Descrevemos aqui um protocolo reproduzível para isolar o círculo de Willis do camundongo.
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Artigo de método
Protocolo para isolar o mouse Círculo de Willis
Neste artigo
Resumo
Resumo
O círculo arterial cerebral (circulus arterial cerebral) ou círculo de Willis (vaca) é uma anastomose circulatório em torno do quiasma óptico e no hipotálamo que fornece sangue para o cérebro e estruturas adjacentes. Ele tem sido implicada em várias doenças cerebrovasculares, incluindo angiopatia amilóide cerebral (CAA) -associated vasculopatias, aterosclerose intracraniana e aneurismas intracranianos. Estudos de mecanismos moleculares subjacentes a estas doenças para a identificação de novos alvos de drogas para a sua prevenção requerem modelos animais. Alguns destes modelos podem ser transgénico, enquanto que outros envolvem o isolamento do cerebro-vascular, incluindo o método CoW.The aqui descrito é adequado para o isolamento de vaca em qualquer linhagem do rato e tem um potencial considerável para o rastreio (a expressão de genes, a produção de proteína, modificações pós-traducionais de proteínas, análise secretome, etc.) estudos sobre os grandes vasos do cerebrospinal do ratovasculatura. Ele também pode ser usado para estudos ex vivo, mediante a adaptação do sistema de banho do órgão desenvolvido para artérias rato isolados olfactivos.
Introdução
O círculo arterial cerebral (circulus arterial cerebral), também conhecido como o círculo de Willis (vaca), alça de Willisor Willis polígono) foi descrita pela primeira vez por Thomas Willis em 1664. É uma anastomose circulatório localizados ao redor do quiasma óptico e no hipotálamo que pode ser considerado como um hub central fornecimento de sangue para o cérebro e estruturas circundantes. Sangue entra esta estrutura através da carótida interna e artérias vertebrais e flui para fora do círculo através do meio interior e as artérias cerebrais posteriores. Cada um destes ramos tem artérias esquerda e direita de cada lado do circulo. O basilar, pós comunicação, e comu....
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Protocolo
Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as normas da Comunidade Europeia para o cuidado e uso de animais de laboratório, com a aprovação do comitê de ética local para experimentação animal (Ile de France-Paris-Comitê, Autorização 4270).
1. Anestesia
- Infundir uma dose letal de pentobarbital (até 1 mg / 10 g de peso corporal) (agulha de calibre 27 e seringa de 1 ml) por via intraperitoneal em ratinhos adultos antes da cirurgia.
Perfusão 2. Vessel
NOTA: Não há necessidade de aplicar vet pomada para os olhos durante a perfusão navio. Este procedimento é ráp....
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Resultados
O mouse PBS-perfusão é morto ea vaca é isolada como descrito no ponto 3.2 do protocolo. Quando a dissecção é realizada corretamente, a vaca deve sair em uma parte e deve ser ligeiramente transparente, devido à ausência de sangue residual na vasculatura.
Figura 2: A vaca mouse após o isolamento. (A) Resumo da vaca em .......
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Discussão
Descrevemos aqui um protocolo reprodutível para o isolamento do círculo de Willis. As doenças cerebrovasculares mais comuns que envolvem a vaca são vasculopatias associadas à CAA, aterosclerose intracraniana e aneurisma intracraniano, todos os quais afectam as paredes dos vasos arteriais. Os fatores de risco são bem conhecidos, mas a patogênese molecular desses distúrbios cerebrais permanece mal compreendido e marcadores biológicos específicos para prever sua ocorrência faltam. Há um grande interesse em métodos para iso.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo VI Universidade Paris e uma bolsa Pierre Fabre Inovação.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s Fosfato Tampolado Salino | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Fórceps | Ferramentas | 11295-51 | |
| Tesoura de Íris Fina Endurecida | Ferramentas de Ciência Fina | 14090-11 | |
| Tesoura - Reta / Afiada / Afiada 16.5 cm | Ferramentas de Ciência Fina | 14002-16 | |
| Dumont #7b Fórceps | Ferramentas de Ciência Fina | 11270-20 | |
| Microscópio Zoom Estereoscópico | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Prato de Cultura de Superfície 60mm | Bomba Peristáltica Corning | #3295 | |
| - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Referências
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
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Reimpressões e permissões
