerade 30-32.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
waterproof double junction pH spear  Thermo Fisher
Coffee Grinder Mr. Coffee  model 1DS77
Dulbecco's phosphate buffer solution Emd-millipore BSS-1005-B
EIA/RIA polystyrene plate Sigma-Aldrich-Corning CLS3590-100EA
microcapillary pipets Kimble Glass Inc.
Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2  Bio-Rad #500-0202
Spectrophotometer Biotek Synergy HT 
Mass Selective Detector  Agilent 5973N
HLB cartridge
gas chromatograph  Agilent 6930
 gas chromatography column  A J&W Scientific  DB-1701
d4-alanine  Sigma-Aldrich 488917
d23-lauric acid Sigma-Aldrich 451401
13C6-glucose Sigma-Aldrich 389374
Pyridine  Sigma-Aldrich 270970
N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +  
Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) Sigma-Aldrich 33148
Perfluorotributylamine (PFTBA) Sigma-Aldrich 442747-U
d39-arachidiac acid Cambridge Isotope 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Brodschneider, R., Crailsheim, K. Nutrition and health in honey bees. Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).
  2. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).
  3. Schneider, S. S., McNally, L. C. Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata. J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).
  4. Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance. J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).
  5. Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben’kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica. J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).
  6. Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees. J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).
  7. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus. Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).
  8. Gilliam, M. Microbiology of pollen and beebread: the yeasts. Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).
  9. Gilliam, M. Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees. FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).
  10. Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals. Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).
  11. Khachatryan, Z. A., et al. Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota. PLoS ONE. 3 (8), e3064 (2008).
  12. Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).
  13. Ley, R. E., et al. Obesity alters gut microbial ecology. Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).
  14. Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine. Cell. 124 (4), 837-848 (2006).
  15. Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes. Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).
  16. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).
  17. Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion. Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).
  18. Winston, M. The biology and management of Africanized honey bees. Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).
  19. Woyke, J. Brood-rearing efficiency and absconding in Indian honeybees. J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).
  20. Fletcher, D. J. C. Brood rearing and absconding of tropical honey bees. African Bees. , Apimondia. Pretoria, South Africa. 96-102 (1977).
  21. Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. Absconding behavior of the Africanized honey bee in. South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).
  22. Schneider, S. S., McNally, L. C. Factors influencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata. Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).
  23. Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction. Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).
  24. Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees. Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).
  25. DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers. Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).
  26. Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica). Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).
  27. Human, H., Nicolson, S. W. Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae). Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).
  28. Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain. J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).
  29. Anderson, K. E., et al. Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera). PLoS ONE. 8 (12), e83125 (2013).
  30. Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications. Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).
  31. Spivak, M. The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica. J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).
  32. Francoy, T. M., et al. Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization. Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).

Tags

Molecular Biology pollen näring mikrober protein aminosyror Africanized bin genotyp,
Metoder för Jämföra Näringsämnen i Beebread Gjord av Africanized och europeiska honungsbin och Effekter på Hemolymph Protein Titrar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B.,… More

Degrandi-Hoffman, G., Eckholm, B., Huang, M. Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers. J. Vis. Exp. (97), e52448, doi:10.3791/52448 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter