Method Article

Intravital Microscopia e trombo Indução no lóbulo da orelha de um rato calvo

DOI:

10.3791/55174

⸱

April 2nd, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Otorhinolaryngology, Head and Neck Surgery "Otto Koerner", Rostock University Medical Center, 2Department of General, Thoracic, Vascular and Transplantation Surgery, Rostock University Medical Center, 3Institute for Experimental Surgery, Rostock University Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O modelo orelha do rato SKH1-hr hr sem pêlos permite a microscopia de fluorescência intravital da microcirculação e indução trombo fototóxico sem preparação cirúrgica prévia no leito microvascular examinado. Portanto, a orelha do rato sem pêlo é um excelente modelo in vivo para estudar as interacções complexas durante a formação do trombo microvascular, evolução de trombos, e trombólise.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

complicações trombóticas de doenças vasculares são uma das principais causas de morbidade e mortalidade em países industrializados. Devido às interacções complexas entre os componentes celulares do sangue e não celulares durante a formação de trombos, os estudos fiáveis da fisiologia e patofisiologia da trombose só pode ser realizado in vivo. Por conseguinte, o artigo apresenta um modelo de orelha em ratinhos pelados e centra-se na análise in vivo da microcirculação, a formação de trombos, e evolução de trombos. Por meio de microscopia de fluorescência intravital e a administração intravenosa (iv) aplicação dos respectivos corantes fluorescentes, a análise repetitiva de microcirculação na aurícula pode ser facilmente realizada, sem a necessidade para a preparação cirúrgica. Além disso, este modelo pode ser adaptado para os estudos in vivo de diferentes problemas, incluindo a cicatrização de feridas, lesão de reperfusão, ou angiogénese. Em resumo, a orelha de ratinhos sem pêlo é um modelo ideal para a em vivO estudo da microcirculação da pele em condições fisiológicas ou fisiopatológicos e para a avaliação da sua reacção a diferentes tratamentos tópicos ou sistémicos.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O objectivo do presente artigo é descrever a técnica de microscopia intravital aplicado à aurícula do ratinho sem pêlos para a observação directa e análise da microcirculação, a formação de trombos, e evolução de trombos. Com uma taxa de incidência de 1 em 1.000, trombose venosa ainda é uma causa comum de morbidade. Embora diagnósticos, estratégias de prevenção e terapias têm sido desenvolvidos nos últimos anos, um terço de trombose venosa manifesta como uma embolia pulmonar 1. trombose arterial desempenha um papel crítico nas doenças cardiovasculares, que são a causa mais comum de morte nos países industrializados. trombose arterial a partir ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos os experimentos in vivo (7221.3-1-006 / 15) foram conduzidos de acordo com a legislação alemã sobre a protecção dos animais e o Guia NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Institute of Laboratory Animal Resources, Conselho Nacional de Pesquisa).

1. Manter geral dos animais

  1. Realizar as experiências com ratinhos hr SKH1-hr sexo masculino com idades entre 4 a 6 semanas. Utilizar animais com um peso entre 20 e 25 g.
  2. Manter os animais em uma facilidade livre de organismos patogénicos e sob condições padronizadas de 24 a 26 ° C e cerca de 60% de humidade relativa, com acesso contínuo à....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Efeitos do Tratamento de canabinóides no Trombogênese

Após a injecção de 0,05 mL de FITC-dextrano, a indução de trombos fototóxico conduz a uma lesão endotelial e a formação de um tampão de plaquetas parietal (Figuras 2 e 3). No presente estudo, a indução de trombos após a injecção ip de canabinóides (5 mg / kg de peso corporal) ou veículo resultaram em uma oclusão vascular trombótica em todas as.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Existem vários passos críticos para a indução bem sucedida de trombos no lóbulo da orelha de ratinhos hr SKH1-hr. Para solucionar o problema, as respectivas etapas do protocolo estão indicados entre parênteses.

condições de exame são ideais em animais jovens com a idade de 4 - 6 semanas e com baixo cornificao da epiderme. Nos animais mais velhos, a qualidade de visualização dos vasos é pior e menos comparáveis, devido à maior distância entre a superfície da pele e os vasos alvo (P.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm nada a revelar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm reconhecimentos.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Os ratos SKH-1/hrCharles River477podem ser comprados de outros fornecedores 
padrão de laboratório de alimentosssniff SpezialdiaetenV1594-0 pode ser comprado de outros fornecedores 
estereomicroscópio de operaçãoLeica M651/M655 pode ser comprado de outros fornecedores 
microscópio intravitalZeissAxiotech Vario 100 pode ser comprado de outros fornecedores 
objetivo (20X/0,95) Zeiss20x/0,50 W; Plano-NEOFLUAR pode ser comprado de outros fornecedores 
objetiva (63X/0,95)Zeiss63x/0,95 W; ACHROPLAN pode ser comprado de outros fornecedores 
câmera CCD em preto e branco Pieper FK 6990 IQ-S pode ser comprado de outros fornecedores 
Gravador de DVDPanasonicDMR-EX99V pode ser comprado de outros fornecedores 
cloreto de sódioBraun5/12612055/1011pode ser comprado de outros fornecedores 
Cetamina 10%Bela pharmF3901-6pode ser comprado de outros fornecedores 
A xilazina 2%Bayer6293841.00.00pode ser adquirida de outros fornecedores 
FITC-dextrano 5%Sigma 46945-100MG-Fpode ser comprado de outros fornecedores 
dexapantenol 5% pomada para os olhosBayer6029009.00.00pode ser comprada de outros fornecedores 
formaldeído 4%SigmaHT501128-4Lpode ser comprado de outros fornecedores 
DMSOSigma472301pode ser comprado de outros fornecedores 
lamínulas 5 x 5 x 1 mmMenzelL4339pode ser comprado de outros fornecedores 
As fitas adesivasLeukosilk4683400podem ser compradas de outros fornecedores 
centrífugaBeckman CoulterCLGS 15pode ser adquirida de outros fornecedores 
analisador de hematologiaSysmexKX-21 A6980pode ser adquirido de outros fornecedores 
O tubo de sangue EDTASarstedt201,341pode ser comprado de outros fornecedores 
cotonetesSanyo604-A-1podem ser comprados de outros fornecedores 
luz infravermelhaBeurer5/13855pode ser comprado de outros fornecedores 
synringe de uso únicoBraun 2020-08pode ser comprado de outros fornecedores 
seringa de insulinaBraun9161502pode ser comprada de outros fornecedores 
agulhas hipodérmicas descartáveisBraun465 7640podem ser adquiridas de outros fornecedores 
capilar de ponta a pontaSarstedt19.447pode ser comprado de outros fornecedores 
placa de aquecimentoKlaus EffenbergOP-T 185/03pode ser comprada de outros fornecedores 
tesoura 14,5 cmAesculapBC259Rpode ser comprada de outros fornecedores 
O suporte para agulhasAesculapBM081Rpode ser adquirido de outros fornecedores 
micropinçasAesculapBD331Rpodem ser adquiridas de outros fornecedores 
microscissorsAesculapOC496Rpode ser comprado de outros fornecedores 
bisturi 21Dahlhausen11.000.00.511pode ser comprado de outros fornecedores 
O Prolene 7-0EthiconXNEH7470pode ser comprado de outros fornecedores 
Prolene 6-0EthiconXN8706. P33pode ser comprado de outros fornecedores 
eletrocautérioServopraxH40140pode ser comprado de outros fornecedores 
almofadaaquecimento integrado, 0.5  cm de altura plano
de acrílico

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
  2. Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
  3. Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Intravital MicroscopyThrombus InductionHairless MouseFluorescence MicroscopyMicrocirculation AnalysisPhototoxic ThrombosisDextran InjectionVessel OcclusionAuricle PositioningCannabinoid Effects

Related Articles