We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.
Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.
O sistema linfático é uma área pouco estudada da fisiologia. Modelos pré-clínicos de cateterismo linfático ocorrer em diferentes espécies animais e 1-8 são utilizados pelas indústrias farmacêuticas e instituições de investigação para investigar mecanismos envolvidos em lípidos 8-12 e 13-15 metabolismo da droga, metástase de câncer 16 com tratamento experimental 17, 18 e a função imunológica -26. Este estudo explora o uso de cateterismo intestinal tronco linfático em um modelo de porco doméstico para medir componentes do metabolismo de lipoproteínas. metabolismo das lipoproteínas está envolvido na produção e secreção de quilomicrons, bem como as alterações nos lípidos associados e proteína total. Essas considerações são importantes, pois há grandes diferenças no metabolismo lipídico entre modelos de roedores comumente usados e os seres humanos e, como tal, empregando modelos de suínos para coletar linfa intestinal poderia fornecer informação mais comparável para o estudo de lipídios memetabolização em pessoas 27-31.
Várias técnicas cirúrgicas são usados para coletar a linfa intestinal em espécies de animais de grande porte: uma abordagem ombro cranial (ou seja, o cateterismo ducto torácico) 5, uma abordagem lateral superior flanco 32-34, e uma linha média ventral ou abordagem paramediana 22,35. Este vídeo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico em suínos utilizando uma abordagem cirúrgica ventral para o cateterismo do tronco linfático intestinal. Cuidadosas autorizações técnicas cirúrgicas este método de cateterismo linfática para recolher grandes quantidades de linfa e dos seus componentes ao longo de períodos de tempo prolongados.
Esta técnica abre uma miríade de aplicações para muitas disciplinas que examinam várias funções fisiológicas. Aplicações podem incluir, mas não estão limitados a, todo lipoproteína corpo e o metabolismo lipídico, imunovigilância, génese de tumores e metástases, função intestinal, e a development e progressão da doença inflamatória intestinal.
Coleta de linfa intestinal é um excelente método para investigar mecanismos envolvidos na lipídico 8-12 e 13-15 de drogas metabolismo, a metástase do câncer 16,17, o tráfico de celular e função imunológica 18-26, em vários modelos animais experimentais. Com efeito, a capacidade de colher grandes quantidades de um ou outro periférico (aferente) e central (eferente e grandes vasos do tronco) linfa durante um período prolongado tem sido particularmente importante para…
The authors have nothing to disclose.
The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.
Miller laryngoscope blade | Welch Allyn | 68044 | 182 mm length |
Surgivet advisor: Vital signs monitor | Surgivet | V9203 | |
Rectal temperature probe | Surgivet | V3417 | |
Mono-polar electrosurgery generator | Valley Lab | ||
Metzenbaum scissors | Fine Science | 14518-18 | |
Tuffier retractor | Stevens | 162-11-676 | |
Mosquito forceps | Stevens | 162-7-10 | |
Kelly forceps-curved (14cm) | Stevens | 162-7-38 | |
Allis tissue forceps | Stevens | 162-7-38 | |
Forceps dressing-eye (10.2cm) | Stevens | 162-18-780 | |
Forceps dressing-Adison (12.1cm) | Stevens | 162-17-2510 | |
Needle Drivers | Stevens | 162-V98-42 | |
Iris scissors | Fine science | 14058-11 | |
Circulating water pump | Jorvet | J-783X | |
Maxitherm-Vinyl blanket | Jorvet | J-784C | |
Q tip applicators | Fisher Scientific | 22-037-960 | |
Catheterization tubing (4.06 OD X 2.31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | Micro-Renethane implantation tubing |
2-0 silk suture | Ethicon | LA556 | |
2-0 polyglactin suture | Ethicon | J443H | 2-0 vicryl |
Large animal jacket | Lomir Biomedical Inc. | SSJ2YC | |
Polypropylene wash bottles | Fisher Scientific | 03-409-22C | 500 ml |
Penicillin-Streptomycin | Sigma Aldrich | D4333 | |
EDTA | Sigma Aldrich | 60-00-4 | |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2411 | |
Azaperone | Elanco Animal Health | Stresnil | |
Dexmedetomidine hydrochloride | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
Isoflurane | Abbott Animal Health | 05260-5 | IsoFlo |
Ketamine hydrochloride | Zoetis | 2626 | Ketaset |
Bupenorphine hydrochloride | Champion Alstoe Animal Health | DIN:02347510 | |
6 mm Endotracheal tube | Jorvet | J-165d | |
10% Lidocaine spray | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
4 % Chlorhexidine surgical scrub | Partnar Animal Health | PCH-011 | Diluted: 2.0% solution |
3M Surgical steri- drape | 3M Health Care | 1040 | |
SDS page gel | Invitrogen | EA0375BOX | 3-8 % tris acetate |
Polyvinylidene fluoride membrane | Millipore | IPVH00010 | 0.45 μm pore size |
ApoB antibody | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 dilution |
Donkey anti-goat IgG-HRP | Santa Cruz Biotechnology | Sc-2304 | |
ECL Prime Western Blotting Reagent | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
Triglyceride Kit | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
Total Cholesterol Kit | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
Total Protein | Pierce | 23225 | Bicinchoninic Acid Assay |