Os leucócitos pulmonares marginantes exibem características únicas e funções imunológicas distintas em comparação com outras populações de leucócitos. Aqui descrevemos a coleta seletiva dessa subpopulação de leucócitos pulmonares, por perfusão forçada dos pulmões em ratos e camundongos. Os leucócitos pulmonares marginais parecem críticos na determinação da suscetibilidade a doenças transmitidas pelo sangue e relacionadas ao pulmão.
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Artigo de método
Colheita seletiva de Marginating-pulmonar Leucócitos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os leucócitos pulmonares marginados (MP) são leucócitos que aderem ao endotélio interno dos capilares pulmonares. Os leucócitos MP demonstraram exibir composição e características únicas em comparação com os leucócitos de outros compartimentos imunológicos. As evidências sugerem maior citotoxicidade das células natural killer e um perfil pró e anti-inflamatório distinto da população de leucócitos MP em comparação com os imunócitos circulantes ou esplênicos. O método aqui apresentado permite a colheita seletiva de leucócitos MP por perfusão forçada dos pulmões em camundongos ou ratos. Em contraste com outros métodos usados para extrair leucócitos pulmonares, como trituração de tecidos e degradação biológica, esse método produz exclusivamente leucócitos dos capilares pulmonares, não contaminados com células parenquimatosas, intersticiais e bronco-alveolares. Além disso, a técnica de perfusão preserva melhor a integridade e o meio fisiológico dos leucócitos MP, sem induzir respostas fisiológicas devido ao processamento tecidual. Esta população única de leucócitos MP está estrategicamente localizada para identificar e reagir a células circulantes anormais, pois todas as células malignas circulantes e células infectadas são detidas ao passar pelos capilares pulmonares, interagindo fisicamente com células endoteliais e leucócitos residentes. Assim, a colheita seletiva de leucócitos MP e seu estudo sob várias condições podem avançar nossa compreensão de seu significado biológico e clínico, especificamente no que diz respeito ao controle de células aberrantes circulantes e doenças relacionadas ao pulmão.
Introdução
Os leucócitos aderentes para os capilares dos pulmões (isto é, marginating-pulmonar (MP) leucócitos) foram 1 mostrado exibir composição distinta de leucócitos e a actividade única em comparação com os leucócitos a partir de outros compartimentos do sistema imunológico (por exemplo, circulação, do baço, da medula óssea) 2- 4. Por exemplo, exposição de MP-leucócitos maior células assassinas naturais (NK) a citotoxicidade contra diversas células tumorais, em comparação com células circulantes e esplénicos NK, bem como os níveis de RNA mensageiro (mRNA) diferenciadas e aumento da secreção de citoquinas pró-inflamatórias e anti. A c....
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Protocolo
Procedimentos envolvendo indivíduos animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional Animal (IACUC) da Universidade de Tel-Aviv.
1. Protocolo Rat
- preparativos
- Organizar 2 borboleta 21 agulhas G. Opcionalmente, prepare 2 borboleta 21 g agulhas gumes contundentes mediante a apresentação da borda afiada da agulha.
- Esterilizar instrumentos cirúrgicos: 2 pares de tesouras, fórceps embotados-gumes, hemostática, fórceps dente-de tecidos esterilizadas por autoclave a 121 ° C durante pelo menos 30 min no ambiente gravidade (seco).
- Prepare heparinizado PBS (30 unidades / ml) por adição de 30 unidades de heparina....
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Resultados
A exposição MP-compartimento uma composição de leucócitos subconjunto diferente em comparação com leucócitos circulantes. Usando a análise de citometria de fluxo, as subpopulações de leucócitos foram identificados e quantificados para caracterizar a composição de ambas as circulante e leucócitos MP. Granulócitos e linfócitos foram identificados com base na frente eo lado espalha. Dentro dos linfócitos, NKRP-1 células vivas foram identificadas como células NK, CD3 + .......
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Discussão
O método aqui apresentado permite a colheita selectiva e estudo da população única de MP-leucócitos. Em comparação com circulante ou leucócitos esplénicas, a população MP é caracterizada por uma composição distinta de subpopulações de leucócitos, níveis de activação mais elevadas, maior libertação de várias citocinas, e mais elevados os níveis de mRNA de citocinas pró- e anti-inflamatórios 2,3. Especificamente, mostraram que as células NK-MP são mais citotóxicos do que as células circulatórias NK contra vária.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores e este trabalho foram apoiados pelo NIH / NCI conceder # R01CA172138 (a SBE).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| peristáltica Autoclud | |||
| Agulha borboleta | OMG | 26G | |
| Agulha borboleta | OMG | 21G * 3/4 " | |
| Solução | seringa | 1 ml | |
| seringa | Pic | 2,5 ml | |
| Solução de seringa | Pic 5 | ml | |
| Seringa | Solução Pic | 10 ml | |
Referências
- Kuebler, W. M., Goetz, A. E. The marginated pool. Eur Surg Res. 34, 92-100 (2002).
- Benish, M., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunol Res. 58
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Reimpressões e permissões
