प्रौढ़ त्वचा से प्राथमिक मानव Keratinocytes की पीढ़ी और संवर्धन
Summary
मानव त्वचा बाहरी पर्यावरण के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति के रूप में कार्य करता है । हम वयस्क त्वचा से प्राथमिक मानव keratinocytes अलग करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं । इन अलग keratinocytes कई प्रयोगात्मक setups में उपयोगी होते हैं, और एक अति उपयुक्त मॉडल है इन विट्रो मेंचर्म जीव विज्ञान में आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए।
Abstract
keratinocytes के मुख्य समारोह के लिए एपिडर्मिस की संरचनात्मक अखंडता प्रदान करना है, जिससे बाहर की दुनिया के लिए एक यांत्रिक बाधा बनाए रखने । इसके अलावा, keratinocytes दीक्षा, रखरखाव में एक अनिवार्य भूमिका निभाते हैं, और एपिडर्मल प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के विनियमन जंमजात प्रतिरक्षा प्रणाली का हिस्सा होने से एक तेजी से, विशिष्ट तरीके से प्रतिजनी उत्तेजनाओं का जवाब । यहां, हम वयस्क त्वचा से प्राथमिक मानव keratinocytes के अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है, और प्रदर्शित करता है कि इन कोशिकाओं को कैल्शियम प्रेरित टर्मिनल भेदभाव का जवाब है, के रूप में भेदभाव मार्कर involucrin की वृद्धि की अभिव्यक्ति द्वारा मापा । इसके अलावा, हम बताते हैं कि अलग keratinocytes p38 MAPK मार्ग के सक्रियण द्वारा मापा के रूप में intracellular संकेतन रास्ते के IL-1β-प्रेरित सक्रियण के लिए उत्तरदायी हैं. एक साथ लिया, हम अलगाव और वयस्क त्वचा से प्राथमिक मानव keratinocytes के संवर्धन के लिए एक विधि का वर्णन । क्योंकि keratinocytes एपिडर्मिस में प्रमुख कोशिका प्रकार के होते हैं, इस विधि के लिए त्वचा संबंधी जीव विज्ञान में आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है इन विट्रो।
Introduction
त्वचा मानव शरीर का सबसे बड़ा अंग है और बाहरी वातावरण के खिलाफ एक सुरक्षात्मक अवरोध के रूप में कार्य करता है । त्वचा दो मुख्य परतों से बना है: dermis और एपिडर्मिस, जहां एपिडर्मिस त्वचा की बाहरी परत का गठन । एपिडर्मिस में सबसे प्रचुर मात्रा में कोशिका प्रकार कोशिका द्रव्यमान1,2के ९५% से अधिक शामिल keratinocytes है । keratinocytes एपिडर्मिस में भेदभाव के विभिंन चरणों में बनाए रखा है और बेसल में आयोजित कर रहे हैं, रीढ़ की हड्डी, दानेदार, और cornified परतों है कि भेदभाव के विशिष्ट चरणों के अनुरूप3। keratinocytes के प्राथमिक कार्य के लिए एपिडर्मिस की संरचनात्मक अखंडता प्रदान करना है, जिससे बाहर की दुनिया के लिए एक बरकरार बाधा उत्पादन ।
keratinocytes भी त्वचा में रोगजनकों के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति का प्रतिनिधित्व करते हैं, और इसलिए जंमजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया4में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते है,5। बाहरी उत्तेजनाओं के लिए keratinocytes के जोखिम intracellular संकेतन रास्ते के सक्रियण और बाद में, साइटोकिंस, chemokines, और रोगाणुरोधी पेप्टाइड्स सहित विभिन्न भड़काऊ मध्यस्थों की एक संख्या के उत्पादन की ओर जाता है । इन keratinocyte-व्युत्पन्न प्रोटीन की भर्ती और सक्रिय प्रतिरक्षा कोशिकाओं जैसे वृक्ष कोशिकाओं, न्यूट्रोफिल, और विशिष्ट टी कोशिकाओं6,7के द्वारा भड़काऊ प्रतिक्रिया में भाग लेते हैं । इस प्रकार, क्योंकि keratinocytes कई जैविक प्रक्रियाओं में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, यहां प्रस्तुत तकनीक के पीछे तर्क को एक इन विट्रो मॉडल में उत्पंन करने के लिए त्वचा जीवविज्ञान का अध्ययन किया गया । प्राथमिक keratinocyte नवजात चमड़ी से प्राप्त संस्कृतियों अक्सर त्वचा जीवविज्ञान8,9अध्ययन किया जाता है । हालांकि, यहां वर्णित तकनीक के साथ, दोनों लिंगों से keratinocytes कोशिकाओं की एक उच्च जैव विविधता में जिसके परिणामस्वरूप प्राप्त कर रहे हैं ।
यहां, हम और keratinocytes के रखरखाव और ठंड सहित वयस्क त्वचा से प्राथमिक मानव keratinocytes के अलगाव और पीढ़ी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस विधि का समग्र लक्ष्य प्राथमिक मानव keratinocytes है कि एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है उत्पंन करने के लिए त्वचा विज्ञान इन विट्रो मेंजीवविज्ञान का अध्ययन है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां, हम वर्णन कैसे आसानी से वयस्क त्वचा से प्राथमिक मानव keratinocytes अलग करने के लिए, और कैसे उंहें संस्कृति के लिए इन विट्रो में। इस मॉडल एपिडर्मल सेल जीव विज्ञान की जांच के लिए एक व्यापक अनुप्रयोग हो सकत?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक को उनके तकनीकी समर्थन के लिए Annette बलैक Rasmussen और Kristine Moeller शुक्रिया अदा करना चाहता है
Materials
| KSFM | ThermoFisher Scientific | 17005-034 | Cell culture medium |
| KSFM supplements | ThermoFisher Scientific | 37000-015 | Supplements for KSFM |
| DPBS | ThermoFisher Scientific | 14190-144 | DPBS without Calcium and Magnesium |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D8418 | Dimethyl sulfoxid |
| Gentamycin | ThermoFisher Scientific | 15710-049 | Cell culture medium additive |
| Sterilization filter | Sartorius | 16534 | Syringe filter with a pore size of 0.2 µm |
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T7409 | Used to trypsinize cells |
| Glucose | Sigma-Aldrich | G7528 | – |
| RPMI-1640 | ThermoFisher Scientific | 61870-010 | – |
| FBS | ThermoFisher Scientific | 16000044 | Used to inactivate trypsin |
| Forceps | – | – | Forceps from any company can be used |
| Scissors | – | – | Scissors from any company can be used |
| Scalpel | Swann Morton | 0501 | Scalpels from any company can be used |
| 70% ethanol | – | – | – |
| Gauze pads | NOBAMED | 875420 | Gauze pads from any provider can be used |
| Foot planer | Credo Solingen | 1510 | Foot planer from any provider can be used |
| Petri dishes | TPP | 93100 | Petri dishes from any provider can be used |
| Metal filter | – | – | In-house 1 mm hole size metal filter |
| 75 cm2 culture flasks | NUNC | 156499 | – |
| 150 cm2 culture flasks | TTP | 90151 | – |
| 0.05% Trypsin-EDTA solution | ThermoFisher Scientific | 25300-062 | Used to trypsinize cells when passaging |
Referências
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