High Throughput Ensaio para examinar Preferências de postura de Pessoa Drosophila melanogaster

Summary

Este protocolo descreve um ensaio de alto rendimento para testar as preferências de postura de ovos de Drosophila melanogaster em resolução de um único animal. Este ensaio fornece uma plataforma simples, eficiente e escalável para identificar genes e componentes de circuitos que controlam um processo simples de tomada de decisão.

Abstract

Recentemente, a preferência de postura de Drosophila tem emergido como um modelo geneticamente tratável para estudar a base neural dos processos de tomada de decisão simples. Ao selecionar locais para depositar seus ovos, as moscas fêmeas são capazes de classificar a atratividade relativa das suas opções e escolher o "maior dos dois bens." No entanto, a maioria dos ensaios de preferência poedeiras não são práticos quando se quer ter uma abordagem sistemática rastreio genético para procurar a base circuito subjacente a este processo de tomada de decisões simples, como elas são e trabalhoso para configurar base populacional. Para aumentar a taxa de transferência de estudar de preferências de postura de ovos das fêmeas individuais, desenvolvemos câmaras personalizados que cada um pode simultaneamente ensaio preferências de postura de até trinta indivíduo voa, bem como um protocolo que garante a cada fêmea tem uma alta taxa de postura (de modo a que a sua preferência é facilmente discernível e mais convincente). Nossa abordagem é simples de executare produz resultados muito consistentes. Além disso, estas câmaras podem ser equipados com acessórios diferentes para permitir a gravação de vídeo os animais que põem ovos e fornecer luz para estudos optogenética. Este artigo fornece os planos para fabricar estas câmaras e ao processo de preparação das moscas a ser analisadas nestas câmaras.

Introduction

Drosophila melanogaster é um poderoso organismo modelo genético para estudar a base neural dos comportamentos. O rápido desenvolvimento de ferramentas genéticas para manipular neurônios de maneira direcionada e o surgimento de ferramentas sofisticadas de análise comportamental melhoraram significativamente nossa capacidade de dissecar os mecanismos de circuito subjacentes aos processos de transformação sensório-motora de vários comportamentos inatos e aprendidos^1-3.

A postura de ovos de Drosophila é um modelo adequado para estudar a base neural de processos simples de tomada de decisão. Em particular, as fêmea....

Protocol

1. Preparar Flies a ser testada

1. Cultura voa em melaço padrão / media farinha de milho na incubadora a 25 ° C e 65% de humidade. Tome cuidado para não sobrecarregar os frascos. Por exemplo, colocar 8 mulheres e 6 homens para um frasco de alimentos estreita.
   Nota: O "comida frasco estreito" usado aqui tem um diâmetro interno de 2,3 cm. Nós normalmente dispensados ​​cerca de 10 ml de alimentos voar em cada frasco. A receita mosca alimentos que usamos é descrito aqui: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html.
2. 2 - 3 dias após a eclosão do sexo feminino, preparar frascos com pasta de levedura fresca, como mostrad....

Results

As câmaras de postura de ovos são compostos de várias peças: um pedaço de substrato (inferior), um pedaço divisor (meio), uma carga (parte superior) peça, e 2 portas de correr (Figura 1A - D). Estas peças são usadas para independentemente moscas configuração e substratos antes experimentos poedeiras. Figura 1F mostra como frascos devem olhar quando as moscas fêmeas estão prontas para postura de ovos. Quando as moscas recebem uma escolha entre um substrat.......

Discussion

As câmaras e protocolos aqui descritos têm várias melhorias em relação ensaios poedeiras anteriores. Em primeiro lugar, aumentar a taxa de transferência de doseamento preferências dos animais individuais de forma significativa. Cada câmara pode testar 30 fêmeas individuais e leva menos de uma hora de configurar. Em segundo lugar, eles aumentam a consistência das preferências de postura em relação aos métodos anteriores. A padronização das dimensões da arena, o tamanho dos substratos de postura e distância entre substrat.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose UltraPura	Invitrogen	16500-500
Sucrose	Sigma	S0389
Banho-maria	Fisher	15-462-6Q
LifeCam Cinema webcam	Microsoft	H5D-00013
LEDs vermelhos	Cree	C503B-RAN-CA0B0AA1
Câmaras de postura de ovos	Suportes de câmera personalizados
Suportes de LED
	Genesee	32-116 aC