Protocolo para isolar o mouse Círculo de Willis

Summary

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Abstract

O círculo arterial cerebral (circulus arterial cerebral) ou círculo de Willis (vaca) é uma anastomose circulatório em torno do quiasma óptico e no hipotálamo que fornece sangue para o cérebro e estruturas adjacentes. Ele tem sido implicada em várias doenças cerebrovasculares, incluindo angiopatia amilóide cerebral (CAA) -associated vasculopatias, aterosclerose intracraniana e aneurismas intracranianos. Estudos de mecanismos moleculares subjacentes a estas doenças para a identificação de novos alvos de drogas para a sua prevenção requerem modelos animais. Alguns destes modelos podem ser transgénico, enquanto que outros envolvem o isolamento do cerebro-vascular, incluindo o método CoW.The aqui descrito é adequado para o isolamento de vaca em qualquer linhagem do rato e tem um potencial considerável para o rastreio (a expressão de genes, a produção de proteína, modificações pós-traducionais de proteínas, análise secretome, etc.) estudos sobre os grandes vasos do cerebrospinal do ratovasculatura. Ele também pode ser usado para estudos ex vivo, mediante a adaptação do sistema de banho do órgão desenvolvido para artérias rato isolados olfactivos.

Introduction

O círculo arterial cerebral (circulus arterial cerebral), também conhecido como o círculo de Willis (vaca), alça de Willisor Willis polígono) foi descrita pela primeira vez por Thomas Willis em 1664. É uma anastomose circulatório localizados ao redor do quiasma óptico e no hipotálamo que pode ser considerado como um hub central fornecimento de sangue para o cérebro e estruturas circundantes. Sangue entra esta estrutura através da carótida interna e artérias vertebrais e flui para fora do círculo através do meio interior e as artérias cerebrais posteriores. Cada um destes ramos tem artérias esquerda e direita de cada lado do circulo. O basilar, pós comunicação, e comunicante anterior artérias completa o círculo (Figura 1 e Figura 2). O risco de fluxo de sangue deficiente em qualquer das artérias de escoamento é minimizado pela fusão de sangue que entra no círculo da carótida e artérias cerebrais, garantindo assim que o sangue suficiente seja fornecido ao bchuva. Essa estrutura também serve como a principal via para o fluxo sanguíneo colateral em doenças oclusivas graves da artéria carótida interna.

Vários tipos de doenças cerebrovasculares têm a sua origem na vaca. Os mais comuns são angiopatia amilóide cerebral (CAA) vasculopatias -associated, aterosclerose intracraniana e aneurismas intracranianos. ^{1, 2, 3} Esses distúrbios podem levar a hipoperfusão devido à vasodilatação e intracerebrais e / ou subaracnóidea hemorragias em última análise, traduzindo-se em acidente vascular cerebral isquêmico ou hemorrágico ou , na melhor das hipóteses, um ataque isquêmico transitório. Recentes avanços em procedimentos de diagnóstico, incluindo neuroimagem, possivelmente combinado com angiografia, tornaram possível para diagnosticar estas importantes doenças cerebrovasculares clinicamente, sem a necessidade de uma biópsia do cérebro. No entanto, os tratamentos eficazes e específicos (farmacológicas ou endovasculares) são actualmente não existe e não existe, portanto, uma necessidade de definir novosalvos moleculares.

A identificação de novos alvos de drogas para a prevenção dessas doenças em seres humanos vai exigir modelos animais e modos de isolamento do cerebro-vascular incluindo a vaca. Tais modelos devem fornecer provas de e pistas para as mudanças específicas, incluindo alterações inflamatórias, que ocorrem nas paredes dos vasos grandes em modelos animais de aneurisma da artéria intracraniana, CAA ou aterosclerose intracraniana. ^{4, 5, 6}

Nós estabelecemos um método para o isolamento do mouse vaca para facilitar os estudos de inflamação dos vasos na doença de Alzheimer (DA) e doenças relacionadas, tais como CAA. Este método para isolar a vaca rato foi desenvolvida para a avaliação da expressão do gene vascular cerebral durante a progressão da doença inflamatória. Juntamente com a detecção da deposição de amilóide beta dentro das paredes das artérias e leptomeníngeas piais, este método pode tornar mais fácil para dissuadirmina a possível relação entre a expressão do gene inflamatório na parede do cerebro-vascular e acumulação de Ap-péptido. A rede vascular do cérebro, incluindo o leptomeníngea e pial no espaço subaracnóide, é uma extensão das grandes artérias que formam o polígono de Willis. O método aqui descrito pode ser utilizado para isolar a vaca de qualquer linhagem do rato e poderia ser utilizado para todos os tipos de rastreio (por exemplo, a expressão do gene, a produção de proteínas e modificações pós-tradução de proteínas) sobre os grandes vasos do rato cerebro-vascular.

Protocol

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as normas da Comunidade Europeia para o cuidado e uso de animais de laboratório, com a aprovação do comitê de ética local para experimentação animal (Ile de France-Paris-Comitê, Autorização 4270). 1. Anestesia Infundir uma dose letal de pentobarbital (até 1 mg / 10 g de peso corporal) (agulha de calibre 27 e seringa de 1 ml) por via intraperitoneal em ratinhos adultos antes da cirurgia. <p class="jove_title…

Representative Results

O mouse PBS-perfusão é morto ea vaca é isolada como descrito no ponto 3.2 do protocolo. Quando a dissecção é realizada corretamente, a vaca deve sair em uma parte e deve ser ligeiramente transparente, devido à ausência de sangue residual na vasculatura. Figura 2: A vaca mouse após o isolamento. (A) Resumo da…

Discussion

Descrevemos aqui um protocolo reprodutível para o isolamento do círculo de Willis. As doenças cerebrovasculares mais comuns que envolvem a vaca são vasculopatias associadas à CAA, aterosclerose intracraniana e aneurisma intracraniano, todos os quais afectam as paredes dos vasos arteriais. Os fatores de risco são bem conhecidos, mas a patogênese molecular desses distúrbios cerebrais permanece mal compreendido e marcadores biológicos específicos para prever sua ocorrência faltam. Há um grande interesse em mét…

Materials

Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline	Sigma-Aldrich	D8537
Dumont #55 Forceps	Fine Science Tools	11295-51
Hardened Fine Iris Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Scissors – Straight / Sharp / Sharp   16.5 cm	Fine Science Tools	14002-16
Dumont #7b Forceps	Fine Science Tools	11270-20
Stereoscopic Zoom Microscope	Nikon	SMZ745T
CellBIND Surface 60mm Culture Dish	Corning	#3295
Peristaltic Pump – MINIPULS 3	Gilson	M312
Pentobarbital Sodique	Ceva Santé Animale	FR/V/2770465 3/1992