We present an automated modular high-throughput-method for the identification and characterization of microbial exopolysaccharides in small scale. This method combines a fast preselection to analyze the total amount of secreted polysaccharides with a detailed carbohydrate fingerprint to enable the fast screening of newly isolated bacterial strains or entire strain collections.
מיקרואורגניזמים רבים מסוגלים לייצר ומפריש exopolysaccharides (EPS), אשר יש השלכות חשובות בתחומים רפואיים, יישומי מזון או החלפת כימיקלים מבוססים פטרו. אנו מתארים פלטפורמה אנליטית כדי להיות אוטומטי על מערכת טיפול הנוזל המאפשר ניתוח מהיר ואמין של סוג וכמות EPS המיוצר על ידי מיקרואורגניזמים. זה מאפשר למשתמש לזהות מפיקי exopolysaccharide חיידקים טבעיים רומן לנתח את טביעת אצבע הפחמימות של פולימרים המקבילה תוך יום אחד תפוקה גבוהה (HT). באמצעות פלטפורמה זו, אוספים זן וכן ספריות של וריאנטים זן שעשוי להתקבל כתוצאה גישות הנדסה יכול להיות מוקרן. הפלטפורמה יש התקנה מודולרית, המאפשרת פרדה של הפרוטוקול לשני חלקים עיקריים. ראשית, קיימת מערכת סינון אוטומטית, המשלבת מודולים זיהוי פוליסכריד שונים: ניתוח וכמותיות של viscosity היווצרות באמצעות צעד צנטריפוגה, ניתוח של היווצרות פולימר באמצעות משקעי אלכוהול וקביעת תוכן הפחמימות באמצעות טרנספורמציה פנול-גופרתי החומצה. הנה, אפשר להקרין עד 384 זנים לכל ריצה. החלק השני מספק ניתוח monosaccharide מפורט לכל מפיקי EPS שנבחרו מזוהה החלק הראשון על ידי שילוב של שני מודולים חיוניים: הניתוח של רכב מונומר המלא באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים במיוחד בשילוב עם אולטרה סגול וזיהוי מלכודת יוני יינון electrospray ( UHPLC-UV-ESI-MS) וקביעת פירובט בתור substituent פולימר (בנוכחות ketal פירובט) באמצעות חמצון אנזימטי כי מצמידים במערך צבע. כל המודולים אנליטי של פלטפורמת סינון זה ניתן לשלב בדרכים שונות ומותאמים לדרישות פרט. בנוסף, הם יכולים להיות מטופלים באופן ידני או בצעו עם מערכת טיפול נוזל. ובכך, PLA ההקרנהtform מאפשר גמישות עצומה כדי לזהות EPS השונה.
exopolysaccharides מיקרוביאלית (EPS) הם קבוצה מגוונת מבחינה מבנית ביותר של פולימרים הממלאים תפקודים ביולוגיים שונים. הם בנויים בדרך כלל של יחידות חוזרות מורכבות, הנבדלות ביניהם סוגים שונים של מונומרים (סוכר, נגזר סוכר, חומצות סוכר), את הקשר בין מונומרים אלה וההחלפות שלהם. המגוון המבני של סוכרי מיקרוביאלי מקנה מאפיינים שונים למדי לחברי כיתת מולקולה זו, המאפשרת היישום שלהם בתחומים שונים כמו מזון 1, קוסמטיקת 2,3, כימית בניית 4 או מי טיפול 5. כדי להרחיב עוד יותר את השדה של יישום של ביו המבוסס אלה וכאלה פולימרי קיימא לזיהוי סוכרי חיידקים טבעיים רומן וכן ההנדסה של וריאנטים מבניים מייצג גישות מבטיחות. כך או כך, שיטת הקרנה מהירה נדרשת כדי לסרוק מספר עצום של זנים של חיידקים במהירות their היווצרות פוליסכריד, ולנתח את מוצריהם. לכן, פיתחנו לאחרונה פלטפורמה 96-היטב HT-ההקרנה לניתוח ייצור פוליסכריד חיידקים מן מבודד טבעי או גרסאות זן מהונדס הכוללת את הזיהוי של הרכב monomeric 6.
החלת פלטפורמה זו לסיבוב הקרנה ראשון של בידודים טבעיים ~ 500 אפשרה לנו לזהות רק כ -10 עד 20% של הזנים הבודדים כמו להיות מסוגל לייצר EPS (מידע לא מוצג). משמעות הדבר היא כי 80-90% של הזנים נתחו לא לייצר EPS בתנאים המיושמים, ולכן, ניתוח נוסף של טביעת אצבע פחמימות המפורטת לא היה נחוץ. כמו זיהוי משוכלל זה של רכב monomeric הוא תהליך גוזל זמן, במיוחד לניתוח נתונים, שיטה מראש הקרנה מהר כדי לזהות את הזן חיובי בייצור EPS, תגדיל את היעילות באופן דרסטי. יתר על כן, חומרים כימיים,מתכלים זמן המדידה על יוקטנו UHPLC-UV-ESI-MS. בנוסף, מודולים אנליטיים השונים, בעוד מצד אחד להפוך את השיטה אמינה, הם מצד השניים שמסבכים את הטיפול הידני של יותר משני לוחות 96-גם במקביל, וככזה להגביל את מלוא הפוטנציאל של השיטה. מסיבות אלה, החלטנו לפתח פלטפורמת הקרנה אוטומטית. לכן, שלבנו את הפורמט מודולרי של טכניקת טביעת אצבע פחמימות הקיימת עם שיטת זיהוי המהיר אוטומטית לחלוטין של תכולת הסוכר הכולל, המבוסס על מדידה ספיגה.
שיטת פנול-גופרתי החומצה עדיין מייצגת את שיטת הבחירה של הקביעה המהירה של תכולת פחמימות כוללת של סוכרי חיידקי צמח 7,8. שיטה זו תוארה לראשונה על ידי דובואה et al. 9 ומותאמת עבור יישומים שונים וגדל מדגם, אפילו בקנה מידה קטנה 96-גם צלחות 10,11. Pheשיטת nol-גופרתי חומצה מודדת את תכולת פחמימות הכוללת לפי ערך אחד בלבד, summating כל monomeric, oligomeric והפחמימות הפולימרי של הדגימות.
אם ייקח ההיבטים הללו בחשבון, הבחירה של מדיום גידול מתאים חיונית ליישם את השיטה. מדיה מורכבת המכילה oligomeric או תרכובות פחמימות פולימריים כמו תמצית שמרים עלולה להוביל תוכן פולימר שינה ולכן, יש להימנע לחלוטין. יתר על כן, כמויות גדולות של סוכרים משמשים C-מקור לגידול של זנים. רמות גבוהות של פחמימות הנותרות מתהליך הטיפוח עלולות להפריע שלילית עם המדידה של תוכן EPS.
לכן, השימוש של סוכרים מוגדרים וטהורים מומלץ. בניסויים שלנו השתמשנו גלוקוז לגידול של תאים. גלוקוז הנותרת לאחר הטיפוח הופחתה באמצעות סינון ג'ל וקבעה באמצעות assay-גלוקוז. לבסוף, המקבילה גלוקוזהים של הסוכרים חושב על ידי הפחתת גלוקוז הנותרת לאחר סינון ג'ל מתוכן הפחמימות כי אותר בשיטת פנול-גופרתי החומצה. ג'ל סינון-assay גלוקוז בשילוב עם שיטת גופרתית חומצה-פנול להבטיח תוצאות אמינות ומסוגלים להיות, הראשון שלנו מערכת זיהוי אוטומטי לחלוטין.
שני מודולים אנליטיים חדשים נכללו במצע ההקרנה אוטומטית כדי להגדיל את הכמות של מידע ממערכת EPS-זיהוי: משקעים ואת התצפית של גידול צמיג.
EPS השונה רב – למשל succinoglycan, xanthan וחומצה גס 12 – מדווחים להיות שונה עם ketal פירובט שאינם פחמימות על עמדות סוכר C4 ו- C6. אלה ketals פירובט (בדיוק כמו אסטרים חצי succinyl וחומצות uronic) לתרום לאופי polyanionic ולכן, אל prope הפיזיrties של הפולימר על ידי אינטראקציה באמצעות גשרים קטיון divalent 13. על מנת לזהות את אותם פולימרים בפרט קביעת פירובט הוקמה מודול אנליטי נוסף אחר. זה מגדיל את המידע על מתמירים פוליסכריד ומאפייני מקרוסקופית הפוטנציאל שלהם.
שילוב כל המודולים מאפשר זיהוי של EPS השונה וכן קביעה מהירה ויעילה של יצרני EPS. לפי הגישה כי פלטפורמת ההקרנה ניתן לחלק לשני חלקים עיקריים (איור 1). בתוך ההקרנה אוטומטיות (חלק א) העבודה מתרחשת אוטומטי לחלוטין (טבלה 1) כדי ומיון קפדני EPS במהירות לייצר זנים. הניתוח טביעת אצבע פחמימות (חלק ב ') כמותית קובע את ההרכב מונומר של EPS המיוצר על ידי זנים שנבחרו מראש. ובכך, ניתוח הנתונים צומצם כדי לייעל את הקרנת אוספי זן גדולים. זֶהמציע את האפשרות לנתח 384 זנים בטווח הקרנה יחיד אוטומטי אחד ועם שתי ריצות שהן אפשריות ליום של 768 זנים ליום. בנוסף, ניתוח טביעות אצבעות פחמימות נותן סקירה מפורטת עוד יותר של כל EPS המזוהה. זה מאפשר לנתח ביים זיהוי של וריאנטים EPS שונים במקצת בלבד או חדש לגמרי לעומת המבנים הכימיים תארו כבר של EPS.
זיהוי פוליסכריד עם שיטת פנול-הגופרתית חומצה: מונוסכרידים שונים להראות מקסימום קליט שונה ומקדמי הכחדה טוחנים על ידי שימוש בשיטה זו 9. התוצאה היא מקסימום קליטה שונים של פולימרים, אשר מכילים סוכרים כמה בכמויות שונות. אורכי הגל השונים של מקסימום קליט 16 פולימרים שונים זמינים מסחרי מובאים בטבלה 5. הפולימרים היו מומסים (1 גר '/ ל) ב DDH 2 O, בחש (150 סל"ד) לילה ונמדד בשיטת פנול-גופרתי החומצה . מסטיק Diutan הראה לו את המקסימום הקליט הנמוך ביותר ב 470 ננומטר scleroglucan ו היאלורונית חומצה הגבוהה ביותר ב 484 ננומטר. בהתבסס על תוצאות אלו 480 ננומטר נבחר עבור פלטפורמת סינון זה. הספיגה היחסית של הפולימרים חושבה על הספיגה שהושגה עם גלוקוז 1 גר '/ ל (כפי שנקבע 100%). התוצאות הנמוכות ביותר התקבלו עם scleroglucan ו succinoglycan, הוא עם 92%. זה היה expected כי scleroglucan רק מכיל גלוקוז succinoglycan מכיל גלוקוז וגלקטוז על יחס של 7: 1. שני הפולימרים המסחריים יש הפסדים שונים של ייבוש ותכני אפר שונים, וזו הסיבה מדוע הערך התיאורטי של ~ 110% לא הושג. Xylan הראה את הספיגה היחסית הגבוהה ביותר עם 311%. הסיבה לכך היא מקדמת הכחדה הגבוהה הטוחנת שהושג קסילוז בשל בצורת furanose הדומיננטית יותר. ברמה של גלוקוז 0.1 גר '/ ל מגבלת כימות הושגה, כמו גם את גבול הגילוי בריכוז <0.05 g / L. עם זאת, את גבול הגילוי של זנים חיובים ההקרנה גבוהה מ 0.7 גר '/ ל ולכן, assay הראה ביצועים טובים. על מנת לקבל תוצאות אמינות, גלוקוז הנותרת לאחר סינון ג'ל נקבעה עם assay-גלוקוז וערך זה מפחית את ערך משיטת פנול-גופרתי החומצה.
דילול גלוקוז-assay אוטומטית: ביצועיםשל נחישות הגלוקוז לאחר הטיפוח (דילול 1: 100) נחקר. לשם כך, 10 μl של supernatant הועברו 990 μl של DDH 2 O בצלחת גם עמוק מעורבב באמצעות עשר פעמים aspirating מחלק 180 μl מתוך דילול זה. השלב הקריטי השני היה pipetting הנכון של רק 5 aliquot μl עבור 1:10 הדילול מן assay-גלוקוז לאחר סינון ג'ל. על מנת ליצור את הדילול של 25 μl של DDH 2 O הועברו עם טיפ μl-50 הראשון, לאחר מכן 20 μl של DDH 2 O ו -5 μl-תסנין ג'ל היו aspirated יחד. הדבר מבטיח הסרה טובה יותר של aliquot 5 μl מתוך הקצה. שני צעדים דילול אומתו לתקני גלוקוז שונים באמצעות assay-גלוקוז. התוצאות עבור שני ריכוזים למופת מובאות בטבלה 6 1:. דילול 100 לקביעת התוכן הגלוקוז לאחר הטיפוח הראה דיוק גבוה עבור הסטנדרטים הוא עם CV & #60; 1.2%. במקביל, את הדיוק של הסטנדרט הגבוה יותר היה עד 11.6 (שגיאת%). עם זאת, זה זניח מכיוון נחישות גלוקוז מייצגת רק את התוכן הגלוקוז שנותר לאחר טיפוח ולכן, הוא לא חשוב לצורך זיהוי הפולימר. דילול 1:10 עבור גלוקוז הנותרת לאחר סינון ג'ל הראה תוצאות אמינות מאוד עם CV <1.4% ועל דיוק <שגיאה 2.1%.
תמורה של אידוי: ההקרנה דורשת 3.5 שעות מהשלב הראשון ועד גלוקוז-assay הראשון. על מנת לברר, אם מסגרת זמן זו יש השפעה על אחסון MTP לא אטום, 50 μl של סטנדרטי כיול-assay גלוקוז אוחסנו עם ובלי כיסוי 3.5 שעות בקרוסלת הרובוט. בטווח הכיול (45 עד 4.5 מ"ג / L) ריכוז המדגם גדל בקושי. גידול – נגרם על ידי אידוי – היה מתחת 2.1% ורק לשני הריכוזים הנמוכים ביותר (1.8 ו -0.9 מ"ג / L) הוא הגיע עד 12.4% ( <strאונג> לוח 7).
ג'ל סינון: כמויות גבוהות של גלוקוז שאינם מטבוליזם להפריע לגילוי כמותי של גלוקוז מן הפולימר הידרוליזה. לכן, צעד ג'ל-סינון נדרש להסיר את הגלוקוז שנותר לאחר טיפוח. בנוסף, סינון ג'ל מטהר הפולימר המכיל supernatant מלחי ותרכובות פחמימות monomeric, אחרים מאשר גלוקוז, כדי למזער את הרקע אנליטי בניתוח מונומר. בצעד ג'ל-סינון 35 μl של תסנין הוצב במרכז הבאר. עבור אימות על חוסנו של סינון ג'ל במערכת האוטומטית, שמונה סטנדרטי כיול 0.045 עד 9 גלוקוז g / L היו מסוננים (n = 8). גלוקוז של כל ריכוז תמיד הופחת על ידי יותר מ 95% מהשווי הראשוני (לוח 8). בעשותו כן, את סינון ג'ל הראה תוצאות טובות מאוד עבור ריכוזים שונים של גלוקוז. בנוסף, גלוקוז הנותרת לאחר ג'ל-filtration כן נקבע עם assay-גלוקוז ונוכה נחישות פנול-גופרתי חומצה לקבל את הסכום הנכון של שווה ערך גלוקוז עבור הפולימר הידרוליזה.
פירובט-assay: קודם כל, זה נחקר אם לנטרל ומדולל (1:10) TFA-מטריקס מהשלב הידרוליזה מפריע התגובה האנזימטית. לכן, assay המלא בוצע פעמים, פעם אחת עם ופעם אחת בלי מטריקס והראה תוצאות אמינות. לבסוף, התוכן פירובט של 16 פולימרים זמינים מסחרי נמדד בהצלחה מתוארת באיור 3. זה ידוע כי בדרך כלל מתוך 16 אלו פולימרים רק succinoglycan ו קסאנטן באופן טבעי מכיל פירובט. עם-assay פירובט שלנו הוא של פולימרים אלו זוהו כהלכה. בשנת scleroglucan, מסטיק welan ו פירובט xylan זוהה גם בכמויות משמעותיות. בסך הכל, את היכולת של הגישה הייתה תוקפת ואת ים assay-פירובטhowed בעל ביצועים גבוהים. זה הוכיח את עצמו מסוגל לזהות פירובט פולימרים שונים לאחר הידרוליזה.
טביעת אצבע פחמימות: לאחר ביצוע כל המודולים אנליטיות ההקרנה האוטומטית, יצרני EPS פוטנציאל נבחרו לניתוח טביעת אצבע פחמימות. לשם כך, מספר קריטריונים יושמו: 1) תצפית חיובית של צמיגות לאחר צנטריפוגה ו / או לאחר סינון. 2) רטיבות לפני ואחרי סינון. סיבים פתיתי נצפים הוערכו כחיובי. 3) שווה ערך גלוקוז משייטת פנול-גופרתי החומצה. ערכים> 700 mg / L דורגו חיובי וערכי בין 300 ל -700 מ"ג / ל 'דורג יצרני EPS המשוערת. כאשר שניים או שלושה קריטריונים הוערכו כחיובי, הזנים נבחרו לניתוח טביעת אצבע פחמימה נוסף. הקריטריונים יכולים להיות מותאמים אישית כלפי המטרה אישית לבן הקרנת EPS (למשל EPS צמיגות הנמוך). הגישה שלנו ולשם מציאת efficiאף אוזן גרון EPS מפיקה. כאשר מחפשים זנים שרק לייצר כמויות קטנות של EPS מגבלת ההערכה המקבילה גלוקוז צריכה להיות מופחתת.
יתרון טכני יישומים עתידיים: אחת תכונות מעניינות של פרוטוקול זה הוא הדמות המודולרי של צעדים ואת מודולים אנליטיים השונים. הם יכולים להיות משולבים בדרכים שונות, מותאם לדרישות פרט ומודולים רומן יכולים להיות מיושמים בקלות. יתר על כן, מודולים אנליטיים יכול לשמש בנפרד, למשל מודול הידרוליזה בשילוב עם מודול HT-PMP-derivatization הוא מסוגל לבצע ניתוח הרכב monomeric מפתרונות פולימר שונים (1 גר '/ ל') בפורמט 96-היטב. למעבדות מבלי גישה למערכת טיפול נוזל ההקרנה המלאה ניתן לטפל באופן ידני ללא כל תיקונים בתכנית pipetting. עם זאת, באמצעות מערכת טיפול נוזל מגביר את התפוקה של עד 768 זנים (במקום 192 זנים אם Screeneד ידני) ליום. הפרוטוקול מתואר כאן הוא מסוגל הקרנה עבור סוגים שונים ולכן, עבור הקרנת אוספי זן גדולים לזהות מפיקי EPS הרומן ולנתח טביעות אצבע הפחמימות שלהם בגישה אחד (איור 4). יתר על כן, הקרנה ממוקדת עבור סוכרים המכילים סוכרים נדירים כמו פוקוז, חומצות uronic או אפילו סוכרים ידועים יכולה להתבצע באמצעות ניתוח monosaccharide המפורט. כמו כן, שילובי סוכר שונים ביחסים מוגדרים ניתן לאתר. זה מאפשר זיהוי פשוט של וריאנטים הקשורים מבנית של EPS ידוע כבר או EPS הרומן.
The authors have nothing to disclose.
We sincerely thank Thomas Howe and Jörg Carsten for the programming and technical support with the liquid handling systems.
96 well deep well plate 2.0 mL (DWP) | Greiner Bio-One | 780271 | Main-culture (CP 1-1 to 1-4), equilibration plates for gel-filtration (CP 1-6, 1-7, 2-6 and 2-7), 1:100 dilution for the glucose assay (CP 4-1 to 4-4) containing 990µl of ddH2O |
Breathable Sealing Film | Axygen | BF-400-S | Incubation film for pre- and main-culture DWP |
Aluminum Sealing Film | Axygen | PCR-AS-200 | -80 °C storage film for glycerol-stock plates |
MCA96 Nested Disposable Tips 200 µl | TECAN | 30038619 | Worktable position (WTP 2-1 to 2-4) |
A/B glass-filter-plate 1µm | Pall Corporation | PN 8031 | Stored on collector plate (CP 2-1 to 2-4) |
96-well micro titer plate V-Bottom | Greiner Bio-One | 651201 | Collector plate for filtration plate (CP 2-1 to 2-4) |
96-well SpinColumn G-25 | Harvard Apparatus | 74-5612 | Stored on washing DWP (CP 1-6, 1-7, 2-6 and 2-7) |
96-well micro titer plate V-Bottom | Nunc | 249944 | Collector plate for gel-filtration plate (CP 3-1 to 3-4) |
Nested Disposable Tips SBS 50 µl tips | TECAN | 30038609 | Carousel position (CP 4-6, 4-7 and 5-1 to 5-6) |
Trough 250 ml | Axygen | Res-SW96-HP | Water WTP 1-1, Glucose assay reagent-mix WPT 1-2, ammonium-acetat buffer pH 5.6 (CP 5-7) |
96-well micro titer plate F-Bottom (MTP) | Greiner Bio-One | 655101 | precipitation 1 (CP 6-1 to 6-4), pH-value (CP 7-1 to 7-4), precipitation 2 (CP 8-1 to 8-4), phenol-sulfuric-acid method (CP 8-5 to 8-8), glucose-assay (CP 9-1 to 9-9), dummy plates (WTP 3-1, 3-2) |
96-well silicon cap mat | Whatmann | 7704-0105 | Cover mat for MTP |
200 µl pipette tips | Sarstedt | 70.760.002 | For manually handling |
1000 µl pipette tips | Sarstedt | 70.762 | For manually handling |
96-well-PCR micro titer plate | Brand | 781350 | Hydrolysis, PMP-derivatisation |
TPE (thermoplastic elastomer) cap mat | Brand | 781405 | Hydrolysis, PMP-derivatisation |
Filter plate 0.2 µm Supor, | Pall Corporation | PN 8019 | Filtration of samples for UHPLC-ESI-MS analysis with a MTP collector plate |
Pipette Tips LHS 5-300 µl | Brand | 732150 | Brand LHS system |
ABTS (2.2-azino‑bis-(3‑ethylbenzthiazoline)-6-sulfonic acid) | Sigma-Aldrich | A1888 | Glucose-assay |
Glucose oxidase | Sigma-Aldrich | G2133 | Glucose-assay |
Horseradish peroxidase | Sigma-Aldrich | P6782 | Glucose-assay, pyruvat-assay |
DA-64 (N-(Carboxymethylaminocarbonyl)-4.4'-bis(dimethylamino)-diphenylamine sodium salt) | Wako Chemicals GmbH | 043-22351 | Pyruvat-assay |
Pyruvate oxidase | Sigma-Aldrich | P4591 | Pyruvat-assay |
Potassium phosphate dibasic | Carl-Roth | P749.3 | Pyruvat- and glucose-assay |
Potassium phosphate monobasic | Carl-Roth | 3904.3 | Pyruvat- and glucose-assay |
Thiamine pyrophosphate | Sigma-Aldrich | C8754 | Pyruvat-assay |
Magnesium chloride hexahydrate | Sigma-Aldrich | 31413 | Pyruvat-assay |
2-Propanol | VWR | 20922.466 | Precipitation |
Phenol | VWR | 20599.231 | Phenol-sulfuric-acid method |
Sulfuric acid | Carl-Roth | 4623.4 | Phenol-sulfuric-acid method |
Trifluoroacetic acid | Sigma-Aldrich | T6508 | Hydrolysis |
Ammonium solution | Carl-Roth | P093.1 | Hydrolysis, PMP-derivatization |
Ethanol absolut | VWR | 20821.321 | Hydrolysis, PMP-derivatization |
Phenol red | Alfa Aesar | B21710 | Hydrolysis, PMP-derivatization |
1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazolone | Sigma-Aldrich | M70800 | PMP-derivatization |
Methanol LC-MS | VWR | 83638.320 | PMP-derivatization |
Acetonitril LC-MS | VWR | 83040.320 | PMP-derivatization |
Acetic acid | Sigma-Aldrich | 338826 | PMP-derivatization, |
Ethanol absolut | VWR | 20821.321 | PMP-derivatization |
Methyl red | Alfa Aesar | 36667 | pH-value |
Robotic liquid handling system | Tecan | Freedom EVO | Worktable setup in Figure 2 |
Liquid handling station LHS | Brand | 709400 | Worktable setup in Figure 2 |
Tip-Adapter | Brand | 709434 | Worktable setup in Figure 2 |
Liquid Ends MC 20-300µL | Brand | 709416 | Worktable setup in Figure 2 |
Adapter 60mm | Brand | 709430 | Worktable setup in Figure 2 |