Den vävnadsspecifika extracellulära matrisen (ECM) är en viktig förmedlare av cellfunktion. Denna artikel beskrivs metoder för att syntetisera rena ECM-härledda skum och mikrobärare som är stabila i odling utan behov av kemisk tvärbindning för tillämpningar inom avancerad 3D in vitro cellkulturmodeller eller som pro-regenerativa bioscaffolds.
Cellfunktion medieras av interaktioner med den extracellulära matrisen (ECM), som har komplexa vävnadsspecifik sammansättning och arkitektur. I fokus för denna artikel är på metoder för att tillverka ECM-härledd porösa skum och mikrobärare för användning som biologiskt relevanta substrat i avancerad 3D in vitro cellkulturmodeller eller som pro-regenerativa byggnadsställningar och celltillförselsystem för vävnadsteknik och regenerativ medicin. Med användning av decellulariserade vävnader eller renat olösligt kollagen som ett utgångsmaterial, kan de tekniker tillämpas för att syntetisera en bred uppsättning av vävnadsspecifika bioscaffolds med anpassnings geometrier. Taktiken involverar mekanisk bearbetning och mild enzymatisk digerering för att ge en ECM suspension som används för att tillverka de tredimensionella skum eller mikrobärare genom kontrollerade frysnings- och lyofilisering förfaranden. Dessa rena ECM-derived ställningar är mycket porös, men ändå stabil utan behov av chemical tvärbindningsmedel eller andra tillsatser som kan påverka cellfunktionen negativt. Ställningsegenskaperna kan avstämmas i viss utsträckning genom varierande faktorer såsom ECM suspensionskoncentrationen, mekaniska bearbetningsmetoder, eller syntesbetingelser. I allmänhet är de ställningar är robusta och lätta att hantera, och kan bearbetas såsom vävnader för de flesta vanliga biologiska analyser, som ger en mångsidig och användarvänlig 3D cellodlings plattform som härmar den nativa ECM kompositionen. Sammantaget kan dessa enkla metoder för att tillverka skräddarsydda ECM-härledda skum och mikrobärare vara av intresse för både biologer och biomedicinska ingenjörer som vävnadsspecifika cell lärorikt plattformar för in vitro och in vivo-applikationer.
Den extracellulära matrisen (ECM) är sammansatt av en komplex 3D nätverk av proteiner, glykoproteiner och polysackarider 1. Förr betraktades som en övervägande strukturell ram, är det nu väl erkänt att ECM innefattar en mångfald av bioaktiva molekyler med viktiga funktionella roller 2. Cell-ECM-interaktioner kan rikta cellöverlevnad, adhesion, migration, proliferation och differentiering 3. Medan de större klasserna av ECM makromolekyler är i allmänhet väl konserverad över vävnader och arter, har varje vävnad en unik matriskomposition och arkitektur 4. Sammantaget ger det vävnadsspecifika ECM en instruktiv mikromiljö som medierar funktion från den subcellulära till vävnaden / organet skala 5.
På grund av den kritiska roll ECM vid förmedling av cellfunktion, har det ökat intresse för deveckling av ECM-härledda bioscaffolds för applikationer inom vävnadsteknik och regenerativ medicin. I synnerhet, har metoden för decellularisering i stor utsträckning utforskats som ett medel för att erhålla ECM från ett brett spektrum av vävnader för användning som ett ställningsmaterial för vävnadsregenerering och celladministrering 5, 6, 7. Decellularisering involverar typiskt en serie av mekaniska, kemiska, och / eller biologiska behandlingssteg inriktade på att avlägsna celler och cellulära komponenter, medan idealt orsakar minimala ändringar i 3D-strukturen och sammansättningen av ECM 8. Genom att kartlägga litteraturen kan olika decellularisering protokoll identifieras för så gott som alla vävnader i kroppen 7.
Medan decellulariserade vävnader kan användas direkt som implanterbara stödstrukturer eller 3D cellodlingsunderlag, cellulär infiltration kanbegränsas i vävnader med en tät ECM struktur 9. Vidare kan den naturliga heterogenitet i ECM orsaka variabilitet i cellvidhäftning och spridning inom de decellulariserade matriser, vilket potentiellt skulle kunna påverka den cellulära responsen 10. Övergripande, medan lovande för vissa tillämpningar, applicera decellulariserade vävnader i deras intakt form erbjuder begränsad mångsidighet i fråga om avstämningsställnings egenskaper inklusive form, porositet och styvhet, såväl som leveranssättet för in vivo-applikationer.
För att kringgå dessa begränsningar är många forskargrupper applicering ytterligare bearbetningsmetoder för att generera skräddarsydda ställnings format med hjälp av decellulariserade vävnader som ett basmaterial. I den enklaste formen, kan det innebära cryomilling de decellulariserade vävnader för att generera injicerbara vävnadsspecifika ECM partiklar 11. Dessa ECM partiklar kan införlivas som en cell-instructive komponent i komposit ställningar med andra biomaterial, såsom in situ-tvärbindnings hydrogeler 12, 13, 14. Förutom mekanisk bearbetning, kan decellulariserade vävnader också utsättas för enzymatisk digestion med proteolytiska och / eller glykolytiska enzymer för att fabricera ECM-härledda hydrogeler, skum, mikrobärare, och beläggningarna 15, 16, 17, såväl som för att syntetisera bioinks för 3D-utskrift 18.
Förutom vävnadstekniska tillämpningar, ECM-derived bioscaffolds hålla en stor potential för generering av högre trohet in vitro-modeller för biologisk forskning. Det finns ett stort behov av att utveckla 3D cellodlingssystem som bättre rekapitulera de infödda cellulära mikro 19. Mest in vitro cell kultur studier hittills utförs på vävnadskulturpolystyren (TCPS), som har liten korrelation med den biologiskt komplexa och dynamiska cellulära miljön finns inom levande vävnader 20. Medan praktiskt för att studera cellulära interaktioner inom en kontrollerad miljö, odling av celler på dessa förenklade styva 2D substrat förändrar cellvidhäftning och morfologi, liksom både cell-cell- och cell-ECM interaktioner 21, 22. De cellulära anpassningar som observerats på 2D TCPS kan påverka intracellulära signalvägar som reglerar diverse cellfunktioner inklusive överlevnad, proliferation, migration och differentiering, där frågor av relevans av 2D studier i modellering in vivo-system 23. Det har ökat erkännande av att cellulära beteende kan variera kraftigt i 2D kontra 3D-system 24, och att biokemiska och biomechanical signalering med ECM är nyckel mediatorer av cellfunktionen 25. Många grupper har försökt att övervinna begränsningarna av etablerade 2D system genom beläggning TCPS med ECM-komponenter såsom kollagen, laminin och fibronektin. Även om dessa strategier kan förbättra cellbindning och kan förändra cellulära svar förblir dessa modeller begränsas av deras 2D konfiguration som inte efterlikna den komplexa rumsliga organisation eller biokemi infödda ECM 26, 27.
Vår bioteknik laboratorium har varit intresserade av utvecklingen av ECM-härledda bioscaffolds som substrat för 3-D cellodling och vävnadskonstruktionsapplikationer. Framför allt har vi börjat använda sig av decellulariserade fettvävnad (DAT) som en byggnadsställning plattform för fett regeneration 28. Dessutom har vi etablerat metoder för syntes 3D mikrobärare och porösa skum som använder DAT digererades med det proteolytiska enzymet pepsin eller glykolytiska enzymet α-amylas 29, 30, 31. Synnerhet har vi visat i alla av dessa ställningsformat som fetthärledda ECM tillhandahåller en induktiv mikromiljö för adipogen differentiering av humana fettväv härledda stam / stromala celler (ASC: er) i kultur. Mer nyligen utvidgade vi våra tillverkningsmetoder för att generera 3D-porösa skum från α-amylas-digererad porcin decellulariseras vänstra ventrikeln (DLV) (decellularisering metoder anpassade från Wainwright et al. 32), och visade att de ger en stödjande plattform för att inducera tidig cardiomyogenic markör uttryck i humana perikardiell fetthärledda ASCs 31.
Denna artikel beskriver i detalj metoder för syntes av icke-kemiskt tvärbundna porösa 3D skum och mikrobärare härledda renodlatfrån α-amylas-digererad ECM för användning som biologiskt komplexa 3D i cellkultur vitro substrat och som biomaterial för vävnadsregenerering. I teorin kan vilken ECM källa innehållande högmolekylär kollagen skall användas som utgångsmaterial för dessa tekniker. För att demonstrera flexibiliteten hos detta tillvägagångssätt, har de metoder använts för att generera vävnadsspecifika bioscaffolds med användning av humant DAT, porcin decellulariserad dermalvävnad (DDT) 8, och porcint DLV som representativa exempel. Figur 1 ger en visuell översikt av tillverkningsprocessen för ECM-härledda skum och mikrobärare.
Figur 1. Översikt över: Sätt för framställning av den vävnadsspecifika ECM-härledda Skum och mikrobärare. 1. decellulariserade vävnader, ställdes enligt etablerade decellularization protokoll, kan användas för vävnadsspecifik ECM-härledda bioscaffold tillverkning. Makroskopiska bilder visas av hydratiserad human DAT (framställd såsom beskrivs i Flynn 2010 28), svin-DDT (framställd såsom beskrivs i Reing, JE, et al. 2010 8), och porcint DLV (framställd såsom beskrivs i Wainwright et al. 2010 32 ), som representativa exempel på ECM källor som kan användas som utgångsmaterial. Skalstrecken representerar 3 cm. 2. decellulariserade vävnader lyofiliseras och sedan 3. mekaniskt malet. Skalstrecken representerar 1 cm. 4. Den malda ECM kan sedan cryomilled, som är valfri för skumtillverkning, men krävs för mikrobärare syntes. Skalstrecket representerar 3 mm. 5. Den malda eller cryomilled ECM digereras sedan med α-amylas och homogeniserades för att skapa en homogen ECM suspension. Skalstrecket representerar 1 cm. <strong> 6a) För skumtillverkning, är ECM suspensionen överfördes till en användardefinierad form, frystes och lyofiliserades för att generera en porös 3D byggnadsställning med en väldefinierad geometri. Skalstrecket representerar 1 cm. 6b) För mikrobärare tillverkning, är det cryomilled ECM suspensionen electrosprayed att generera diskreta sfäriska mikrobärare. Skalstrecket representerar 2 mm. 7. Skummen och mikrobärama kan sedan gradvis rehydreras och ympades med celler. Representativa bilder visas av humana ASC: er (viabla celler = grön) ympades på en DAT skum (vänster) och DAT mikrobärare (höger). Skalstrecken representerar 100 ^ m. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
I allmänhet, bioscaffolds härledda från decellulariserade vävnader kan närmare approximera den komplexa 3D sammansättning och struktur av ECM i den nativa cellulära mikromiljön jämfört med syntetiska ställningar eller standardodlingsmodeller baserade på 2D TCPS. Såsom tidigare diskuterats, cell-ECM-interaktioner är kritiskt viktiga vid förmedling av cellbeteende både i kultur och i kroppen 1. Erkänner att de biokemiska, biofysiska och biomekaniska egenskaper hos ECM är unika för varje vävnad, är det allt fler bevis för att stödja den logiska grunden för att applicera vävnadsspecifika lösningar i utformningen av biomaterial för vävnadsteknik, liksom i utvecklingen av mer fysiologiskt relevanta odlingsmodeller för in vitro-experiment 20. Utnyttjande decellulariserade vävnader som utgångsmaterial, kan våra metoder införliva den komplexa sammansättningen av den vävnadsspecifika ECM inom mer customizable ställnings format. Medan de mekaniska och enzymatiska behandlingssteg kommer att resultera i en förlust av den nativa ECM ultrastruktur har tidigare studier med DAT visat att läro effekterna av adipos-härledda ECM är konserverade i dessa ställnings format, vilket antyder att bioscaffold kompositionen är en nyckelförmedlare av cellfunktion 11, 29. En betydande fördel med att använda ECM-härledda skum och mikrobärare som cellodlingssubstrat, jämfört med de intakta decellulariserade vävnader är att de är mer homogena, vilket kan förbättra likformighet i cellfördelning och cell-cell / cell-ECM-interaktioner.
De metoder som beskrivs här kan användas för att generera ett brett spektrum av vävnadsspecifika bioscaffolds för användning i cellkultur och vävnadskonstruktionsapplikationer. Till exempel, förutom DAT, DDT och DLV, vårt labb har framgångsrikt tillämpat dessa tekniker för att generera 3D-porOU skum med användning av decellulariserade ben, brosk, nucleus pulposus, och trådbroskringen, såväl som kommersiellt tillgängliga, olösligt kollagen som härrör från bovin sena. Från en in vitro perspektiv, skulle dessa bioscaffolds användas som en grund för högre-fidelity 3D odlingsmodeller för undersökning av cellbiologi, fysiologi eller sjukdomspatologi 38, såsom bioaktiva substrat i hög genomströmning läkemedelsscreenings plattformar 39, eller som instruktiva matriser för stammen celldifferentiering 40, 41. DAT, DDT och DLV skum tillverkade vid koncentrationer av 25 – 50 mg / ml är stabila i långtids in vitro-kultur (testad upp till 28 dagar). Vidare kan alla tre typer av mikrobärare stödja cellvidhäftning och proliferation under dynamiska förhållanden i en låg-skjuvning spinnerodlingssystemet (10 – 15 varv per minut) under minst 2 veckor. För in vivo tillämpningar biokompatibla och biodegradable ECM-härledda skum och mikrobärare håller löfte såsom off-the-shelf produkter för att stimulera konstruktiv vävnadsombildning och regenerering 11, 29. Vidare skulle de celladhesiva ställningar användas som cellterapi tillförselsystem 42, 43. Som ett exempel, var DAT skum visat att främja angiogenes och adipogenes när ympades med allogena ASCs och implanterades subkutant i en immunkompetent råttmodell 29. Förhållande till den intakta DAT, den mer höggradigt bearbetade DAT skum nedbrytes mycket snabbare, med en minskning i volym 50% noterades vid 3 veckor när de integrerades med värdvävnader, och nästan fullständig resorption av 12 veckor. Emellertid skummen inducerade också en mer potent angiogen respons, vilket tyder på att den enzymdigere ECM hade unika pro-regenerativa effekter. På liknande sätt skulle de ECM-härledda mikrobärare användas som in vitro </ em> cellodlingssubstrat inom dynamiska kultursystem och som injicerbara cellleveransfordon 11, 30, 44. Mer specifikt, skulle området med liten diameter och stora ytan av mikrobärama möjliggöra leverans av en stor mängd av celler i en liten volym, samtidigt som den ger en matris som kan bidra till att stödja cellviabilitet och öka cell retention vid injektionsstället 30. Före användning i något levande system, är det viktigt att säkerställa att käll ECM är väsentligen fri från antigena cellulära komponenter och / eller potentiellt cytotoxiska decellularisering reagenser som kan utlösa en negativ värdrespons 7.
Det proteolytiska enzymet pepsin används vanligen vid framställning av ECM-härledda hydrogeler 15. Pepsin är ett ospecifikt proteas som kommer att smälta kollagen och andra ECM-proteiner into små fragment 45. Medan hydrogeler tillverkade av pepsindigere ECM har rapporterats att ha cell lärorikt effekter, är en begränsning att dessa material tenderar att vara extremt mekaniskt svaga 46. I vårt inledande utvecklingen av DAT mikrobärare, utnyttjade vi en komposit tillvägagångssätt där pepsin-digere DAT kombinerades med alginat och sattes droppvis till CaCl 2 för att bilda sfäriska pärlor 30. Pärlorna var därefter fototvärbundna och alginatet extraherades med användning av natriumcitrat. Förutom kravet på kemisk tvärbindning, en nyckelbegränsning var att mikrobärarna framställda med detta tillvägagångssätt hade dålig stabilitet under ett storleksintervall av 900 till 950 | im 30. I stället för pepsin, de metoder som presenteras här utnyttja en mer mild spjälkning av ECM med den glykolytiska enzymet α-amylas, som postuleras för att klyva kolhydratgrupper från telopeptide regioner av kollagen, och därigenom öka löslighet i ättiksyra 37. Detta tillvägagångssätt möjliggör isolering av starkt polymeriserad kollagen som kan användas för att generera rena ECM-härledda skum och mikrobärare utan behov av kemisk tvärbindning eller andra tillsatser. Dessa bioscaffolds är stabiliserade genom fysiska interaktioner och vätebindning mellan välbevarade kollagenfibriller, liknande till kollagenet i den nativa ECM mikromiljö.
Skummen är en mycket flexibel plattform som kan tillverkas i ett brett spektrum av geometrier beroende på den specifika formen valts. För cellodlingsstudier, kan skummen gjutas direkt i TCPS brunnsplattor, för att bilda beläggningar eller 3D-ställningar med varierande tjocklek. Att fabricera 3D skum med mycket likformiga ytor, är det rekommenderat att en anpassad gjutform är utformad som kan förseglas på båda sidor med plast- eller glasskivor. Antingen hackad eller cryomilled ECM kan användas för att syntetiseraskummen. I allmänhet, har vi funnit att de cryomilled skummen tenderar att vara makroskopiskt mjukare och har en mer störd ultrastruktur vid lägre koncentrationer 31, 36. Beroende på vävnadskällan, kan de ytterligare mekaniska bearbetningssteg orsaka förändringar i ECM sammansättning som kan påverka cellfunktionen. Till exempel i vårt tidigare arbete, var laminin upptäcktes i malet DLV skum, men inte cryomilled DLV skum 31. I kontrast, var kollagen I, kollagen IV, laminin och fibronektin detekteras i både malet och cryomilled DAT skum 36. Utöver de mekaniska bearbetningssteg, kan porositeten och porstorleken hos skummen avstämmas i viss utsträckning genom att variera ECM suspensionskoncentrationen och frystemperaturen 47. I allmänhet, lägre koncentrations skum (~ 10-15 mg / ml) är kvalitativt mer porösa, men kan dra ihop sig snabbt och har dåligstabilitet i långtidsodling 31, 36. På liknande sätt, en långsammare frysning hastighet, typiskt genom en högre frystemperatur, kan resultera i större porer i skummen på grund av storleken av iskristallerna som bildas under tillverkning 29. Alla dessa parametrar kan påverka cell interaktioner med material, inklusive fäste, infiltration och ombyggnad. Till exempel, kan celltillväxt på skum som är framställda med högre ECM koncentrationer begränsas till de ytområden, i synnerhet med malet ECM källor och under statiska odlingsbetingelser 36.
För mikrobärarna, de nyckelparametrar som kan avstämmas är ECM suspensionskoncentrationen, nål gauge, och pålagd spänning, med högre koncentrationer typiskt utbyte ge mikrobärare som är mer stabila under långtids dynamisk kultur. Efter initieringen av elektros, ECM suspension dropparna bör snabbt falla in i centrum av kolven, i den riktning av aluminiumfolie samlare. För att förhindra aggregation, är det viktigt att pärlorna kontakta flytande kväve före folien. Avståndet mellan nålen och ytan hos det flytande kvävet kan justeras för att uppfylla dessa krav. Det är viktigt att notera att optimering kan krävas beroende på egenskaperna hos varje specifikt ECM källa, särskilt vid val av koncentrationsintervall som kommer att generera stabila bioscaffolds. En annan viktig faktor är decellularisering protokoll som används för att generera utgångsmaterialen, som decellularisering metoder som bryter ned ECM eller närvaron av kvarvarande reagens (t ex ytaktiva ämnen) kan påverka stabiliteten hos de resulterande skummen och mikrobärare negativt. Om utmaningar påträffas med bioscaffold stabilitet, alternativ som kan undersökas innefattar användning av en mer gradvis rehydrering, vilket ökar ECM suspension koncentration, och utforska malet kontra cryomilled ECM. Skulle alla dessa alternativ inte löser problemet, kan det vara nödvändigt att undersöka alternativa decellularisering protokoll eller ECM källor.
För att säkerställa reproducerbarhet under byggnadsställning produktion måste särskild försiktighet iakttas vid vissa steg i protokollet. När cryomilling de decellulariserade vävnader, är det rekommenderat att fräsning utföras omedelbart efter lyofilisering i en torr miljö för att minska sannolikheten för partikel aggregering på grund av absorption av fukt från omgivningen. Under mikrobärare tillverkning, föreslås det att suspensionen electrosprayed i små satser, med en maximal volym av 3 ml, för att undvika problem med provkylning som kan resultera i igensättning av nålen. Vidare är det viktigt att mikro inte får tina efter elektrosprocessen. Att behålla sin sfäriska geometri och mekanisk stabilitet, den microcarriers bör samlas in från det flytande kvävet, transporteras i en flytande kväve-fylld behållare, och omedelbart lyofiliseras. Slutligen, för både skum och mikro, är det viktigt att rehydrering stegen utförs långsamt under en period av flera dagar. Snabba rehydratisering kan resultera i strukturell kollaps på makro- och / eller mikroskala. Vidare måste rehydrering ske långsamt för att förhindra bildandet av små luftbubblor inom ställningen, som kan kräva en betydande mängd tid för avgasning under lätt vakuum.
Sammanfattningsvis kan de metoder som presenteras i detta dokument användas för att tillverka en mångfald av vävnadsspecifika skum och mikrobärare bestående av ren, icke-kemiskt tvärbundna ECM. En fördel för biologiska forskare är att bioscaffolds är lätta att hantera och kan bearbetas på liknande sätt till vävnader vid utförande analyser med tekniker såsom histologi, immunhistokemi, eller gen- och proteinexpressionsanalyser.Dessutom kan ECM-härledda ställningar vara enzymatiskt nedbrutna att extrahera ympade cellpopulationer eller kan användas direkt som bionedbrytbara och biokompatibla cell tillförselvehiklar. Sammantaget har denna flexibla plattformsteknologi stor nytta för många tillämpningar, inklusive för 3D cellodlingsstudier undersöker cellfunktion, som expansionscellsubstrat, och som pro-regenerativa bioscaffolds.
The authors have nothing to disclose.
The Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) of Canada and the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) have provided funding for this work. The authors would like to acknowledge Dr. Amin Rizkalla for the use of his electrospraying system, the Nanofabrication Facility at Western University for use of SEM imaging equipment, the Mount Brydges Abattoir for the provision of porcine tissue samples, and Drs. Aaron Grant, Brian Evans, and Robert Richards for their clinical collaborations in support of this research.
Acetic acid, glacial | BioShop | ACE222.500 | |
Alligator clip leads | VWR | 470149-728 | |
Aluminium foil | Fisher Scientific | 01-213-101 | |
a-amylase | Sigma | 101074694 | from Aspergillus aryzae |
Analytical balance | Sartorius | CPA225D | |
Centrifuge | Thermo Scientific | 75004251 | With swinging bucket rotor for 15 and 50 mL centrifuge tubes |
Centrifuge tubes (15 mL) | Sarstedt | 62.554.205 | |
Centrifuge tubes (50 mL) | Sarstedt | 62.547.205 | |
Collagen from bovine achilles tendon (insoluble) | Sigma | C9879 | Or similar insoluble collagen source; Can be used as an alternative to decellularized tissues to fabricate the foams and microcarriers |
Cryomilling system | Retsch | 20.745.0001 | MM 400 |
Dessicator | Fisher Scientific | 8624426 | For lyophilized ECM and bioscaffold storage |
DMEM: F12 Hams | Sigma | D6421 | Used for proliferation media |
Dewar flask | Fisher Scientific | 10-196-6 | Low form; volume range of 250 – 500 mL |
Double distilled water | From Barnstead GenPure xCAD Water Purification System | ||
D-PBS | Wisent | 311425125 | |
ECM | Isolated from human adipose tissue, porcine dermis or porcine myocardium, as described in Flynn et al. 2010, Reing et al. 2010, and Wainwright et al. 2010 (ref # 28, 8, 32) | ||
Ethanol | Greenfield Specialty Alcohols Inc. | P016EAAN | Absolute |
Fetal bovine serum | Wisent | 80150 | Used for proliferation media |
Forceps | VWR | 37-501-32 | For transferring the foams |
Freezer (-20 °C) | VWR | 97043-346 | |
Freezer ( -80 °C) | Thermo Scientific | EXF40086A | |
Glass vials | Fisher Scientific | 03-339-26D | To store lyophilized cryomilled ECM |
Hand held homogenizer | Fisher Scientific | 14-359-251 | Speed: 8000 – 30,000 RPM |
Homogenizer accessories: saw tooth bottom generator probes | Fisher Scientific | 14-261-17 | 10 X 95 mm |
Liquid nitrogen | For electrospraying | ||
Lyophilizer | Labconco | 7750021 | FreeZone4.5 |
Milling chamber | Retsch | 02.462.0213 | 25 mL volume recommended |
Milling balls | VWR | 16003-606 | 10 mm diameter, stainless steel recommended |
18G needle | VWR | C ABD305185 | For dispensing ECM suspension into moulds |
Orbital incubator shaker | SciLogex | 832010089999 | Temperature controlled (37 °C) |
Penicillin-streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | Used for proliferation media |
Pipet-Aid XP | Mandel Scientific | DRU-4-000-101 | |
Retort stand | VWR | 470019-526 | |
Retort stand clamp | VWR | 21573-606 | |
Safety-Lok Syringe | BD | 309606 | 3 mL luer lock syringe for microcarrier fabrication and dispensing ECM suspension |
Serological pipettes (10 mL ) | Sarstedt | 86.1254.001 | |
Serological pipettes (25 mL) | Sarstedt | 86.1685.001 | |
Sodium chloride | BioShop | 7647-14-5 | |
Sodium phosphate monobasic | BioShop | 10049-21-5 | |
Scoopula | VWR | 89259-968 | For collecting microcarriers |
Surgical scissors | VWR | 82027-590 | |
Syringe pump | VWR | 10117-490 | Microprocessor controlled |
High voltage power supply | Gamma High Voltage Research | ES30P-5W/DDPM | Capable of recommended 15 – 25 kV voltage range |
12-well plates | Fisher Scientific | 12565321 | For use as molds during foam fabrication; Other sizes or user-defined molds can also be selected |
Winged infusion set | Terumo | 22258092 | 30 cm tubing length, 25 G 3/4 " recommended; Other needle gauges can be used and may influence microcarrier diameter |