Implantação de enxertos vasculares Electrospun com estrutura otimizada em um modelo do rato

Resumo

Aqui, apresentamos um método eletrofiação modificado para fabricar enxertos vasculares PCL com fibras grossas e poros dilatados e descrever um protocolo para avaliar o desempenho na vivo em um modelo do rato de substituição da aorta abdominal.

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para fabricar se enxerto vascular de PCL e descrever um protocolo de avaliação, usando um modelo do rato de substituição da aorta abdominal. Os enxertos vasculares electrospun muitas vezes possuem relativamente pequenos poros, que limitam a infiltração de células os enxertos e dificultam a regeneração e remodelação das artérias-neo. Neste estudo, enxertos vasculares PCL com fibras mais grossas (5-6 µm) e poros maiores (~ 30 µm) foram fabricados usando uma técnica de processamento modificado. O desempenho a longo prazo do enxerto foi avaliado pela implantação de um modelo de aorta abdominal de ratos. Análise de ultrassom mostrou que os enxertos permaneceram patentes sem aneurisma ou estenose ocorrendo mesmo após 12 meses da implantação. Estrutura se melhorou o crescimento celular e assim promovido o tecido regenerado em 3 meses. Mais importante, não havia nenhum sinal de remodelação adversos, tais como calcificação na parede do enxerto após 12 meses. Portanto, enxertos vasculares de electrospun PCL com modificados se processamento têm potenciais para ser um substituto de artéria para implantação de longo prazo.

Introdução

Enxertos vasculares feitos de polímeros sintéticos são amplamente utilizados na clínica para o tratamento de doenças cardiovasculares (doenças cardiovasculares). Infelizmente, no caso de enxertos vasculares de pequeno diâmetro (D < 6mm) não há nenhuma produtos de sucesso disponíveis devido a baixa permeabilidade desencadeada pela velocidade do fluxo de sangue reduzido, que muitas vezes leva a trombose, hiperplasia da íntima e outros complicações¹.

Engenharia de tecidos fornece uma estratégia alternativa para realizar a patência a longo prazo e homeostase baseado na reconstrução e regeneração vascular andaime....

Protocolo

O uso de animais experimentais foi aprovado pela Animal experiências éticas Comitê de Nankai University e realizado em conformidade com o guia para o cuidado e uso de animais de laboratório.

1. fabricação de enxertos Electrospun PCL

Nota: Neste documento, uma técnica de eletrofiação foi utilizada para fabricar os enxertos vasculares.

1. Preparar soluções PCL de 25% em peso e 10% em peso, dissolvendo PCL em uma mistura de metanol e clorofórmio, respectivamente, (relação de volume de 1:5), à temperatura ambiente (RT) para 12 h.
2. Carrega a solução PCL em uma seringa de vidro de 10 mL.
3. Coloq....

Resultados

Os enxertos PCL foram explantados em 3 meses e 12 meses de pós-operatório e analisaram por técnicas histológicas padronizadas de hematoxilina e eosina (H & E), corante tricromo de Masson, Verhoeff-van Gieson (Wagner), Von Kossa e mancha para α-SMA, MYH, vWF e elastina. As imagens histológicas foram tiradas usando um microscópio na posição vertical, e as imagens de imunofluorescência foram tiradas usando um microscópio fluorescence.

Discussão

Infiltração de células é fundamental para a regeneração e remodelação do enxerto vascular na vivo¹⁶. Infiltração de célula limitada é muitas vezes relacionada com os poros relativamente pequenos do enxerto que dificultam a migração de células na parede da prótese. Para resolver esta dificuldade, desenvolvemos um método modificado para preparar enxertos vasculares de electrospun PCL com estrutura de poros grandes. No detalhe, o tamanho dos poros aumentou com o aumento da espessura da fibra.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pellets de poli (ε -caprolactona) (PCL) (M < sub > n < / sub> = 80.000)	Sigma	704067
Metanol	Tianjin Chemical Reagent Company	1060
Álcool	Tianjin Chemical Reagent Company	1083
Clorofórmio	Tianjin Chemical Reagent Company	A1007
Sacarose	Tianjin Fengchuan Empresa	2296
Triton X-100	Alfa Aesar	A16046
Ratos Sprague Dawley	Centro Animal de Laboratório da Academia de Ciências
Solução salina normal	Hebei Tiancheng Empresa
Hidrato de cloral	Tianjin Ruijinte empresa química	2223
Injeção de heparina sódica			Tianjin Biochem
Injeção de sulfato de gentamicina	Jiangsu Lianshui Pharmaceutical company
Anticorpo primário anti-alfa-SMA de camundongo	Abcam	ab7817
Anticorpo primário anti-liso MYH de camundongo	Abcam ab683
Anticorpo policlonal de elastina de rato de coelho	Abcam ab23748
Anticorpo primário do fator anti-von Willebrand de coelho	Abcam	ab6994
IgG anti-camundongo de cabra (Alexa Fluor 488)	Invitrogen	ab150117
IgG anti-coelho de cabra (Alexa Fluor 488)	Invitrogen	ab150077
5% soro de cabra normal	Zhongshan Ponte dourada	ZLI9022
Hematoxilina e eosina (H & E)	Pequim leagene biotecnologia	DH0006
tricrômico de Masson	Pequim leagene biotecnologia	DC0032
Verhoeff-van Gieson (VVG)	Pequim leagene biotecnologia	DC0059
Von Kossa	Pequim leagene biotecnologia	DS0003
Agulhas de suturas cirúrgicas com fio, 3-0 seda	Xangai Jinhuan empresa de suprimentos médicos	G3002b
Agulhas de suturas cirúrgicas com fio, 9-0 seda	Shanghai Jinhuan empresa de suprimentos médicos	H901

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