Summary

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em> Drosophila melanogaster</em

Published: March 24, 2016
doi:

Summary

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

Abstract

Son zamanlarda, Drosophila yumurtlama tercihi basit karar verme süreçlerine nöral temelini incelemek için bir genetik uysal bir model olarak ortaya çıkmıştır. yumurtalarını yatırmak siteleri seçerken, erkek sineklerin kendi seçenekleri göreceli çekiciliği sıralama ve seçme yeteneğine sahiptir "daha büyük iki mal." bir de toplum tabanlı ve kurmak için zahmetli olduğu gibi, bu basit karar verme sürecini altında yatan devre bazında aramak için sistematik bir genetik tarama yaklaşım almak istiyorsa Ancak, çoğu yumurtlama tercih deneyleri pratik değildir. Tek kadın yumurtlama tercihlerini okuyan verimini arttırmak için, biz en fazla otuz bireyin her can aynı anda tahlil yumurtlama tercihleri ​​her kadın yüksek yumurtlama oranına sahip sağlayan bir protokol yanı sıra uçar özel odalarını geliştirdi (yani onların tercihi kolayca ayırt edilebilir ve daha inandırıcı olduğunu). Yaklaşımımız yürütmek kolaydırve çok tutarlı sonuçlar üretir. Ayrıca, bu odalar, video yumurtlama hayvanların kayıt ve optogenetics çalışmaları için ışık sunmak için izin farklı ekleri ile donatılmış olabilir. Bu makalede, bu odalar içinde denenecek olan sinekler hazırlanması için, bu odalar ve prosedür imal edilmesi için planları içerir.

Introduction

Drosophila melanogaster is a powerful genetic model organism to study the neural basis of behaviors. The rapid developments of genetic tools to manipulate neurons in a targeted manner and the emergence of sophisticated behavioral analysis tools have significantly improved our ability to dissect the circuit mechanisms that underlie the sensory-motor transformation processes of several innate and learned behaviors1-3.

Drosophila egg-laying is a suitable model to study the neural basis of simple decision making processes. In particular, Drosophila females have been shown to possess the ability to compare and rank their options before “committing” to depositing an egg onto a given option4-8. For example, when given only a plain (sucrose-free) substrate or only a sucrose-containing substrate, females readily accept either option for egg-laying. However, when presented with both options, females robust reject the sucrose substrate in some contexts7,9,10. Relatively little is known about the neural mechanisms that allow females to “choose the greater of two goods”, however. A major obstacle has been the lack of an efficient method to assay egg-laying preferences such that one can use a systematic genetic screening approach to study this problem.

In this report, we describe the protocol we developed that allows egg-laying preferences of females to be assayed at single-animal resolution and with substantially improved throughput and consistency over previous methods. Specifically, we provide the blueprints for constructing the chambers we designed, the protocol for preparing the females so that each is primed to lay many eggs, and the protocol for using the chambers.

Protocol

Sinekler hazırlanması 1. tahlil edilecek Kültür standart pekmez uçar / 25 ° C ve% 65 nemde belirlenen inkübatör de Mısır unu medya. Şişeleri doldurmadık özen gösterin. Örneğin, dar bir gıda şişenin içine 8 kadın ve 6 erkek koydu. Not: Burada kullanılan "ince gıda şişenin" 2.3 cm'lik bir iç çapa sahiptir. Biz genellikle her şişenin içine sinek gıda yaklaşık 10 ml dağıtılmıştır. Kullandığımız sinek yemek tarifi burada açıklanmıştır: http://fl…

Representative Results

Yumurtlama odaları birçok parçadan oluşur: bir alt tabaka (alt) parçası, bir bölücü (orta) parçası, bir yükleme (üst) parça ve 2 sürgülü kapı (Şekil 1A – D). Bu parçalar yumurtlama deneyler daha önce bağımsız kurulum sinekler ve yüzeyler için kullanılır. Şekil 1F dişi sineklerin yumurtlama için hazır olduğunda şişeler nasıl görünmelidir gösterir. Sinekler düz alt-tabaka ve bir sükroz içeren alt-tabaka arasında b…

Discussion

odaları ve burada açıklanan protokoller önceki yumurtlama deneyleri üzerinde çeşitli geliştirmeler var. Birincisi, önemli ölçüde tek hayvan tercihlerini analiz etmek ve verimi arttırmak. Her oda 30 tek kadın tahlil edebilir ve bir saat kurmak için daha az sürer. İkincisi, önceki yöntemlere göre yumurtlama tercihleri ​​tutarlılığını artırmak. arena boyutlarının standardizasyon, yüzeyler arasındaki yumurtlama substratların boyutu ve mesafe daha kolay farklı deneysel gün arasında ve fa…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

We thank the Duke Physics Shop, especially Phil Lewis, for helping us build the behavioral apparatus and attachments and creating the drawing. This work is funded by the National Institutes of Health under award number R01GM100027.

Materials

UltraPure Agarose  Invitrogen 16500-500
Sucrose Sigma S0389
Water bath  Fisher 15-462-6Q
LifeCam Cinema webcam Microsoft H5D-00013
Red LEDs Cree C503B-RAN-CA0B0AA1
Egg-laying chambers Custom Built
Camera holders Custom Built
LED holders Custom Built
Fly vials (narrow) Genesee 32-116BC

Referências

  1. Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory. Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).
  2. Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophila males. Nat. Rev. Neurosci. 14 (10), 681-692 (2013).
  3. Zwarts, L., Versteven, M., Callaerts, P. Genetics and neurobiology of aggression in Drosophila. Fly. 6 (1), 35-48 (2012).
  4. Joseph, R. M., Devineni, A. V., King, I. F., Heberlein, U. Oviposition preference for and positional avoidance of acetic acid provide a model for competing behavioral drives in Drosophila. Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (27), 11352-11357 (2009).
  5. Miller, P. M., Saltz, J. B., Cochrane, V. A., Marcinkowski, C. M., Mobin, R., Turner, T. L. Natural variation in decision-making behavior in Drosophila melanogaster. PLoS One. 6 (1), 16436 (2011).
  6. Schwartz, N. U., Zhong, L., Bellemer, A., Tracey, W. D. Egg-laying decisions in Drosophila are consistent with foraging costs of larval progeny. PloS One. 7 (5), 37910 (2012).
  7. Yang, C. H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Drosophila egg-laying site selection a system to study simple decision-making processes. Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).
  8. Kacsoh, B. Z., Lynch, Z. R., Mortimer, N. T., Schlenke, T. A. Fruit flies medicate offspring after seeing parasites. Science. 339 (6122), 947-950 (2013).
  9. Wu, C. -. L., Fu, T. -. F., Chou, Y. -. Y., Yeh, S. -. R. A Single Pair of Neurons Modulates Egg-Laying Decisions in Drosophila. PloS one. 10 (3), e0121335 (2015).
  10. Yang, C. H., He, R., Stern, U. Behavioral and circuit basis of sucrose rejection by Drosophila females in a simple decision-making task. J. Neurosci. 35 (4), 1396-1410 (2015).
  11. Gou, B., Liu, Y., Guntur, A. R., Stern, U., Yang, C. H. Mechanosensitive neurons on the internal reproductive tract contribute to egg-laying induced acetic acid attraction in Drosophila. Cell Rep. 9 (2), 522-530 (2014).
  12. Stern, U., Zhu, E. Y., He, R., Yang, C. H. Long-duration animal tracking in difficult lighting conditions. Sci. Rep. 5, 10432 (2015).
  13. Zhu, E. Y., Guntur, A. R., He, R., Stern, U., Yang, C. H. Egg-laying demand induces aversion of UV light in Drosophila females. Curr. Biol. 24 (23), (2014).
  14. Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. High-throughput ethomics in large groups of Drosophila. Nat. Methods. 6, 451-457 (2009).
  15. Klatpoetke, N. C., et al. Independent Optical Excitation of Distinct Neural Populations. Nat. Methods. 11 (3), 338-346 (2014).

Play Video

Citar este artigo
Gou, B., Zhu, E., He, R., Stern, U., Yang, C. High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (109), e53716, doi:10.3791/53716 (2016).

View Video