실시간 혈류 역학 모니터링을 이용한 마우스의 간경화로 모델링 된 통제 할 수없는 출혈성 쇼크
Summary
외상 환자 중 사망의 중요한 원인 인 통제되지 않는 출혈은 쥐 모델에서 표준 간 열화를 사용하여 모델링 할 수 있습니다. 이 모델은 일관된 혈액 손실, 생존을 가져오고 지혈제를 검사 할 수있게합니다. 이 기사에서는이 중요한 모델을 수행하기위한 단계별 프로세스를 제공합니다.
Abstract
통제되지 않는 출혈은 외상 환자들 사이에서 예방 가능한 사망의 중요한 원인입니다. 우리는 일관된 출혈, 혈역학 적 변화 및 생존을 가져 오는 간혹 열상 을 통한 통제되지 않는 출혈의 쥐 모델을 개발했습니다.
마우스는 간장의 좌측 중간 엽의 표준화 된 절제를 시행한다. 기계적 개입없이 출혈이 허용됩니다. 지혈제는 연구자의 관심에 따라 전처리 또는 구조 요법으로 투여 할 수 있습니다. 출혈하는 동안 왼쪽 대퇴 동맥 라인을 통한 실시간 혈역학 모니터링이 수행됩니다. 마우스를 희생시키고, 출혈량을 정량화하고, 혈액을 추가 분석을 위해 수집하고, 장기를 상해 분석을 위해 수확합니다. 실험 설계는 여러 동물을 동시에 시험 할 수 있도록 기술되어 있습니다.
통제되지 않는 출혈의 모델로서 간 출혈이 존재한다.주로 쥐와 돼지 모델에서의 문헌. 이 모델 중 일부는 혈역학 모니터링을 사용하거나 출혈을 정량화하지만 일관성이 부족합니다. 현재의 모델은 출혈이 통제되지 않은 혈류 역학의 메커니즘을 더 연구하기 위해 트랜스 제닉 라인과 높은 처리량 메커니즘을 사용하는 이점을 제공하는 생쥐 모델에서의 혈액 손실, 실시간 혈류 역학 모니터링의 정량화를 통합합니다.
Introduction
외상은 전 세계 젊은이들 사이에서 사망 및 장애를 유발하는 주요 원인입니다. 1 통제되지 않는 출혈은 중상을 입은 외상 환자들 사이의 주요 사망 원인입니다. 출혈 외상 환자의 관리는 외과 적 출혈의 통제와 소생술 및 분실 된 혈액의 대체 등 두 가지가 있습니다.
출혈성 쇼크의 동물 모델은 외상 연구의 초석이었으며 외상성 / 출혈성 쇼크의 병리 생리학 및 치료의 평가에 사용될 수 있습니다. 동물 모델의 3 , 4 충격은 통제 된 출혈과 통제되지 않는 출혈의 두 가지 방법으로 광범위하게 달성 할 수 있습니다. 5 , 6 통제 된 출혈은 일정한 혈압을 제거하기 위해 또는 일정한 혈압 (고정 압력)을 얻기 위해 혈액 제거에 의해 수행됩니다. 동안se 모델은 출혈성 쇼크의 기전 및 면역 변화의 평가에 유용하며, 지혈제 시험에 적용 가능하지 않으며 외상 후 출혈의 임상 시나리오를 모방하지 않는다. 이 정도면, 우리는 쥐 모델에서 지혈 변화와 응고 인자를 시험 할 수있는 통제되지 않는 출혈 모델을 개발하려고했습니다. 간은 간으로의 이중 혈액 공급 때문에 부분적으로 조절되지 않는 출혈에 대한 매력적인 옵션이며 둔각 및 관통 외상에서 가장 흔히 손상받는 인방 내 기관 중 하나입니다. 높은 임상 관련성을 고려할 때, 간은 통제되지 않은 출혈의 모델로 사용되어 왔으며, 가장 일반적으로 쥐와 돼지 모델에서 사용되었지만 최근에는 영장류에서도 발생합니다. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </sup> Murine 모델은 또한 분쇄 모델 또는 둔기 외상과 같은 간 손상을 포함 시켰습니다. 그러나 이러한 모델은 간 손상에 이차적 인 출혈성 쇼크를 유발하지 않습니다. 13 , 14
제어되지 않는 간 출혈의 쥐와 돼지 모델은 소생술 및 혈역학 모니터링을 보는 데 가치가 있지만 비용, 사용 된 동물 수 및 분석을 위해 사용 가능한 상대적으로 부족한 형질 전환 라인과 같은 다양한 이유로 쥐 모델보다 유리하지 못합니다 특정 세포 및 분자 신호 전달. 현재의 쥐 모델은 표준화 된 간 열화, 혈액 손실 정량화, 혈류 역학 모니터링 및 생존 분석 수행 능력을 포함하여 현존하는 간 출혈 모델과 중요한 유사점을 공유한다. 많은 기존 모델은 이러한 측면의 일부만을 통합하는 반면, 우리 모델은 많은 생리적 변형을 측정하기 위해 개발되었습니다동시에 여러 쥐에서 b아 먹는다. 뿐만 아니라, 쥐 모델의 개발은 소생을 넘어서고 제어되지 않은 출혈에서의 더 큰 병태 생리학 기전과 진보 된 분자 기술을 사용하는 비용 효율적인 고효율 모델의 가능성을 열어줍니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 설명 된 쥐 간 열공 모델은 제어 할 수없는 출혈의 안정적이고 일관된 모델을 제공합니다. 이 모델은 수행하기 쉽지만 세심한 고려가 필요한 중요한 단계가 있습니다. 이 모델의 가장 기술적으로 어려운 부분은 혈역학 모니터링과 유체 / 약물 투여를위한 대퇴 혈관의 삽입입니다. 신경의 해부 및 동맥 절개 / venotomy 동안주의를 기울여야합니다. 특히 생존 모델의 경우 신경 마비와 가능한 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 원고의 작업은 Hemostasis and Vascular Biology (P3HVB)의 Vascular Medicine Institute 파일럿 프로젝트 프로그램과 AAST Research Fellowship에서 닐 박사에게 자금을 지원하여 지원되었습니다. 이 연구는 R35 GM119526-01 및 UM1HL120877-01의 미국 국립 보건원 연구비 지원에 의해 지원됩니다.
Materials
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
| 0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
| gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
| 30G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 23G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
| sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
| sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
| 7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
| 1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
| betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
| 1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
| hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
| Computer | Dell | |
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
| circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
Referências
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