그룹 B의 쥐 모델<em> 연쇄상 구균</em> 질 식민
Summary
이 프로토콜의 목적은 쥐 모델에서 인간의 B 군 연쇄상 구균 (GBS) 질 식민지를 모방하는 것입니다. 이 방법은 숙주의 면역 반응 및 GBS 질 지속성에 기여 박테리아 인자를 조사 할뿐 아니라 치료 전략을 시험하기 위해 사용될 수있다.
Abstract
성인의 30 % – 연쇄상 구균 agalactiae (그룹 B 연쇄상 구균, GBS)는 인간의 위장관 10의 질 기관의 그람 양성, 증상이 식민지 개척자이다. 면역 손상 개인을 포함한 신생아, 임산부, 노인에서는 GBS 패혈증, 관절염, 폐렴과 뇌막염을 일으키는 원인이 침입 병원체로 전환 할 수 있습니다. GBS가 신생아의 선도적 인 세균성 병원체이기 때문에, 현재의 예방은 GBS 질 식민지와 GBS 양성 어머니의 후속 산기 항생제 치료를 위해 임신 후기 검사로 구성되어 있습니다. 무거운 GBS 질 부담은 신생아 질환과 식민지 모두의 위험 요인이다. 불행하게도, 거의 호스트 및 홍보 또는 질 식민지 GBS을 허용 박테리아 요인에 대한 알려져있다. 이 프로토콜은 세균 LOA를 결정하는 하나의 β-에스트라 전처리 매일 샘플링을 이용한 영구 GBS 질 집락을 설정하기위한 기술을 설명디. 그것은 더 자세한 방법은 추가 치료 또는 관심의 시약을 관리하고 질 세척 유체 및 생식 기관의 조직을 수집 할 수 있습니다. 이 마우스 모델 임신 중 모체의 질 집락을 제어하고 취약한 신생아로의 전송을 방지하기 위해 잠재적 인 치료 표적으로 이어질 질 환경 내 GBS 호스트 상호 작용의 이해를 촉진한다. 또한 여성의 질 기관에서 일반 세균 – 호스트 상호 작용에 대한 우리의 이해를 높이기 위해 관심이 될 것입니다.
Introduction
연쇄상 구균 agalactiae, B 군 연쇄상 구균 (GBS)는 자주 장과 건강한 성인의 비뇨 기관에서 분리 된 캡슐, 그람 양성 세균이다. 1970 년대에, GBS는 매년 신생아 질환의 7,000의 경우 1, 감염성 신생아 사망의 주요 에이전트로 나타났다. 조기 발병 GBS 질환 (EOD)는 폐렴이나 호흡 곤란으로 발생하는 첫 번째 시간, 삶의 일에 발생하고, 종종 후기 발병 질환 (LOD) 반면, 패혈증으로 발전 몇 달 후에 계속된다 자주 균혈증과 선물 2 뇌막염으로 진행한다. 2002 년 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 GBS 양성 산모 1 늦은 임신과 분만 예방 적 항생제 (IAP)에서 GBS 질 식민지에 대한 보편적 인 검사를 권장합니다. 매년 IAP로 인해 미국에서 약 1,000가지 경우에 조기 발병 질환의 감소에도 불구하고,GBS는 조기 발병 신생아 패혈증의 주요 원인 남아 있고, 후기 발병 발생 1 영향을받지 남아있다. 자궁의 여부, 노동 동안, 또는 후기 발병의 경우, GBS에 신생아 노출 수막염, 높은 규제 혈액 -의 교차의 경우, 호스트 환경과 장벽, 면역 회피의 숫자를 통해 생존, 횡단이 필요하며, 뇌 장벽이. 신생아 내에서 이러한 악성 상호 작용의 상류는 산모의 질 기관의 초기 식민지입니다. GBS 질 식민지 비율이 12.7 %, 4의 추정 평균 속도, 선진국과 개발 도상국에서 8-18% 범위 임산부. 임신 중 질 기관의 GBS의 식민지 개별 여성 5 중 자연, 상수 간헐적 또는 일시적 일 수있다. 흥미롭게도, 모성 연령> 삼십육년은 지속적 식민지 (6)와 연결되어 있습니다. GBS 질 식민지에 대한 다양한 생물학적 및 사회 경제적 위험 요인확인되었습니다. 생물학적 요인 위장 GBS의 식민지와 장 내 유산균의 부재를 포함한다. 그러나, 인종, 비만, 위생, 성적 활동은 GBS 질 캐리지 (7)과 관련되어있다.
신생아 감염을 일으키는 악명이 있지만, GBS는 산모의 감염 모두 주 산기 및 산후의 다양한됩니다. GBS 캐리지도 질병 엔티티 9 일 수 있고, 어떤 경우에는 질염 8 제시 여성에서 증가된다. 또한, 임신 중 생식 기관의 GBS 적경은 내 양수 감염이나 융 모양 막염 (10)가 발생할 수 있습니다. 또한, 임신의 3.5 %까지로, GBS는 요로 감염이나 무증상 세균 (11)을 유발하는 방광에 배포한다. 임신 중 GBS의 세균이 분만 발열, 융 모양 막염, 조산 및 prematur의 위험 증가와 관련이막 (12)의 전자 파열. 함께 찍은, 질 기관 내에서 GBS의 존재는 여러 호스트 조직의 감염에 연결하고,이 틈새 시장에서 GBS를 제거 할 수있는 기능을 모두 산모와 신생아의 건강을 위해 필수적이다.
최근까지 자궁 경부 기관과 상호 작용 GBS 검사 작업의 대부분은 체외 세포 모델 13-15로 한정 하였다. 이러한 시험 관내 실험은 표면 단백질을 포함한 부착에 중요한 요인 세균을 밝혀냈다 같은 필리 세린 풍부 반복 (17, 18),뿐만 아니라 이성 조절 시스템 (15, 19)과의 질 상피 글로벌 전사 반응 GBS 19. 그러나, 완전히 질 관 내의 호스트 미생물 작용을 해명하기 위해 강력한 동물 모델이 필요하다. 초기 작품은 GBS가 접종 된 마우스 (20, 21)와 쥐의 질 기관에서 복구 할 수 있다는 것을 보여 <SUP> 모두 임신과 비 임신 상태에서 22. 2005 년 단기 GBS 질 집락은 24 시간 기간에 걸쳐 23 질 GBS 치료에 파지 용균 효소의 효능을 조사 생쥐에서 만들어졌다. 몇 년 후, 장기 GBS 질 식민지 마우스 모델은 GBS 지속성을 관리하는 호스트와 세균 요인을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 표면 부속 (17, 18)과 GBS 두 구성 요소 시스템 19,24 포함 정착에 기여 수많은 GBS 요인을 확인했다. 이 모델은 호스트 응답 메커니즘 19,25의 식별에 기여하고 면역 펩티드 26, 프로바이오틱스 (27) 등 여러 가지 치료 전략을 시험하기 위해 사용되었다. 이 프로토콜은 마우스 질 관 GBS로 접종하고이어서 정착을 추적하고 추가적인 분석을 위해 샘플을 수집하기 위해 필요한 지침을 제공한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
호스트의 컨텍스트 내의 호스트 및 다른 미생물 모두 GBS 상호 작용의 이해의 발전을 촉진하기 위해 동물 모델이 요구된다. 이 작품은 생쥐에서 GBS 질 식민지를 확립의 기술적 측면에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 박테리아를 접종하거나 접종을 두껍게, 질 미리 세척, 또는 첨가제 식민지 수 있도록 면봉 샘플, 면역 억제제를 수집하기 위해 마취제를 사용하지 않고 마우스의> 90 % 식민지를 달?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.
Materials
| Sesame oil | Sigma Aldrich | S3547-250ML | |
| β-Estradiol | Sigma Aldrich | E8875-1G | CAUTION: Wear appropriate PPE. β-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces. |
| 200 μL gel loading pipette tips | USA Scientific | 1252-0610 | |
| Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs | Puritan | 25-801 A 50 | |
| CHROMagar StrepB | DRG International | SB282 | |
| Todd Hewitt Broth | Hardy Diagnostics | 7161C | |
| 18 G, 1.5 inch needles | BD | 305199 | |
| 26 G, 0.5 inch needles | BD | 305111 | |
| 10 mL syringes | BD | 309604 | |
| 1 mL syringes | BD | 309659 | |
| 0.45 μm PVDF syringe filters | Whatman | 6900-2504 | |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution 1X | Corning | 21-031-CV |
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