JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicina

Tavşan sklera bir araç olarak ikinci harmonik üretimi sinyalleri tedavi doku (TXL) için miyopi Cross-linking değerlendirilmesi için

Published: January 06, 2018
doi:
10.3791/56385
, , ,
1Department of Ophthalmology,Columbia University College of Physicians and Surgeons, 2Confocal and Specialized Microscopy Shared Resource, Herbert Irving Comprehensive Cancer Center,Columbia University

Summary

Bu protokol kimyasal ikinci harmonik üretimi görüntüleme ve diferansiyel kalorimetre taramakullanarak tavşan sklera cross-linking değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Abstract

Yapısal proteinler (fibriler collagens) tedavisi için içine kimyasal bağları (enzimatik olmayan cross-linking) tanıtarak doku güçlendirmek için yöntemleri fotokimyasal cross-linking ve doku (TXL) yöntemleri cross-linking içerir. Mekanik doku özellik değişikliklerini inducing için tür yöntemler için kornea Keratokonus gibi ilerici miyopi, sklera gibi hastalıklarda kornea incelme (mekanik olarak zayıflamış) nerede inceltme ve arka zayıflaması istihdam olmak sklera oluşur ve büyük olasılıkla Aksiyel uzaması için katkıda bulunur. Böyle doku güçlendirilmesi için birincil hedef proteinler Kuru Ağırlık proteinler kornea ve sklera büyük çoğunluğu oluşturan fibriler collagens vardır. Tesadüfen, fibriler collagens ikinci harmonik üretimi sinyalleri doku ekstrasellüler alanda ana kaynağıdır. Bu nedenle, kollajen proteinlerin bu terapiler, cross-linking ile indüklenen gibi değişiklikler potansiyel olarak algılanabilir ve ikinci harmonik üretimi mikroskobu (SHGM) kullanımı ile quantitated. SHGM izleme bir kızılötesi uyarma ışık ile birleştiğinde mikroskobu sistem tarama bir lazer kullanılarak sinyalleri Biyomedikal bilimlerde yaygın kullanımı zevk heyecan verici bir modern görüntüleme yöntemi kaynağıdır. Böylece, mevcut çalışma ölçmek için bir yol cross-linking etkileri ex vivo tavşan sklera, bir kimyasal ajan (sT), alt-bilir’ın uzaya cross-linking enjeksiyonu takiben indüklenen gibi SHGM mikroskobu kullanımını değerlendirmek için yürütülen bir enjeksiyon yaklaşım yani oküler anestezi Oftalmolojik klinik işlemler sırasında neden için standart bir uygulama. Kimyasal ajan cross-linking, sodyum hydroxymethylglycinate (SMG), kozmetik koruyucu ajanlar (FARs) serbest formaldehit bilinen bir sınıf geliyor. SHG sinyalleri artışlar scleral değişiklikleri SMG ile reaksiyonu takip sonuçlandı ve vardiya termal denatürasyon sıcaklık ile ilişkili, değerlendirmek için standart bir yol etkileri cross-linking doku indüklenen.

Introduction

İlerici miyop öne enzimatik olmayan scleral (fotokimyasal ve/veya kimyasal), cross-linking yoluyla tedavi edilebilir olması için verilen bu kollajen enzimatik cross-linking engelleme deneysel formu yoksunluk (FD) artırabilir hangi mantıklı-indüklenen miyopi1. Elsheikh ve Phillips2 son zamanlarda ele fizibilite ve standart ultraviyole-bir ışınlama (UVA) kullanarak potansiyel-riboflavin aracılı fotokimyasal (Dresden protokolü olarak da bilinir) kısaltılmış cross-linking burada (riboflavin CXL) olarak miyopi Aksiyel uzama durdurmak posterior scleral istikrar için. Fotokimyasal bu yöntem başarıyla istikrarsızlık Keratokonus ve post-LASIK keratectasia görülen anterior küre yüzeyi (Yani, şişkin kornea) tedavisi için kullanılır. Ancak, bu CXL iletişim kuralı sklera için uygulanması gereken çok daha büyük doku yüzey alanı değiştirmek için yanı sıra bir ultraviyole (UV) ışık kaynağı ile posterior sklera erişim zorlukları ile ilgili sorunlar tarafından engelliyordu. Birden çok arka sklera bölgelerinde ki çalışma3birden çok ayrı ışınlama bölgelerinde gerekli, ancak söyleniyor, CXL yaklaşım görsel biçimde Aksiyel uzama durdurmak için oluşturulduğunu tavşan (tarsorrhaphy tarafından), yoksun. Buna karşılık, enjeksiyon sT alanı üzerinden kimyasal teskin ajan (Yani, cross-linking agent) UV ışık kaynağı tanıtmak için ihtiyaç kaçınarak posterior sklera değiştirmek için daha basit bir yolu temsil edebilir. Bu enjeksiyon tekniği iyi katarakt cerrahisi4,5,6gibi Oftalmolojik yordamları sırasında oküler anestezi inducing kullanışlı bir yol olarak bilinir. Wollensak7 daha önce gliseraldehit (bir kimyasal cross-linking agent kavramına benzer bu çalışmada açıklanan ajanlar (FARs) serbest formaldehit için) kullanarak bir sT enjeksiyon kullanımı nitelendirdi tavşan sklera ve genipin sıkın için vardır FD eskiden şiling şimdi pigs8,9Aksiyel uzunluğu sınırı gösterilmiştir. Bu müfettişler çözünür bir kimyasal ajan üzerinde fotokimyasal CXL tekniği kullanarak açık bir avantaj gösterdi. Böylece, scleral enjekte edilebilir bir kimyasal ajan FARs (Yani, TXL) dahil olmak üzere bazı tip kullanarak cross-linking10, scleral uzama miyopi içinde görülen ilerlemesini durdurmak için uygun tedavi yöntemi verebilir.

Burada sunulan iletişim kuralları kadavra tavşan gözler sklera için sT enjeksiyon yolu ile teslim bir kimyasal cross-linking çözümü sodyum hydroxymethylglycinate (SMG), kullanın. Biz daha önce topikal kimyasal kornea cross-linking için benzer iletişim kuralları hayata geçirdik. Özellikle daha önce bildirilen bu çalışmalarda, konsantrasyon etkileri cross-linking bağımlı SMG, o şeyden de termal denatürasyon analiz11 tarafından belirlenen fotokimyasal CXL ile ulaşılabilir kapsayan etkisi aralığı kullanarak elde .

Burada sT enjeksiyonları scleral doku, termal denatürasyon diferansiyel tarama Kalorimetre (DSC) ve ikinci harmonik üretimi mikroskobu (SHGM) kullanarak üzerinden teslim SMG cross-linking etkisini değerlendirmek için iletişim kurallarını açıklar.

Diferansiyel tarama Kalorimetre (DSC), Termal Analiz olarak da bilinir, bir termal denatürasyon geçiş, scleral doku olduğu çoğunlukla onlar toplu çoğunluk teşkil beri fibriler collagens özellikleri tarafından destekli ölçülür protein. Bu yöntem kollajen moleküler yapısı kararlılığını ve kollajen liflerinde, asıl Tersiyer protein yapısı stabilize çapraz bağlı Tahvil değerlendirir. DSC içinde Isıtma sırasında kritik geçiş sıcaklığı denatürasyon kollajen molekülünün üçlü sarmal, ne jelatin yaygın formları bir süreç, sökme ortaya çıkan sonuçları elde edilir. Bu termal denatürasyon kollajen molekülü boyunca hidrojen bağları bozan ve daha yüksek sıcaklıklara indüklenen cross-linking yöntemleri12,13arası kaymıştır. Bu yöntem özellikle Biyomalzeme sektöründe uzun yıllar için ve deri-yapma içeren işlemler için kullanılmıştır. Ancak, bu yöntem sklera doku çıkarılması gerektirir ve bu nedenle sadece bir ex vivo teknik olarak yararlı olabilir.

İkinci harmonik üretimi mikroskobu (SHGM) ile sigara centrosymmetric moleküler ortamlar belirli malzemelerin doğrusal olmayan optik özellikleri temel alır. Tür malzemelerin, yoğun ışık, örneğin ışık lazerler tarafından üretilen, olay ışık frekans katıdır SHG sinyalleri üretir. SHG sinyalleri oluşturmak için bilinen biyolojik kollajen, mikrotübüller ve kas myosin malzemelerdir. Örneğin, kollajen 860 nm dalga boyu bir kızılötesi ışık ile heyecanlı-ecek göndermek 430 nm dalga boyu ile görünür aralıktaki bir SHG sinyal. İkinci harmonik üretimi (SHG) sinyal görüntüleme tedavi kollajen cross-linking değerlendirmek için umut verici bir yöntemdir. Bu dokularda kollajen liflerinde SHG sinyalleri14yayarlar 30 yıldan fazla zamandır. Ancak, yakın zamanda yüksek çözünürlüklü görüntüleri15 dokular, tendon16, Cilt, kıkırdak17, kan damarlarının18, dahil olmak üzere çeşitli ve kollajen jelleri19elde edilebilir.

Bu bilgiye dayalı, bu çalışmada kollajen kimyasal olarak indüklenen SMG cross-linking aracılığıyla sklera indüklenen SHG sinyal değişiklikleri değerlendirir. Sonuçları, sklera SMG değişiklik doku kollajen lif demetleri (kollajen liflerinde oluşan yüksek sipariş dördüncül yapı) üretilen SHG sinyalleri artırır ve ayrıca kollajen bir yapısal morfolojik değişiklik üretir gösterir fiber ağ, yansıyan fiber bundle “düzleştirme içinde.”

Protocol

Tüm yordamları kullanarak kadavra tavşan gözler bozulmadan outbred tavşan başkanları içinde gerçekleştirilmiştir. Bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı tüm kurumsal ve ulusal yönergeleri takip edildi. 1. hazırlanması çözümleri TXL için SMG hazırlık: 1 mL 0,2 M konsantrasyon sodyum bikarbonat çözüm (NaHCO3) çözüm 0.0165 g 1 mL distile su içinde çözünmüş NaHCO3 tozu kullanarak hazırlayın. Toz sodyum hydroxymet…

Representative Results

Termal denatürasyon sıcaklık (Tm) etkisi cross-linking TXL değerlendirmek için bir tahlil yöntemi olarak: Toplam 16 çift tavşan gözler bu deneylerde TXL yordamı için kullanılmıştır. Bu çalışmanın ilk bir parçası, SMG cross-linking Agent kadavra tavşan kafası uzayda sT üzerinden tek bir enjeksiyon tarafından indüklenen cross-linking efekti yerelleştirmesini değerlendirilmiştir. Daha fazla yerde enjeksiyonları sklera istenen bir alanını denge…

Discussion

Yapılan deneyler sklera, gelecekteki olasılığını tedaviler cross-linking için bir izleme aracı bu tekniği kullanarak yetiştirmek etkileri cross-linking kollajen değerlendirilmesi için bir yöntem olarak SHG sinyal mikroskobu kullanımı destekleyen kanıtlar göstermiştir kollajen protein hedef. Not, bir enstrüman potansiyel olarak bu SHG sinyal yakalayabilir klinik zaten. Her ne kadar bu araç öncelikle görüntüleme cilt insan DermIS için tasarlanmıştır, bu başarılı bir şekilde görüntü kornea…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Yazarlar Tongalp Tezel, MD, istişare sT enjeksiyon ile ilgili için teşekkür ederiz; Theresa Swayne, doktora, Danışma SHG mikroskobu ile ilgili olarak; ve Jimmy Duong tasarım ve Biyoistatistik kaynak ve Biostatistical çekirdek tesisi Columbia Üniversitesi Tıp Merkezi Irving Enstitüsü.

Kısmen körlüğü önlemek için araştırma ve ulusal kurumları, sağlık hibe NCRR UL1RR024156, NEI P30 EY019007, ncı P30 CA013696 ve NEI R01EY020495 (DCP) tarafından desteklenen. Columbia Üniversitesi’nde ilgili fikri mülkiyet sahibi: verilen ABD patent no: 8,466,203 ve yok: 9,125,856. Uluslararası patent bekleyen: PCT/US2015/020276.

Görüntüleri Confocal içinde toplanan ve İhtisas mikroskobu paylaşılan kaynak-Herbert Irving kapsamlı Kanser Merkezi, Columbia Üniversitesi, NIH tarafından desteklenen hibe #P30 CA013696 (Ulusal Kanser Enstitüsü). Confocal mikroskop NIH ile satın alınmış #S10 RR025686 verin.

Materials

MILLI-Q SYNTHESIS A10 120V EMD Millipore, Massachusetts, USA Double distilled, deionized water. – protocol step 1.1.1
Sodium hydroxymethylglycinate  Tyger Chemicals Scientific, Inc. Ewing, NJ, USA Crosslinking reagent – protocol step 1.1.2
Injection needle with luer-lock syringe BD Eclipse, NJ, USA Syringe for sub tenon injection. – protocol step 2.1
Rabbit head La Granja poultry Outbred Rabbit head separated and delivered within 1 hour postmortem. – protocol step 2.2
Tono-pen  Reichter Technologies Depew, NY IOP measurements – protocol step 2.4
DSC 6000 Autosampler Perkin-Elmer Waltham, MA, USA Thermal denaturation analyzer – protocol step 7.4
Pyris software  Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA Ver 11.0  protocol step 7.5
CFI75 Apochromat LWD 25X/1.10 W MP Nikon Instruments, Melville, NY, USA A water immersionn objective with high IR transmittance with a working distance of 2.0 mm – protocol step 8.1.1.
GenTeal  Alcon, Fort Worth, TX  B000URVDQ8 Water-based gel used as objective immersion medium instead of water to prevent evaporation – 8.1.1
Chameleon Vision II  Coherent, Santa Clara,CA, USA Ti:Sapphire pulsed laser with a 140 fs pulse width at 80 MHz and a tunable range from 680 nm to 1080 nm. – protocol step 8.1.11
AttoFluor cell chamber Thermo Fisher Scientific Inc A7816 Fixation of the cover slip – protocol step 8.1.3
25-mm round coverslips, #1.5 Neuvitro Corporation, Vancouver, WA, USA GG-25-1.5 protocol step 8.1.3
Eclipse Ti-E Nikon Instruments, Melville, NY, USA protocol step 8.1.4.
Non-descanned (NDD) GaAsP detector Nikon Instruments, Melville, NY, USA Equipped with a 400-450 nm band pass filter – protocol step 8.1.7
A1R-MP laser scanning system Nikon Instruments, Melville, NY, USA Compatible with infrared (IR) multi-photon excitation. – protocol step 8.1.8
NIS Elements software Nikon Instruments, Melville, NY, USA Ver 4.3 refered to as "software" in the text – protocol step 8.1.9
Fiji/ImageJ National Institute of Health  protocol step 9.1.2
NeuronJ Eric Meijering, Erasmus University Medical Center, Rotterdam, The Netherlands https://imagescience.org/meijering/software/neuronj/, for protocol step 9.2.2
Microsoft Excel  Microsoft Corporation, Redmond, WA, USA Ver 14 protocol step 9.2.8
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. McBrien, N. A., Norton, T. T. Prevention of collagen crosslinking increases form-deprivation myopia in tree shrew. Exp Eye Res. 59 (4), 475-486 (1994).
  2. Elsheikh, A., Phillips, J. R. Is scleral cross-linking a feasible treatment for myopia control?. Ophthalmic Physiol Opt. 33 (3), 385-389 (2013).
  3. Dotan, A., et al. Scleral cross-linking using riboflavin and ultraviolet-a radiation for prevention of progressive myopia in a rabbit model. Exp Eye Res. 127, 190-195 (2014).
  4. Canavan, K. S., Dark, A., Garrioch, M. A. Sub-Tenon’s administration of local anaesthetic: a review of the technique. Br J Anaesth. 90 (6), 787-793 (2003).
  5. Guise, P. Sub-Tenon’s anesthesia: an update. Local Reg Anesth. 5, 35-46 (2012).
  6. Ahn, J. S., et al. A sub-Tenon’s capsule injection of lidocaine induces extraocular muscle akinesia and mydriasis in dogs. Vet J. 196 (1), 103-108 (2013).
  7. Wollensak, G., Redl, B. Gel electrophoretic analysis of corneal collagen after photodynamic cross-linking treatment. Cornea. 27 (3), 353-356 (2008).
  8. Liu, T. X., Wang, Z. Collagen crosslinking of porcine sclera using genipin. Acta Ophthalmol. 91 (4), e253-e257 (2013).
  9. Wang, M., Corpuz, C. C. Effects of scleral cross-linking using genipin on the process of form-deprivation myopia in the guinea pig: a randomized controlled experimental study. BMC Ophthalmol. 15, 89 (2015).
  10. Babar, N., et al. Cosmetic preservatives as therapeutic corneal and scleral tissue cross-linking agents. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (2), 1274-1282 (2015).
  11. Kim, S. Y., et al. Evaluating the Toxicity/Fixation Balance for Corneal Cross-Linking With Sodium Hydroxymethylglycinate (SMG) and Riboflavin-UVA (CXL) in an Ex Vivo Rabbit Model Using Confocal Laser Scanning Fluorescence Microscopy. Cornea. 35 (4), 550-556 (2016).
  12. da Cruz, L. G., Moraes, G. D. A., Nogueira, R. F., Morandim-Giannetti, A. D. A., Bersanetti, P. A. DSC characterization of rabbit corneas treated with Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville extracts. Journal of Thermal Analysis and Calorimetry. , (2017).
  13. Bersanetti, P. A., et al. Characterization of Rabbit Corneas Subjected to Stromal Stiffening by the Acai Extract (Euterpe oleracea). Curr Eye Res. 42 (4), 528-533 (2017).
  14. Freund, I., Deutsch, M. Second-harmonic microscopy of biological tissue. Opt Lett. 11 (2), 94 (1986).
  15. Campagnola, P. J., Loew, L. M. Second-harmonic imaging microscopy for visualizing biomolecular arrays in cells, tissues and organisms. Nat Biotechnol. 21 (11), 1356-1360 (2003).
  16. Williams, R. M., Zipfel, W. R., Webb, W. W. Interpreting second-harmonic generation images of collagen I fibrils. Biophys J. 88 (2), 1377-1386 (2005).
  17. Mansfield, J., et al. The elastin network: its relationship with collagen and cells in articular cartilage as visualized by multiphoton microscopy. J Anat. 215 (6), 682-691 (2009).
  18. Tsamis, A., Krawiec, J. T., Vorp, D. A. Elastin and collagen fibre microstructure of the human aorta in ageing and disease: a review. J R Soc Interface. 10 (83), 20121004 (2013).
  19. Raub, C. B., et al. Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy. Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).
  20. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  21. Meijering, E., et al. Design and validation of a tool for neurite tracing and analysis in fluorescence microscopy images. Cytometry A. 58 (2), 167-176 (2004).
  22. Zyablitskaya, M., et al. Evaluation of Therapeutic Tissue Crosslinking (TXL) for Myopia Using Second Harmonic Generation Signal Microscopy in Rabbit Sclera. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (1), 21-29 (2017).
  23. Steven, P., Muller, M., Koop, N., Rose, C., Huttmann, G. Comparison of Cornea Module and DermaInspect for noninvasive imaging of ocular surface pathologies. J Biomed Opt. 14 (6), 064040 (2009).
  24. Han, M., Giese, G., Bille, J. F. Second harmonic generation imaging of collagen fibrils in cornea and sclera. Optics Express. 13 (15), 5791-5797 (2005).
  25. Wang, B. G., Konig, K., Halbhuber, K. J. Two-photon microscopy of deep intravital tissues and its merits in clinical research. J Microsc. 238 (1), 1-20 (2010).
  26. Teng, S. W., et al. Multiphoton autofluorescence and second-harmonic generation imaging of the ex vivo porcine eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 47 (3), 1216-1224 (2006).
  27. Rao, R. A., Mehta, M. R., Leithem, S., Toussaint, K. C. Quantitative analysis of forward and backward second-harmonic images of collagen fibers using Fourier transform second-harmonic-generation microscopy. Opt Lett. 34 (24), 3779-3781 (2009).
  28. Morishige, N., Petroll, W. M., Nishida, T., Kenney, M. C., Jester, J. V. Noninvasive corneal stromal collagen imaging using two-photon-generated second-harmonic signals. J Cataract Refract Surg. 32 (11), 1784-1791 (2006).
  29. Aptel, F., et al. Multimodal nonlinear imaging of the human cornea. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (5), 2459-2465 (2010).
  30. Winkler, M., et al. Nonlinear optical macroscopic assessment of 3-D corneal collagen organization and axial biomechanics. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 8818-8827 (2011).
  31. Morishige, N., Takagi, Y., Chikama, T., Takahara, A., Nishida, T. Three-dimensional analysis of collagen lamellae in the anterior stroma of the human cornea visualized by second harmonic generation imaging microscopy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (2), 911-915 (2011).
  32. Gore, D. M., et al. Two-photon fluorescence microscopy of corneal riboflavin absorption. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (4), 2476-2481 (2014).
  33. Park, C. Y., Lee, J. K., Chuck, R. S. Second Harmonic Generation Imaging Analysis of Collagen Arrangement in Human Cornea. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (9), 5622-5629 (2015).
  34. Quantock, A. J., et al. From nano to macro: studying the hierarchical structure of the corneal extracellular matrix. Exp Eye Res. 133, 81-99 (2015).
  35. Morishige, N., et al. Quantitative analysis of collagen lamellae in the normal and keratoconic human cornea by second harmonic generation imaging microscopy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8377-8385 (2014).
  36. Morishige, N., et al. Second-harmonic imaging microscopy of normal human and keratoconus cornea. Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (3), 1087-1094 (2007).
  37. Steven, P., Hovakimyan, M., Guthoff, R. F., Huttmann, G., Stachs, O. Imaging corneal crosslinking by autofluorescence 2-photon microscopy, second harmonic generation, and fluorescence lifetime measurements. J Cataract Refract Surg. 36 (12), 2150-2159 (2010).
  38. Bueno, J. M., et al. Multiphoton microscopy of ex vivo corneas after collagen cross-linking. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (8), 5325-5331 (2011).
  39. McQuaid, R., Li, J. J., Cummings, A., Mrochen, M., Vohnsen, B. Second-Harmonic Reflection Imaging of Normal and Accelerated Corneal Crosslinking Using Porcine Corneas and the Role of Intraocular Pressure. Cornea. 33 (2), 125-130 (2014).
  40. Laggner, M., et al. Correlation Between Multimodal Microscopy, Tissue Morphology, and Enzymatic Resistance in Riboflavin-UVA Cross-Linked Human Corneas. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (6), 3584-3592 (2015).
  41. Chai, D., et al. Quantitative assessment of UVA-riboflavin corneal cross-linking using nonlinear optical microscopy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4231-4238 (2011).
  42. Scarcelli, G., et al. Brillouin microscopy of collagen crosslinking: noncontact depth-dependent analysis of corneal elastic modulus. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (2), 1418-1425 (2013).
  43. Shao, P., Besner, S., Zhang, J., Scarcelli, G., Yun, S. H. Etalon filters for Brillouin microscopy of highly scattering tissues. Opt Express. 24 (19), 22232-22238 (2016).
  44. Kumar, C. M., McNeela, B. J. Ultrasonic localization of anaesthetic fluid using sub-Tenon’s cannulae of three different lengths. Eye (Lond). 17 (9), 1003-1007 (2003).
  45. Winder, S., Walker, S. B., Atta, H. R. Ultrasonic localization of anesthetic fluid in sub-Tenon’s, peribulbar, and retrobulbar techniques. J Cataract Refract Surg. 25 (1), 56-59 (1999).
  46. Ripart, J., Eledjam, J. J. [Locoregional anesthesia for ophthalmic surgery: unique episcleral injection (sub-tenon) in the internal canthus]. Ann Fr Anesth Reanim. 17 (4), Fi72-Fi74 (1998).
  47. Meek, K. M., Hayes, S. Corneal cross-linking–a review. Ophthalmic Physiol Opt. 33 (2), 78-93 (2013).
  48. Wollensak, G., Spoerl, E. Collagen crosslinking of human and porcine sclera. J Cataract Refract Surg. 30 (3), 689-695 (2004).
  49. Paik, D. C., Wen, Q., Airiani, S., Braunstein, R. E., Trokel, S. L. Aliphatic beta-nitro alcohols for non-enzymatic collagen cross-linking of scleral tissue. Exp Eye Res. 87 (3), 279-285 (2008).

Tags

Second Harmonic GenerationSHGMicroscopyScleraTXLMyopiaCollagenSub-tenon’s InjectionFormaldehydeDifferential Scanning CalorimetryNon-invasiveRabbit EyeEyelid SpeculumConjunctivaExtra Ocular MusclesScleral InsertionPBSObjective LensNumerical ApertureImmersion Gel

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Zyablitskaya, M., Munteanu, E. L., Nagasaki, T., Paik, D. C. Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia. J. Vis. Exp. (131), e56385, doi:10.3791/56385 (2018).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image