골 Adipocytes 차별화에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과

Summary

여기, 우리 골 adipocytes에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과 보여준다 종양 세포와 골 adipocytes, 사이 상호 작용을 공부 하기 위한 안정적이 고 간단한 2 차원 (2D) coculture 시스템 제시 차별화 및 뼈 전이의 기계 론 적인 연구에 대 한 전통적인 방법 포즈.

Abstract

골 adipocytes와 종양 세포 사이 누화 뼈 전이 하는 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다. 다양 한 방법 공부 하는 중요 한 누화; 사용할 수 있습니다. 그러나, coculture에 대 한 2 차원 transwell 시스템은 고전적인, 신뢰할 수 있는, 그리고이 누화 연구에 대 한 쉬운 방법 남아 있다. 여기, 우리 골 adipocytes 및 흑색 종 세포의 coculture을 보여 주는 자세한 프로토콜을 제시. 그럼에도 불구 하 고, 이러한 coculture 시스템 수 골 adipocytes에 의해 유도 된 암 세포의 세포 신호 transductions의 연구에 기여할 뿐만 아니라 또한 기계적으로 뼈에 대 한 새로운 치료 목표를 드러낼 수 있는 뼈 전이의 연구 전이입니다.

Introduction

뼈 전이 고급 암 환자 중 광범위 하지만 치료 치료는 아직 사용할 수 없습니다. 지방으로 에너지를 저장 전문, 넘어 adipocytes 골 수 및 다른 장기^1,2,,34,,56에서 종양 성장 및 전이 지원할 수 있습니다. 또한, adipocytes 암 세포 생물학^7,,89,10 및 대사^{4,11,12 조절에 필수적인 역할을 재생 ,13,14,,1516}, 잘에서 뼈 전이^1,,412로. 골 틈새, adipocytes도 암 세포^4,,617의 생물 학적 행동을 달라질 수 있습니다. 골 adipocytes osteotropism와 암 세포 사이 상호 작용에 대 한 뼈 전이의 이해 중요 하다. 그러나, 약간은 알려진 다.

현재 연구를 바탕으로, 다양 한 방법은 adipocytes, 2 또는 3 차원 (2/3 차원)와 비보 전 문화^{17,,1819,20,21}을 포함 하 여 적용 됩니다. 최근, Herroon 그 외 여러분 암 세포²²골 adipocytes의 상호 작용을 공부 하는 새로운 3D 문화 접근 방식을 설계 되었습니다. 3D coculture는 생리를 흉내 낸 위한 최적의 adipocytes와 암 사이 상호 작용 세포 vivo에서, 그것은 가난한 재현성^22,23에서 고통. 2D coculture 시스템에 비해 3D coculture 시스템 셀 형태학^{21,22,,2425,26}같은 다른 세포질 고기를 제공할 수 있습니다. 또한, 고립 된 수가 뼈 조직 파편의 비보 전 문화 adipocytes의 강력한 파생물 교양된 골 셀¹⁷에서 발생할 수 있습니다.

그러나 이러한 이전 모델과 달리, 2D 셀 문화 모델 남아 있다 고전, 안정적이 고 쉽게 기술 생체 외에서^{1, 세포를 신속 하 게 스캔 후보 분자와 고기 adipocytes 또는 암에 변경에 대 한 4,6,12,,1527}. 더 잘 이해 하려면 골 adipocytes와 흑색 종 세포 사이 누화, 우리 흑색 종 세포와 골 adipocytes의 2D coculture 시스템에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

Protocol

참고:이 프로토콜에서 사용 하는 모든 셀 냉동된 재고 셀에서 녹고 후 적어도 3 세대에 대 한 성장 해야 합니다. 1. 수확 흑색 종 세포 파생 요소 준비 B16F10 세포 및 마우스 흑색 종 세포 라인을 얻을.참고:이 프로토콜에 대 한 마우스 흑색 종 세포 선 과학의 중국 아카데미의 줄기 세포 은행에서 얻은 했다. B16F10 세포 배양 (100 mL)에 대 한 ?…

Representative Results

골 수에서 adipocytes 녹는 요인을 통해 종양 진행을 지원 하기 위한 초기 단계에서 종양 microenvironment1,13,33,,3435 에 나타날 수 있습니다 또는 osteoclastogenesis6,,1236, 특히 비만<sup class="x…

Discussion

Cocultures 삽입과 셀 상호 작용을 공부 하 널리 사용 되었습니다. 2D coculture 시스템 어떻게 두는 우리가 여기 골 adipocytes에 두 개의 다른 암 세포 기반 효과 보여주는 누화에서 생체 외에서부품을 관찰 하는 효과적인 방법입니다. 많은 연구소는 adipocytes 및 암 세포^6,12,,2739사이 누화를 조사 하기 위?…

Materials

DMEM	Invitrogen Inc.	11965092
Fetal Bovine Serum	Invitrogen Inc.	16000–044
Phosphate Buffered Saline	Invitrogen Inc.	14190-144
Insulin	Sigma-Aldrich	91077C
3-isobutyl-1-methyl-xanthine	Sigma-Aldrich	I5879
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D4902
Oil Red o	Sigma-Aldrich	O0625
24-well plate	Corning	CLS3527
Transwell insert	Millipore	MCHT24H48
Penicillin/Streptomycin	Invitrogen	15140-122
isopropanol	Sigma-Aldrich	I9516
0.25% trypsin	Thermo Scientific	25200056
hemocytometer	Bio-Rad	1450016
Culture incubator	Thermo Scientific
50ml falcon	Corning	CLS430828
Clean Bench	Thermo Scientific	–
Microscopy	Olympus	–
200 μL pipet tips	BeyoGold	FTIP620
1000 mL pipet tips	BeyoGold	FTIP628