パインウッドセンチュウの交配挙動の観察と定量化、<em>マツノザイセンチュウ</em
Summary
A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.
Abstract
マツ材線虫の交尾行動を観察し、定量化するための方法は、 マツノザイセンチュウは 、実体顕微鏡下で設立されました。 B.センチュウの交配効率を向上させると相手観察の機会を増加させるために、処女大人培養し、調査のために使用されます。卵を、水で線虫を維持し、女性は10分間産卵させることにより得ました。第二段目の少年（J2）は、暗所で25℃で24時間の卵をインキュベートすることによって同期化され、初期のJ4は、別の52時間、灰色カビ、 ボトリチス・シネレア（Botrytis cinerea）とJ2を培養することによって得ました。この時点で、ほとんどのJ4線虫は彼らの生殖器の形態を使用して、男性または女性であるとして明確に区別することができました。男性と女性のJ4を回収し、バージン成体線虫を得るために、24時間に2つの異なるペトリ皿中で別々に培養しました。処女男性と処女雌はワットの低下に対になりました凹形スライドのウェル内の小胞体。交尾行動は、実体顕微鏡下でのビデオレコーダーで撮影されました。交配プロセスの全期間は82.8±3.91分（平均±SE）であったと4つの異なる段階に分けることができます、と連絡交尾、と余韻、検索。期間の平均分はそれぞれ、21.8±2.0、±1.9 28.0、25.8±0.7および7.2±0.5でした。イレブンサブ挙動が記載された：、クルージング近づいて、遭遇し、触れる、掛け、位置、取り付け、射精、分離、静止状態、およびローミング。一人の女性が3人の男性または女性3と1人の男性とグループ化されたときに興味深いことに、明らかなイントラ性的競争が観察されました。このプロトコルは、Bセンチュウの交尾行動を調査する中で、だけでなく、他の線虫の行動学的研究のための基準として機能するだけでなく、有用かつ貴重なものです。
Introduction
The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity.
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.
Protocol
Representative Results
Discussion
行動試験は、化学生態学、神経生物学、分子生物学、遺伝学の基本的な側面です。線虫、特にC.エレガンスは 、広くこれらの分野での研究のために使用されています。 線虫の交尾行動は、以前10-11検討されています。しかし、B.のセンチュウは gonochoristicと雌雄同体C.エレガンスとは異なり、その嵌合プロセスは、異なる行動機能9を有しています。?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Najie朱とLiqun白が、この作品にも同様に貢献しました。この作品は、財政的に公共の福祉における林業科学研究のための特別基金（201204501）と中国の国家自然科学基金（31170604、31270688、および31570638）によってサポートされていました。私たちは英語の書き込みに自分の役立つ提案のために博士Holighausヘリット・博士ダニエルHickfordに感謝します。
Materials
| B. xylophilus isolate Nxy61 | Extracted from Pinus massoniana in Ningbo area of China | ||
| Grey mold strain | Obtained from Forestry Academy of China | ||
| Baermann funnels | Sengong | ||
| falcon tubes | Sengong | ||
| centrifuge | Sengong | ||
| pipette | Sengong | ||
| sterile dd H2O | Sterilized by high pressure of steam at 121°C for 30 min. | ||
| Petri dishes | Sengong | ||
| PDA medium | Huankai Bio. | 021050 | |
| incubator | Sengong | ||
| Laminar flow | Sengong | ||
| glass capillary | Sengong | ||
| Stereoscope | Leica | LED5000 RL | |
| inverted stereo microscope | Zeiss | A1 | |
| concave slides | Sengong |
Referências
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