بقعة الأنسجة الصحيحة في كل مرة في كتل متعددة النسيج
Summary
الغرض من توجيه بطاقة العينة (البقعة) أن يعمل كأداة توجيه للمساعدة في تحديد الأنسجة الفردية في كتل البارافين متعددة الأنسجة. تظهر هذه البروتوكولات كيف يتم بناؤها بسهولة من المشتركة، والمواد الأنسجة ذات التكلفة المنخفضة وبمثابة علامة بصرية موثوقة في كتل البارافين والأقسام.
Abstract
توفر كتل البارافين متعدد الأنسجة تحليل إنتاجية عالية مع زيادة الكفاءة والاتساق التجريبية، وخفض الوقت والتكلفة. ميكروأرس الأنسجة يشكلون غالبية كتل البارافين متعددة الأنسجة، ولكن على نحو متزايد، يستخدم الباحثون كتل غير المحتشدة التي تحتوي على الأنسجة أكبر من الأفراد متعددة والتي يمكن أن توفر العديد من المزايا من ميكروأرس الأنسجة دون استثمارات كبيرة في التخطيط والمعدات. ثمة عنصر حاسم في أي تحليل متعدد الأنسجة هو الأسلوب التوجه المستخدمة لتعريف كل الأنسجة الفردية. على الرغم من وجود طرق للحفاظ على التوجه السليم وتحديد الأنسجة في كتل متعددة الأنسجة، معظمهم ليسوا مناسبة تماما لكتل غير المحتشدة، قد تستهلك حيزا هاما ضمن مجموعة و / أو من الصعب أن تنتج في مختبر الأنسجة القياسية. التوجه بطاقة العينة (البقعة) هي بسيطة، وانخفاض أداة التوجه التكلفة التي هي واضحة للعيان في كتل البارافين وجميع أقسام الأنسجة FOص تحديد العينة موثوق بها في تخطيطات المحتشدة وغير المحتشدة. يوفر بقعة المزايا على أساليب التوجيه الحالية لكتل غير المحتشدة كما أنها لا تتطلب أي تعديل المباشرة للأنسجة ويسمح للمرونة في ترتيب قطع الأنسجة.
Introduction
القدرة على تضمين عينات الأنسجة من الأفراد متعددة في كتلة البارافين واحد تمكن من السهل جنبا إلى جنب مقارنة بين العلاج والأفراد، ويزيل التباين بين الشرائح، ويقلل من التكاليف وحجم العمل من باجتزاء وتلطيخ العينات. وتنتج عادة هذه الكتل متعددة الأنسجة إما ميكروأرس الأنسجة (TMA) أو كتل البارافين تحتوي على الأنسجة من الأفراد متعددة في تخطيط غير صفيف. الحفاظ على الهوية عينة أمر بالغ الأهمية لنجاح أي تحليل الأنسجة المتعدد. وكان الباحثون باستخدام الواجبات الشهرية منذ تنميتها لتحسين كفاءة التحليل، والحد من التباين بين الشرائح والحفاظ على الموارد الأنسجة القيمة، وتقليل الوقت والتكلفة من التجارب 1. التوجه الصحيح من الواجبات الشهرية ويمكن تحقيق ذلك باستخدام مجموعة متنوعة من الطرق، بما في ذلك المساحات الفارغة، الصفوف أو الأعمدة بين النوى الأنسجة 2-4، ترتيب غير متماثل المجموعات الأساسية 3 و 5 (على سبيل المثال، كنتروللتر مقابل العلاج)، النوى "منارة" 6، والنوى التوجه المخصصة الموجودة خارج المصفوفة TMA 3. على الرغم من أن هذه الأساليب تعمل بشكل جيد لالواجبات الشهرية، فإن معظم تستهلك قيمة مساحة TMA الأساسية والواجبات الشهرية مع وجود ثغرات ومساحات كما قد تصبح معرفات مربكا كما يتم استنفاد النوى الأنسجة مع مرور الوقت. بالإضافة إلى ذلك، وهذه الأساليب ليست مناسبة للاستخدام في كتل متعددة الأنسجة من دون شكل مصفوفة لأنها تعتمد على الشذوذ في نمط أمر محكم من النوى ميكروأري موحدة كما معرفات. يجب أن معظم كتل غير المحتشدة متعددة الأنسجة استيعاب الأنسجة غير موحدة و، بالتعريف، لا تعرض الشبكة مجموعة منظمة التي تجعل من هذه الانحرافات تبرز بوصفها المعالم.
على الرغم من أن هناك العديد من المزايا لاستخدام TMA، واحدة من أكبر عيوب هو صغر حجم النوى التي ليست دائما ممثل من الأنسجة غير متجانسة إلى حد كبير +1. توفر كتل متعددة الأنسجة غير المحتشدة على الكثيرين رانه يستفيد من TMA، ولكن احتواء عينات الأنسجة أكبر، أو الأجهزة كلها من الدراسات على الحيوانات. ميكروأرس الأنسجة باستخدام النوى واحدة وقد متفاوتة التوافق مع قطاعات النسيج كله يعتمد على البروتين من الفائدة وتتطلب العديد من النوى متعددة لزيادة التوافق 11/07. بسبب الطبيعة المعقدة وغير متجانسة من بعض الظواهر العلامات البيولوجية، الواجبات الشهرية باستخدام حتى أعداد كبيرة من النوى (> 10) يمكن أن تكون لا تزال غير كافية وربما تتطلب أساليب أخرى غير المجهرية للتحليل 8. بالإضافة إلى ذلك، بناء TMA هو مضيعة للوقت، يتطلب تقنية عالية، ويتطلب التكلفة الأولية والاستثمار في أو الوصول إلى arrayer الأنسجة. غير العريض كتل متعددة الأنسجة ويمكن إجراء في أي مختبر الأساسي مع الوقت والجهد أقل بكثير وغير بديلا صالحا للدراسات التي تتطلب المزيد من الأنسجة من صفائف تسمح أو كوسيلة لخفض التكاليف وتبسيط التحليل.
كتل المحتشدة غير متعدد الأنسجة تتطلب بالمثل يمكن الاعتماد عليها أوientation علامة لتعقب تحديد العينة، ومع ذلك، فإن تطوير هذه العلامات كانت محدودة. وتركز الكثير من الأدب يصف التوجه الأنسجة على التوجه الفسيولوجية الصحيح لترسيخ قطعة نسيج الفردية، مثل الوشم الأنسجة مع الحبر 12، الأنسجة في أجار الجيلاتين قبل التضمين قبل تجهيزها 13، ووضع العلامات أنسجة معينة مع الشقوق 14 أو الغرز 15 . على الرغم من وظيفية، وهذه الأساليب ليست مثالية كعلامات في كتل متعددة الأنسجة بسبب محدوديتها. سيتم مقطوع وخياطة من خلال بسرعة وقد لا تكون مرئية في كل قسم. باستخدام تقنيات أجار الجيلاتين قد حفاظ على الأنسجة في التوجه السليم أثناء معالجة وتضمينها ما قبل التضمين، ولكن لا يوفر جديلة البصرية للتمييز بين عينات متعددة في كتلة البارافين والشرائح. الشقوق أو الصبغة على النسيج قد تعقد تحليل أو تسد التفاصيل المورفولوجية الهامة. بدلا من ذلك، هوية الأنسجةفي كتلة غير المحتشدة متعددة الأنسجة لا يمكن الحفاظ عليه من خلال التضمين من قطعة نسيج في ترتيب غير متماثل، ولكن هذا يتطلب 3 أو أكثر من قطعة نسيج وقد لا تسمح لترتيب الأمثل من الأنسجة لتحليلها.
تم تطوير التوجيه بطاقة العينة (البقعة) باعتبارها طريقة سهلة وغير مكلفة لتحديد واضح الأنسجة في كتل متعددة الأنسجة ويقدم العديد من الفوائد مقارنة مع الطرق التوجه القائمة. البقعة هو صغير، ملونة، الأساسية تتألف من هيدروكسي إيثيل الاغاروز هلام تجهيز والأنسجة بمناسبة صباغة، وتسللت مع البارافين (الشكل 2C). وجزءا لا يتجزأ من جوهر بقعة على نهاية بجوار الأنسجة واحدة في أنسجة متعددة كتلة البارافين ويظهر على شكل نقطة ذات الألوان الزاهية في كتلة وفي كل قسم (الشكل 1A – D)، مما يدل بوضوح على التوجه الصحيح للكتلة والأقسام لتحديد الأنسجة سهلا.
Protocol
Representative Results
Discussion
الإعداد الناجح والاستفادة من البقع يتطلب الالتزام الدقيق بضع خطوات التقنية. وينبغي أن يتم ذوبان الاغاروز هيدروكسي إيثيل ببطء وعلى درجة حرارة منخفضة. يمكن أن يذوب بسرعة في درجة حرارة عالية يؤدي في بعض انهيار الاغاروز لأقل من النتائج المثلى. عندما قطع المقابس صبغ لادن…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور هاريس برنت لتقديم مراجعة نقدية للمخطوطة. وأجريت هذه الدراسات في لومباردي الشامل للسرطان مركز التشريح والأنسجة الموارد المشتركة التي يتم بدعم جزئي من المعاهد الوطنية للصحة / NCI منحة P30-CA051008. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للسرطان أو المعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| HistogelTM Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
Referências
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R. Tissue microarrays: an overview. Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. . Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. . Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).
