Etkin Bir Yöntem Dediferansiye Yağ Hücreleri Elde
Summary
We have modified the conditions for DFAT cell generation and provide herein information regarding the use of an improved growth medium for the production of these cells.
Abstract
Doku mühendisliği ve hücre tedavisi klinik büyük umutlar tutun. Bu bağlamda, bu tür mezenkimal kök hücreler (MSC'ler), multipotent hücreler, hasar görmüş organ fonksiyonu geri yakın gelecekte tedavi edici kullanılabilir. Bununla birlikte, MKH'lerin ve amplifikasyon çevreleyen verimsizlik izole oldukça invaziv prosedürü dahil olmak üzere birçok teknik sorunlar, şu anda bu tedavi yöntemlerinin potansiyel klinik kullanımını engellemektedir. Burada, dediferansiye yağ hücreleri (DFAT), MSC-benzeri hücrelerin oluşumu için son derece etkili bir yöntem getirmektedir. İlginç bir şekilde, DFAT hücreleri adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücreleri dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine ayırt edilebilir. diğer gruplar, daha önce olgun adipoz dokudan DFAT hücrelerini oluşturmak için çeşitli yöntemler sunulmuştur olmasına rağmen, bizim yöntem daha etkili DFAT hücreleri üretmek için izin verir. Bu bağlamda, ortaya DFAT kültür ortamı (DCM), FBS% 20 ile desteklenen,% 20 FBS ile takviye edilmiş DMEM den DFAT hücreleri üreten daha etkilidir. Ayrıca, hücre kültürü yöntemi ile üretilen DFAT hücreleri çeşitli doku tiplerine redifferentiated edilebilir. Bu nedenle, doku, farklılaşmadan çalışmaları için çok ilginç ve faydalı model sunulmuştur.
Introduction
Hücre tedavisi ve doku mühendisliği rejeneratif tıp 1-5 alanında sıcak konulardır. Bu tedavi yöntemleri çok ümit vericidir ederken, çeşitli teknik sorunlar şu anda bunların klinik kullanımını engelleyebilir. Bu bağlamda, iPS hücrelerinin üretiminde olduğu gibi, tüm doku mühendisliği tedavileri hasta güvenliğini korumak için dış gen iletiminin serbest hücreler üretmek gerekir. Buna göre, başarılı insan DFAT hücrelerini 6 üretmek için ilk grup oldu. Birçok diğer araştırma grupları beri daha da modelin yararlılığını vurgulayarak, memeli kökenli 7-9 DFAT hücrelerini oluşturmak için bir yöntem benimsemiştir.
Birkaç çalışma boyunca, hücre kültürü ortamının kalitesi hücre orta içeriğini ayarlayarak değiştirilebilir olduğunu bulduk. Bu bulgu DFAT hücresi üretiminin başarı oranında bir artışa yol açtı ve hücre kalitesini geliştirdi; Her iki kritik faktörlerverimli gelecekte yapılacak klinik araştırmalara üreten hücreleri. Bu bağlamda ve DFAT hücresi üretimi için bir usul (benzer bir orta hücre rekombinant insan insülini, serum albümini, L-glutamik asit, çok yağ asitleri içerir orta, ve kolesterol kök mezenkimal için DCM) geliştirilmiş bir DFAT kültür ortamı içinde ve çoğalma (DKM içeriği hakkında daha fazla bilgi istek üzerine mevcuttur) geliştirildi. Kullanılan bu yöntem, yüksek kaliteli DFAT hücreleri adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücreleri dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerinin ayırt yeteneği ile üretilmiştir. Toplamda, bu valide hücre kültürü protokolü DFAT hücrelerinin kalitesini artırır ve hücre terapisi ve doku mühendisliği klinik uygulamaları geliştirmek için oldukça yararlı olabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
, In vitro dediferansiyasyon tavan kültürü olarak bilinen bir süreç geçmesi Olgun adipositler, daha ilkel bir fenotip dönmek ve proliferatif yetenekleri kazanmak olabilir. Bu hücreler dediferansiye yağ (DFAT) hücreleri de ifade edilmektedir. DFAT hücrelerinin multilinaj farklılaşması potansiyeli değerlendirildi. Analiz ve gen ekspresyon analizi DFAT hücreleri TSK 6 ile karşılaştırıldığında oldukça homojen olduğu saptanmıştır akım sitometrisi. Aslında, DFAT hüc…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported in part by Program for Creating Start-ups from Advanced Research and Technology (START Program) from the Japan Society for the Promotion of Science (ST261006IP, TM) and by Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (2014-2019) (S1411018, TM) from the Ministry of Education, Sports, Science and Technology.
Materials
| CSTI303-MSC medium | CSTI | 87-671 | This medium is defined as DCM in the text |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | It does not contain Mg2+ and Ca2+ |
| DMEM medium | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | 172012 | |
| Collagenase type II | Sigma | C-6885 | |
| Scissors | Takasago Medical Industry Co., Ltd | TKZ-F2194-1 | |
| Shaker | TAITEC | Bioshaker V.BR-36 | |
| Falcon Cell Strainer 100um Yellow | CORNING LIFE SCIENCES | DL 352360 | |
| Falcon 12.5cm² Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Blue Vented Screw Cap | CORNING LIFE SCIENCES | 353107 | |
| 18G needle | NIPRO | 02-002 | |
| 20ml Syringe | NIPRO | 08-753 | |
| Z Series Coulter Counter | BECKMAN COULTER | 383550 |
Referências
- Lanzoni, G., et al. Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas. Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).
- de Girolamo, L., et al. Mesenchymal stem/stromal cells: a new “cells as drugs” paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy. Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).
- Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. The potential of adipose stem cells in regenerative medicine. Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).
- Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy. Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).
- Ringden, O., Keating, A. Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD. Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).
- Matsumoto, T., et al. Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential. J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).
- Lessard, J., et al. Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures. J. Vis. Exp. (97), (2015).
- Lessard, J., et al. Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling. PLoS One. 10 (3), 0122065 (2015).
- Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. Biomed. Res. Int. 2015, 673651 (2015).
- Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells. Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).
- Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. Induced pluripotent stem cells: the new patient. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).
