Caracterização do tecido depois de um novo método de desagregação para a pele Micro-enxertos Generation
Summary
O protocolo descreve um novo método para desagregar os tecidos humanos e para criar micro-enxertos autólogos que, combinado com esponjas de colagénio, dá origem à bio-complexos humanos, prontos para utilização no tratamento de lesões da pele. Além disso, este sistema preserva a viabilidade das células de micro-enxertos em diferentes momentos após a desagregação mecânica.
Abstract
Vários novos métodos foram desenvolvidos no campo da biotecnologia para obter suspensões celulares autólogas durante a cirurgia, a fim de proporcionar tratamentos de uma etapa para lesões cutâneas agudas e crônicas. Além disso, o tratamento de feridas agudas crónicas mas também resultantes de trauma, diabetes, infecções e outras causas, permanece um desafio. Neste estudo, descrevemos um novo método para criar autólogas micro-enxertos de tecido cutâneo de um único paciente e sua aplicação clínica. Além disso, também foi realizada in vitro caracterização biológica do tecido cutâneo derivadas da pele, derme desepidermizada (DED) e derme de múltiplos órgãos e / ou doadores de multi-tecido. Todos os tecidos foram desagregados por este novo protocolo, o que nos permite obter micro-enxertos viáveis. Em particular, relatou que este protocolo inovador é capaz de criar bio-complexos compostos por micro-enxertos autólogos e esponjas de colagénio prontas para serem aplicadas sobre lesões cutâneas. o cliniaplicação de bio-CAL complexos autólogos de uma lesão da perna também foi relatado, mostrando uma melhoria de ambos processo de re-epitalization e suavidade da lesão. Para além disso, o nosso modelo in vitro mostrou que a viabilidade das células após a desagregação mecânica com este sistema é mantido ao longo do tempo durante até sete (7) dias de cultura. Também se observou, por análise de citometria de fluxo, que o conjunto de células obtidas a partir de desagregação é composta por vários tipos de células, incluindo células estaminais mesenquimais, que exercem um papel fundamental nos processos de regeneração e reparação de tecidos, para o seu elevado potencial de regeneração. Finalmente, foi demonstrado in vitro que este procedimento mantém a esterilidade das micro-enxertos, quando cultivadas em placas de agar. Em resumo, conclui-se que esta nova abordagem regenerativa pode ser uma ferramenta promissora para os clínicos para se obter num só passo viável, esterilizado e pronto a utilizar micro-enxertos que podem ser aplicados isoladamente ou em combinação com mais Scaffo biológica comumLDS.
Introduction
Nos últimos anos, vários novos métodos têm sido desenvolvidos no campo da biotecnologia para obter suspensões celulares autólogas durante a cirurgia, a fim de proporcionar tratamentos de um passo para lesões cutâneas agudas e crónicas. Além disso, o tratamento de feridas agudas, mas principalmente crónicas resultantes de trauma, diabetes, infecções, e outras causas, permanece um desafio. Há evidências crescentes de que feridas crônicas tornaram-se um grave problema de saúde global, causando um encargo financeiro enorme para os sistemas de saúde em todo o mundo 1.
Para aumentar a taxa de sucesso no tratamento de lesões da pele, a ausência de manipulação extensiva (incluindo o reforço celular) e a manutenção de condições estéreis é essencial, a fim de criar uma suspensão celular que pode ser imediatamente aplicada sobre a área danificada da pacientes, evitando assim um maior processamento em salas limpas, como fábricas celulares. Starting a partir de pequenas biópsias de pele, moagem, centrifugação e outros métodos de separação (por exemplo, mecânica ou enzimática), são frequentemente utilizados para se obter uma suspensão celular, que podem ser cultivadas num meio de crescimento. Todos estes métodos requerem geralmente um longo período de tempo de execução, salientando as estruturas celulares, e que conduz a uma redução da viabilidade das células. Outro aspecto importante é a obtenção de uma suspensão celular autólogo preparado para ser utilizado por médicos, por exemplo, para reparar áreas danificadas. Além disso, está bem estabelecido que os enxertos de tecido autólogo sobreviver aos procedimentos de transferência de, eventualmente, sobreviver no local receptor pelos princípios da indução e condução 2, 3. O tecido do enxerto ideal deveria ser prontamente disponíveis e têm baixa antigenicidade e dador local morbidade 4.
Na base destas evidências, o primeiro objectivo deste estudo foi o de criar bio-complexos autólogos adequados paraaplicação clínica na reparação de tecidos. Para este fim, descrevemos um novo método para obter autólogas micro-enxertos a partir de tecidos cutâneos que foram desagregados por este protocolo. A apresentação do caso também é aqui descrito como uma aplicação clínica de micro-enxertos autólogos obtidos por este protocolo em combinação com esponjas de colágeno. Esta abordagem já foi relatada como sendo eficaz na desagregação mecânica dos tecidos humanos e 5 tem sido utilizado clinicamente para enxertos e a regeneração de tecidos dérmicos 6,7, bem como para as terapias de regeneração de tecidos conjuntivos em cirurgia oral-maxilofacial 8-10 .
Além disso, o segundo objetivo deste estudo foi a caracterização biológica dos tecidos cutâneos após a sua desagregação por este protocolo. Para este efeito, diferentes amostras de tecido cutâneo homólogos derivados de área do tronco de diferentes múltiplos órgãose / ou doadores multi-tecido foram processadas seguindo as normas nacionais relativas colheita, processamento e distribuição de tecidos para transplante (CNT 2013) no Bank Emilia Romagna Regional da pele.
APRESENTAÇÃO DO CASO:
Uma paciente de 35 anos de idade, mostrando um trauma complexo devido ao acidente de carro foi admitido na Unidade de Terapia Intensiva do Hospital Ancona. O paciente mostrou uma infecção na perna devido a uma ferida aberta e uma fratura estabilizada com fixação externa. Dois desbridamento radical foram realizadas e quando a ferida se tornou limpa após a terapia de pressão negativa (terapia VAC) e do periósteo parecia saudável, foi aplicado o protocolo depois de dois meses de recuperação. Após a desagregação com este sistema, as micro-enxertos obtidos foram utilizados para criar bio-complexos com uma esponja de colagénio, que foram subsequentemente implantado, a fim de investigar a sua eficácia sobre a reparação da lesão.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este estudo preliminar demonstrou que as micro-enxertos obtidos por este protocolo pode ser combinada com as esponjas de colagénio, como já foi relatado em outras aplicações clínicas, para optimizar a eficácia de micro-implantes de enxertos 9, 10. Em particular, este estudo relatou a capacidade de bio em complexos, constituído por micro-enxertos e esponjas de colágeno, para adjuvante da cicatrização de uma lesão na perna após 30 dias de aplicação clínica. Além disso, in vitro resultad…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Dr. Federica Zanzottera para contribuir para o estudo realizar citometria de fluxo análise.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
Referências
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).
- Ellis, E., Sinn, D. Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery. J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).
- Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques. Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).
- Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma. AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).
- Trovato, L., et al. A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues. J Cell Physiol. , (2015).
- Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome. JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).
- Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds. J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3 (2014).
- Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report. Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).
- Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D’Aquino, R. Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up. AOMS. 1 (2), 20 (2013).
- Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D’Aquino, R., et al. Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation. J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).
- Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. A new culture medium for medical bacteriology. Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).
